人破伤风疫苗免疫与抗-TT高效价血浆筛查方法的研究(一)

1、人破伤风疫苗免疫与抗 -TT高效价血浆筛查方法的研究 (一 )摘要】 目的研究人破伤风疫苗免疫方法对供血浆者抗 -TT效价的影响， 筛查符合制备人破伤风免疫球蛋白标准的原料血浆的检测方法。方法 对符合规定的志愿供血浆者进行分组，以同一剂量不同免疫程序进行 免疫。采用 ELISA定量检测两组供血浆者抗 -TT效价水平，将抗 -TT效价 80IU/ml的供血浆者列为采集特免血浆对象，并将其血浆样作小鼠试 验进行效价的复检。结果供血浆者组别间相同剂量疫苗不同免疫程序 产生高效价抗 -TT的比率比较差异明显； 0、4 周免疫程序组产生高效价 的比率明显高于 0、8 周免疫程序组，而且前者抗 -TT 高

2、效价持续时间 较后者的长。 经 ELISA初筛检测达标的血样经小鼠中和试验法复查， 两 结果比较差异无显著性。结论采用 40IU吸附破伤风疫苗， 0、4 周程序 免疫供血浆者可获得高效价抗 -TT原料血浆， 两种程序均可提高供血浆 者的抗破伤风抗体水平，能够达到终身保护的浓度。同时还进一步证 实了 ELISA检测方法用于大规模筛查抗 -TT 高效价原料的可行性。 【关键词】破伤风疫苗供血浆者抗 -TT;ELISA法【 Abstract 】 ObjectiveInvestigatingtheeffectofimmunizedprocedureoftetanustoxoid(TT) onthean

3、ti-TTtiterofplasmadonorandscreeningthetestMethodsUsedfordete ctingSourceplasmaaccordingwiththedemandsofanti-TTIgG.Theplasmadono rsweredividedintotwogroupsandthenthesubjectswereimmunizedwithtetan ustoxoidwiththedifferentprocedures(thesamedosage).Theanti-TTIgGtiterofplasmadonorwasdetectedbyELISAkits.T

4、heplasmadonorthatthetiterofanti-T Tantibodyis80IU/mlwasregardasaspecialimmunolplasmadonoruseforselec tingplasma.ResultsIndicatedthattheratioofthehightiterofanti-TTantibodybe tweentwogroupsisofthedistinctdifference,theratioofhightiterofantibodyint hegroupimmunizedaccordingto0and4weekishigherthanthato

5、fothergroup(0 and8weekprocedure),andtheanti-TTtiteroftheformer ssamplecanmaintainforlongertime.Theresultsofretestingthesampleswhichwereinkeepingwiththe standardusingELISAshowedthathavenodifferencebetweentwogroups.Concl usionTheanti-TTIgGtiterplasmadonorinthegroup(0and4weekprocedure)ishi gher,butboth

6、procedurescanimprovethelevelofanti-TTIgGofplasmadonor,an dELISAispracticibleforscreening.【Keywords】tetanustoxoid;plasmadonor;anti-TTantibody;ELISA 破伤风是由产生毒素的破伤风杆菌引起的致死性传染病，其高毒力的 痉挛毒素可阻断中枢神经系统的抑制性神经递质，引起肌肉强直和典 型的全身痉挛，目前仍是全球众多地区的一个重要公共卫生问题，尤 其是热带发展中国家最贫穷地区，母亲和新生儿破伤风的发病率和死 亡率较高1。破伤风可通过免疫接种含破伤风类毒素 ( tet

7、anustoxoid,TT) 的疫苗来预防，破伤风疫苗与其他百日咳、白喉疫苗一起作为联合疫 苗(DTP)早已纳入我国儿童计划免疫。然而，在国家免疫计划低覆盖 率，尤其是计划免疫实施前出生的人群中会有破伤风的发生，许多育 龄期妇女不能预防分娩相关的破伤风。 另外，尽管已接受过基础免疫， 为了获得持久的免疫力，还须加强免疫。除了注射疫苗外，人类防治 破伤风主要是注射马血清破伤风毒素（ tetanusantitoxin,TAT）和人破伤 风免疫球蛋白（ humantetanusimmunglobulin,TIG），由于前者系马血清 制品，常常引起过敏反应， 为此，20 世纪 60 年代欧美各国相继研

8、制出 TIG 用于临床，并逐渐取代 TAT2。TIG 系由供血浆者经吸附破伤风 疫苗免疫后采集抗 -TT 效价高的原料血浆制备。 为了探讨供血浆者进行 破伤风疫苗免疫的影响，建立筛查符合标准的抗 -TT 原料血浆方法，笔 者采用相同剂量不同免疫程序分别免疫符合要求的供血浆者，并将 ELISA检测方法筛查合格的血浆样品与小鼠试验法检测结果进行复检， 现报告如下。1 材料与方法1.1 材料吸附破伤风疫苗（ 0.5ml，含破伤风类毒素效价 40IU，批号： 20030701）由兰州生物制品研究所提供， ELISA定量检测破伤风抗体诊 断试剂（批号： 20060207，20060705， 200608

9、19， 20070109）由珠海 海泰生物药业有限公司提供，人破伤风免疫球蛋白标准品（ 10IU/ml ， 批号： 001，中国药品生物制品检定所） ，抗-HCV、抗 -HIV（）、 HBsAg、梅毒等诊断试剂盒均由兰州生物制品研究所提供， ALT试剂（自 配），PCS-2型全自动血浆采集机（美国血液技术公司） ，MK3 酶标仪， 洗板机（芬兰 DENLEY公司）。1.2分组方法将志愿供血浆者分成两组（ A 组，B组），每组按各自的疫 苗剂量和不同的免疫程序进行免疫。 对那些无应答或抗 -TT效价 8IU/ml的供血浆者实施一次强化免疫1.3 原料血浆采集按中华人民共和国药典 2005年版（三部） “血液 制品原料血浆规程 ”要求采集。1.4 检测方法初筛采用 ELISA定量测定法，按诊断试剂盒说明书进行操 作，在 0160mIU/ml 范围绘制标准曲线， 同时做 20mIU/ml 和 40mIU/ml 标准品对照 3。超出标准曲线范围的样品进行 100 倍稀释，再次检 测其结果时乘以 100。复检按中华人民共和国药典