第六章第二节食品中致病球菌的检验1.

1、第六章食品中病原菌的检验金黄葡萄球菌及其检验金黄色葡萄球菌及其检验金黄色葡萄球菌属于微球菌科葡萄球菌属，金黄色葡萄球菌是该属 中的一个种.引起 人类疾病的葡萄球菌主要是金黄色葡萄球菌, 除可弓I起皮肤组织炎症夕卜，还可产生月勿毒素. 如果该菌在食品中大量生长繁殖，产生毒素， 人误食了 含有毒素的食品，就会发生食物中 毒，因此，由 该菌引 起的中 毒为毒素型食物中 毒.食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康 是一种潜在威胁，所以检验食品中的金黄葡 萄球菌及数量具有实际意义.主要内容一 金黄色葡萄球菌的生物学特性N茶单9盅n験晞g迪型m対寸 纟賀魏农z東二h形态与染色：(staphylococcus

2、aureus)典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0. 8 “ hi左右，显微镜下排列成葡萄串状。I金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无 荚膜。1革兰氏染色阳性。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直悝0.mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。葡萄球菌革兰染色镜下图为-3、培养特性血淸学分型:分：蛋白抗原和多榕抗原获得两种抗尿成蛋白抗原主耍为葡萄球菌A蛋白(SPA), 是一种表面抗原，90%以上金黄色葡萄球菌 有此抗尿，无特异性。多搪抗原为半抗原，有型特异性。 菌体分型揭血浆擬金黄色葡萄球营养要求不高,在普通培养基上生长 骯好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37 C，最适生长pH 7. 4O1金黄色葡萄球有高度

3、的耐盐性,可在0_15%NaCl肉汤中生长1 在肉汤培养基中生长迅速，37C，培养后24h,呈均匀浑浊生长，延长培养时间，管底出现少量沉淀，轻轻振揺，沉淀物上升，旋即消散，培养2-3d后可形成很薄的环，在管底则形成多量粘稠沉淀。3.培养特性I葡萄球在普通营养琼脂平板上培养2 4-48h后，可形成形凸起.边沿整齐.表面光滑.湿润.有光泽.不透明的直径1-2mm。可产生不同 的色素。如金黄. 柠檬，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只限于培养物，而不夕卜渗至培养基中。1金黄色葡萄球在血平板上形成的大，多数致病菌株可产生溶血毒素，菌落周围形成透明的溶血圈（0溶血圈），致病性球贝!J无此现象金黄色葡萄球菌

4、的平板菌落照片（普通培养基）4.生化特性萄球大多数菌株可分解葡萄糖、麦芽糖.乳糖.蔗糖，产酸不产气。病菌株多，能分解甘露醇产酸。基红反应阳丿|生，VP反应昌昌阳性。株可分解精氨酸,水解尿素产氨,还原硝酸盐，液化明胶。黄色葡萄球有较強的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素.红霉素 等高度敏感。金黄色葡萄球菌在甘露醇盐平板上的菌落5e毒素与酶产生的毒素和侵袭性酶。产生的毒素和酶主要有 下列几种：(1)溶血奉素：夕卜毒素，可使动物红细胞溶解，培养日寸出现溶按抗原性不同,至少有a、B、8五种，对人类致病作用的主要是a溶血素。a溶血素是一种夕卜毒素,有良好的抗原性。经甲醛处理可制成类毒素。5e毒素与

5、酶(2)杀白细胞素:使寄主白细胞崩解死亡，是一种毒片生蛋白。(能杀死人和兔的多形核粒细胞和 巨噬细胞。此毒素有抗原性，不耐热,体能利L止葡萄球感染的复发。产生的抗)5.毒素与酶(3)肠奉素:金黄色葡萄球育邑产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质4生月勿毒素，分为A.B. Cl. C2 . D. E及F六种血清型。该毒素为一种可溶性蛋白质，耐热，100C30分 钟不破坏。肠毒素可引起急性胃肠炎即食 物中毒，以A型引起的食物中毒最多o（4） 血浆凝固酶：血液凝固的本质是血浆内的可加入枸椽酸钠，可与血浆中 的钙离子结合成不解离的 枸样酸钙,擬血酶不能形成，血凝的化学反应不能进 行 血浆擬固酶是負邑使含有枸椽

