中药提取物抗菌防腐

1、 LOGO 2 Contents 小组成员 组长：莫达康组长：莫达康 组员：温影珍组员：温影珍 陈宏伟陈宏伟 袁浩彬袁浩彬 黄伟华黄伟华 指导老师：鲍波指导老师：鲍波 许碧莲许碧莲 LOGO 3 Contents 研究目的 添加食品防腐剂添加食品防腐剂 益于益于人体健康人体健康，有一定的营有一定的营养养价值价值， 消费者认可度高消费者认可度高 天然防腐剂天然防腐剂 化学防腐剂化学防腐剂 民以食为天，食以安为先。近年来食品安全问题一次又一次的进入公民以食为天，食以安为先。近年来食品安全问题一次又一次的进入公 众的视野，其中食品安全又以食品腐败问题尤为严重，全世界农副产品、众的视野，其中食品安全又

2、以食品腐败问题尤为严重，全世界农副产品、 果蔬等食品因腐烂变质而引起的经济损失十分巨大果蔬等食品因腐烂变质而引起的经济损失十分巨大。所以延长保存期限、所以延长保存期限、 防止食品腐败变质是食品工业的重要任务。防止食品腐败变质是食品工业的重要任务。 传统方法如干制、传统方法如干制、 盐腌、加热、罐藏盐腌、加热、罐藏 冷冻干燥、气调贮藏冷冻干燥、气调贮藏 辐射保藏、微波杀菌辐射保藏、微波杀菌 工艺程序复杂工艺程序复杂 耗能大、投资成本高耗能大、投资成本高 价格低廉，但若超过安全剂量价格低廉，但若超过安全剂量存在致癌性、存在致癌性、 致畸性致畸性、易引起食物中毒等问题易引起食物中毒等问题 LOGO

3、4 Contents 研究目的及现状 市面上使用的防腐剂大多是化学防腐剂，对人市面上使用的防腐剂大多是化学防腐剂，对人 体有不同程度的危害。因此，天然防腐剂的研发拥体有不同程度的危害。因此，天然防腐剂的研发拥 有巨大的前景。其中有巨大的前景。其中中药防腐剂中药防腐剂益于健康，性质稳益于健康，性质稳 定，可作为天然防腐剂的首选。定，可作为天然防腐剂的首选。 但是目前对中药防腐剂的基础研究缺乏，对中但是目前对中药防腐剂的基础研究缺乏，对中 药防腐剂的开发缺乏系统的理论指导，研究成效并药防腐剂的开发缺乏系统的理论指导，研究成效并 不显著。不显著。 此番研究的目的就是此番研究的目的就是在广谱、高效、低

4、毒的在广谱、高效、低毒的 抗菌中草药中，找出抗致病菌功效显著的中抗菌中草药中，找出抗致病菌功效显著的中 药，为制成有效的重要防腐剂提供理论基础。药，为制成有效的重要防腐剂提供理论基础。 LOGO 5 Contents 研究内容 v1.比较八种中药提取物体外抗三种食物腐 败菌的能力，选择抗菌效果最好的一种中 药进行下一步研究。 v2.研究1中所选中药提取物在不同浓度下的 抑菌效果及该中药的MIC。 LOGO 6 Contents 实验选材 中草药的选取中草药的选取 八种具有广谱、高效、低毒广谱、高效、低毒的抗菌中药： 五倍子、白花蛇舌草、金银花、肉桂、黄连、罗汉 果、栀子、鱼腥草 细菌的选取细菌

5、的选取 中国食品微生物限量规定中国食品微生物限量规定不得含有的致病致腐菌致病致腐菌： 沙门氏菌、志贺菌、金色葡萄球菌 LOGO 7 Contents 实验步骤 中药药液的提取（水提煎煮法）中药药液的提取（水提煎煮法） 各取50g进行粗粉碎后, 通过球磨机再进 行球磨, 过筛得到各中草药的细粉碎样品。 取粉碎后中药各50g，分别加水500ml，将中 药浸泡在水中，加热至沸腾，改用文火加热 20分钟，将滤液滤出，在将滤渣加水至200ml， 二次煎煮，后将两次煎煮所得滤液加在一起， 水浴浓缩至100ml，高压灭菌后放凉至室温， 备用。所得中药水煎煮液浓度为0.5g/ml。 LOGO 8 Conten

