血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定

1、血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定1. 实验原理国际临床化学学会（IFCC）推荐的紫外连续监测法。ALTL-丙氨酸+ 一酮戊脱氢酸丙酮酸+ L-谷氨酸丙酮酸 + NADH + H +L-孚L酸 + NAD+ + H 2O加入磷酸吡哆醛（P-5-P ）是为了稳定ALT活性，避 免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏 低。（如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果）12. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3. 标本存放：3天内的活性损失：28 C保存：10%;1525 C保存：17%;标本稳定性：-20 C保存至少可稳 定4周。4. 标本运输

2、：常温条件下保存运输5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6. 实验材料6.1试剂 奥林巴斯ALT测定试剂盒 试剂1 +试剂26.1.1 试剂准备：试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于28 C ,若无污 染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度， 或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继 续使用。6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措 施使用试剂。6.2校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分 析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控

3、品.SOP 文件。6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化 分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化 分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限， 3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参 见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以TruCal U 复合校准品ALT校准值校准 仪器

4、后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。12.参考值范围4不含磷酸吡哆醛含磷酸吡哆醛女性V31U/L1035U/L男性 V41U/L1050U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。13. 临床意义1,2:丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙 转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草 转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基 转移酶催化氨基从氨基酸转移给一酮酸的反应。ALT是肝 脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平 的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都

5、有关。 因此同时进行ALT和AST的检测，可用于鉴别肝损伤和 心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率用于肝病的鉴别诊断。 比率1预示中度的肝损伤；比率1和严重肝病有关，常 见慢性肝病。14. 操作性能14.1 线性范围4800U/L14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方 法，AU2700批内精密度小于3%,总精密度小于3%。用于 分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则不含磷酸吡哆醛批内精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)天间精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)样品122.80.703.08样品122.21.386.22样品242.60.681

6、.60样品244.81.172.62样品399.30.920.92样品31011.021.00含磷酸吡哆醛批内精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20X(U/L)s(U/L)CV(%)样品133.30.992.96样品133.81.253.71样品272.11.361.88样品272.02.042.83样品31331.761.32样品31282.772.1614.3 方法学比较：不含磷酸吡哆醛本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒（y）与某商品化试剂盒(x),同时对78个样品进行ALT活力检测，将检测 结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L;r=0.9

7、99。含磷酸吡哆醛本公司含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂 盒(x)，同时对80个样品进行ALT活力检测，将检测结 果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r=0.994。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为4U/L。14.5 病人结果可报告范围 4U/L-800U/L15. 超出范围结果处理 本法对ALT活力检测的最大A/min 在 340、334nm 为 0.16,在 365nm 为 0.08。当样品 测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1 : 9 稀释，重新测定，结果乘以10。16. 病危报警值的处理17. 方法局限性17.1 本法对ALT活力检测

8、的最大厶A/mi n 在340、334nm 为0.16,在365 nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1: 9稀释，重新测定，结果乘以10。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度乞1704mol/L， 胆红素浓度兰684mol/L，血红蛋白浓度兰4.00g/L，甘油三酯浓度乞22.6mmol/L 时没有观察到干扰。18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家 进行维修。19. 参考文献1. Thomas L.Ala nineami notra nsferase(ALT),Aspartate aminotran sferase(AST).In:Thom

9、as L,editor. Cli ni cal LaboratoryDiag no stics.1st ed.Fran kfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.55-65.2. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook ofCli nical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia:W. B.Sau nders Compa ny; 1999. P.617-721.3. Bergmey

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