6、酸钠或肝素抗凝剂 的人或兔血浆发生凝 固 的酶类物质，致病菌株多能 产生，如金黄葡萄球菌。常作为鉴别葡萄球菌有夭 致病性的鱼要标志。当 金黄色葡萄球菌侵入人体时,凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。同时，凝固酶集 的作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关。周,(5) 溶纤维蛋白酶可使人及家兔、犬的已凝固的纤维蛋白溶 解。溶纤维蛋白酶是一种激酶，可激活血浆蛋 白酶原成为血浆蛋白酶而使纤维蛋白溶解。初 次培养后，菌落周围若出现一个不透明圈，表 示产生凝固酶； 继续培养时，不透明圈消失， 说明是溶纤维蛋白酶作用的结果。(6) 透明质酸酶透明质酸酶具有髙度的粘稠性，Jt机体结 缔组织中基质的主要成分。它

7、被透明质酸酶水 解后，结缔 组织细胞间失去粘性JgJSSl松状态， 有利于细菌和毒素在机体穴扩散，因此透明质 酸酶又称为扩散 因子。5e毒素与(7)脱氧核榕核酸酶金黄色葡萄球产生的脱氧核糖核酸酶能萄球可用来作为依据鉴定金黄色葡(8)其它葡萄球还可以产生表皮溶解毒素蛋白酶.磷酸酶.卵磷脂酶.脂酶、肽酶等,使细有侵袭力。6.抵抗力金黄色葡萄球对热和干燥的抵抗力较一般无芽胞细強，加热80C30分钟才被杀死。在干燥的脓汁. 痰液中可存活2-3月。5%石炭酸中10-15分钟死亡。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生 长。对青雷素、红雷素和庆大雷素高度敏 感，但易产生耐药性。(1)引起的主要疾

8、病如毛囊炎、疗、痈.伤口化脓.气管炎.肺炎.中耳炎.脑膜炎.，包炎等;全身感染:如败血症、脓毒血症等食物中奉(2)生存场所金黄色葡萄球在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人弄口动物的曲E泄物中渚B可找到。作为人和动物的常见病原主要存在于人弄口动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球因而，食品受其污染的机会很多。誓农护昭qK3 吕H檢戡務就一眄楓节鋼依瞅*蚁變烬照* d 婆坏強低也黠(e继衆於缰楓费册播7.葡萄球菌的致病性(3)流行病学特点C.中毒贷品种类多如奶.肉、蛋.鱼及其制品。此外，剩饭、 油按蛋、糯米糕及凉粉等弓I起的 中書事件也有 报道。d.污染贷品途任:食品

9、加工人员. 炊事员或销售人员带菌， 造成贷品污染；食品在加工前本身带菌，或在 加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，弓I起 食物中毒；熟贷制品包装不严，运输过程受到 污染;奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时, 对肉体其他部位的污染。上呼吸道感染息者鼻 腔带菌率83%,所以人畜化脓性感染部位常成为 污染源。7.葡超球菌的致病性(3)流行病学特点e.肠毒素弓I起的中毒多金黄色葡萄球菌肠奉足个世界性卫生问题，中奉占擅个细菌性贷物中毒的33%, 加拿大 贝U更多，占45%, 我国毎年发生的此类中毒ir件也非常多。I (3)流行病学特点肠奉素形成条件:存放温度，在37。C內，温度越高，产秦时 间越短；存放