6、ts 实验步骤 二、菌种的活化二、菌种的活化 将保存在低温下的菌种取出,置于摇床中, 在各菌种适宜条件下进行活化,后将活化菌置 于冰箱中冷藏保存备用。 LOGO 9 Contents 实验步骤 三、药敏试验三、药敏试验 用无菌棉拭子取菌液涂布在以打孔的90MM直径的MH药敏 平板上，每平板打4个孔，待干后，分别加入中药水煎液50UL。 在培养箱中37摄氏度培养24小时后，用游标卡尺量取抑菌环 直径。利用琼脂扩散法,分别取浓度为 106cf u /mL 的菌液 各 0.2mL , 分别加入 LB 琼脂培养基中 ,凝固后用无菌打孔 器在琼脂培养基上打孔。 将各中药提取物加入孔中每组分别做三个平行实

7、验; 另 外做两组对照实验,在一个平皿中加入蒸馏水作CK;在另一个 平皿中加入浓度为3.4mg/ml苯甲酸钠作CK- 。然后再将平皿 置于37恒温箱中培养, 24h后取出观察。用卡尺十字交叉法 测量抑菌圈直径,计算抑制生长率。 抑制生长率= 处理净生长量/CK- 净生长量100% LOGO 10 Contents 实验步骤 中草药水提物 显著性 P0.05 P0.01 抑菌圈直径（cm） 五倍子 白花蛇舌草 金银花 肉桂 黄连 栀子 鱼腥草 罗汉果 苯甲酸钠 蒸馏水 沙门氏菌 志贺氏菌 金黄色葡萄球菌 八种中草药水提物抗菌谱（抑菌环）八种中草药水提物抗菌谱（抑菌环） LOGO 11 Conte

8、nts 实验步骤 四、不同浓度的中草药提取物抑菌效果四、不同浓度的中草药提取物抑菌效果 选取各细菌抑菌生长率最高的一种中药水 提物,分别设置提取物浓度分别为： 重复上一步做药敏实验。 0.5g/ml,0.25g/ml,0.125g/ml,0.0625g/ml,0.0313g/ml LOGO 12 Contents 实验步骤 不同浓度中草药对不同浓度中草药对目标细菌目标细菌的抑菌生长率的抑菌生长率 0.5 0.25 0.125 0.0625 0.0313 中药中药目标目标细菌细菌 抑菌环直径抑菌环直径 抑菌生长率抑菌生长率 金黄色金黄色 葡萄球葡萄球菌菌 浓度（浓度（g/ml） 志贺氏菌志贺氏菌

9、 沙门沙门氏菌氏菌 抑菌环直径抑菌环直径 抑菌生长率抑菌生长率 抑菌环直径抑菌环直径 抑菌生长率抑菌生长率 C B A LOGO 13 Contents 实验步骤 五、五、MIC的测定的测定 选取效果平均抑菌生长率最好的一种中药水提物， 测定对三种致病菌的最小抑菌浓度，并与常用化学防 腐剂苯甲酸钠的最小抑菌浓度作对比。采用试管试管2倍稀倍稀 释法释法测定最小抑菌浓度(M IC) 。 实验中每种药均用肉汤培养基2倍系列稀释10个梯 度,第11支试管作阳性对照,第12管作阴性对照,各管稀 释后的最终体积为10mL。每管加接种菌液100L,置 37培养1824h,观察是否有菌生长,每种药物做3组 重复。 LOGO 14 Contents 实验步骤 沙门氏菌 志贺氏菌 金黄色葡萄球菌 中草药水提物 0.5 0.25 0.125 0.0625 0.0313 浓度(g/ml)