10、地点, 素；食物种类，含蛋白质丰富,水分多，同时 含一定量淀粉的 食物，肠專素易 生成。二.金黄色葡萄球菌的检验方法：增菌培养法.Jt接计井法（一）检验原理:金黄葡萄球菌耐盐性强，在100-150g/L氯化 钠培养基中能生长，适宜生长的盐浓度为5-75%, 可以利用这个特性对金黄葡萄球菌增菌，抑制杂P . V .致病的 金黄葡萄球菌主要看 它是否产生擬 固酶。菌。金黄葡萄球菌可产生溶血素，在血平板上生 长，菌落周围有逑明的溶血环；可产生卵磷脂酶， 分解卵磷脂产生甘油脂和可溶性磷酸胆确t, 所以 在baird-paxker （含卵黄和亚确酸钾）平板上生长, 菌落为贏色,周 围有一浑浊带在其外层有

11、一逑明 ,利用 此特性可分离金黄葡萄球菌；金黄葡萄 球还可产生凝阖酶，酶可使血浆中的可溶性纤维 蛋白原变成不溶解的纤维蛋白，使血浆凝固，这 是鉴定致病性金黄葡萄球菌的董耍指标. 是否是冷第里gq酊 靈舸軍鞋冬串I3BN%g 2*磁畀制禅谢赴硫确（=）E（三）操作步骤1、检样处理称取25g体样品吸取25mL液体样品,加入225mL灭菌生理盐水,置均 质器 中制 成混悬液。2、增菌吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或瞋酪膝豆肉 汤50mL培养基内,36 1C温箱培养24h。在肉汤中呈混浊生长,在庾酪陈大豆肉 汤內有时液体澄淸，菌量多时呈混浊生长I 3.平板分离I血平板菌落成金黄色，大而

12、突起,不透明, 型）周(B表面光滑,二.金黄色葡萄球菌的检验BP平板：主要成分及作用:氯化锂. 甘氨酸：抑制 非致病性葡萄球的生长 丙酮酸钠：促进葡萄球菌生长亚确酸钾：抑制G一杆菌生长，可被金黄色葡萄 球菌还原为确盐呈黑色二.金黄色葡萄球菌的检验BP平板：主要成分及作用:氯化锂. 甘氨酸：抑制 非致病性葡萄球的生长 丙酮酸钠：促进葡萄球菌生长亚确酸钾：抑制G一杆菌生长，可被金黄色葡萄 球菌还原为确盐呈黑色卵黄：含蛋白质.卵磷.脂肪金黄葡萄球菌在Baird - Parker平板上的菌落形态| 4.镜检及血浆擬菌落进行革兰氏染色。为革兰氏阳性球菌，排列 是葡萄球状，无芽胞,无 荚膜，致病性葡萄球菌

13、菌 体较小，Jt饪约为05-1 “m。二.金黄色葡萄球菌的检验如发现葡萄球菌，再做血浆凝固E试验吸取1： 4新鲜兔血浆05mL, 放入于 8mmX 100mm试管内,再加入培养24h的金 黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物05mL, 振 荡揺匀，放361C遍箱或水浴内，毎半小 时观察一次，观察6h, 如呈现凝固，即将 试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，披认为 阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球 菌株及肉汤作为对照。二.金黄色葡萄球菌的检验计数方法吸取上述1： 10混悬液，进行十倍递次 稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度 的稀释液ImL,分别加入三块Baird _ Parkei平板，毎个平板接种量分别为0. 3mL、 03mU 04mL,然后用灭菌L棒涂布擅个平 板。如水分不多吸收，可将平板放在 361温箱111,等水分蒸发后反转平皿置 36 1匕温箱培养。四、金黄色葡萄球菌的检验在三个平板上点数周 围有混浊带的黑色 菌落，并从中任选5个菌落，分别接种血平 板，36lC24h培养后进行染色镜检、血 浆凝 固酶试验，步骤同 增菌培养法。二.金黄色葡萄球菌的检验结果报告(1) 初步报吿：根据血平板培养计数和 镜检，如发现有G+葡萄串状球菌存在，且有 溶血性，则初步报吿为:“有金黄色葡萄 球菌存在，lg样品约含多少。”(2) 结果报告：根据培养特性. 镜检. 生化 试验