血脂检测方法及临床意义

1、 总胆固醇（TC）测定测定 化学法 酶法酶法 化学测定法化学测定法 化学测定法通常需化学测定法通常需抽提纯化抽提纯化。显色剂主要有两类：。显色剂主要有两类： 醋酸醋酸- -醋酐醋酐- -硫酸硫酸 高铁硫酸。高铁硫酸。 这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确这些显色反应须用强酸试剂，干扰因素多，准确 测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程，因而操 作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。作较繁，不适于分析大批量标本，且不适于自动分析。 n特点：特点： 1 1Liberman-BurchardLiberman-Burchard反应反应 18

2、851885年年LibermanLiberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色， 18901890年年BurchardBurchard用此反应测定胆固醇称为用此反应测定胆固醇称为L-BL-B反应。反应。 1953 1953年年ZakZak提出用硫酸、醋酸和提出用硫酸、醋酸和Fe3+Fe3+等与胆固醇作用生等与胆固醇作用生 成紫红色化合物来测定胆固醇，称为成紫红色化合物来测定胆固醇，称为ZakZak反应。反应。 2 2ZakZak反应反应 酶测定法酶测定法 n特点：特点： 常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特

3、异性好，精密 度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，既可以手工操度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，既可以手工操 作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了不同程度的作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了不同程度的基质效基质效 应。应。 采用酶反应原理的干化学法颇为实用，其缺点是价格高，采用酶反应原理的干化学法颇为实用，其缺点是价格高， 精密度差。胆固醇的酶测定法始于精密度差。胆固醇的酶测定法始于7070年代。由于操作简便，试年代。由于操作简便，试 剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固目前已成为测定胆固 醇的主要方法。醇的主要方法。

4、CHE CHO POD n评价：评价： 主要缺点是：主要缺点是： 优点优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。 某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机 溶剂配制的溶液作为溶剂配制的溶液作为TCTC分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准，分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准， 此校准液（品）相当于三级标准。此校准液（品）相当于三级标准。 表面活性剂，如吐温表面活性剂，如吐温-40-40可以干扰胆固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇可以干扰胆固醇酯酶的作

5、用，而聚乙烯醇60006000 可使结果提高可使结果提高1 12 2； 本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、 胆红素、维生素胆红素、维生素C C和谷胱甘肽等的干扰。和谷胱甘肽等的干扰。 【参考值】【参考值】 血清总胆固醇合适范围：血清总胆固醇合适范围： 5.22mmol/L (200mg/dl)5.22mmol/L (200mg/dl)， 边缘升高：边缘升高：5.235.235.69mmol/L(2015.69mmol/L(201219mg/dl)219mg/dl)， 升高：升高：5.72mmol/L (2

6、20mg/dl)5.72mmol/L (220mg/dl)。 u影响影响TC水平的因素水平的因素 年龄与性别；年龄与性别； 长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TCTC增高；增高； 遗传因素；遗传因素； 其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TCTC升高。升高。 TC TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊 断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，TCTC是一个明确的危险因

7、子，与冠是一个明确的危险因子，与冠 心病的发病率呈正相关。心病的发病率呈正相关。 【临床意义】【临床意义】 u高高TCTC血症：血症：原发和继发原发和继发 u低低TCTC血症：血症：原发和继发原发和继发 血清（浆）甘油三酯测定血清（浆）甘油三酯测定 化学法化学法 酶法酶法 n基本操作：基本操作： 化学测定法化学测定法 1 1、抽提抽提：关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷关键是选用合适的抽提剂，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷 脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。 2 2、皂化皂化：甘油三酯水解生成甘油，这一步大都采用甘油三酯水解

8、生成甘油，这一步大都采用KOHKOH作皂化剂作皂化剂 3 3、氧化氧化：过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4 4、显色显色：甲醛的定量主要有两种方法：甲醛的定量主要有两种方法： 甲醛与变色酸甲醛与变色酸(4，5-二羟二羟-2，7-萘二磺酸萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物在硫酸溶液中加热生成紫色化合物 甲醛与乙酰丙酮在铵离子甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶 n去除去除FGFG干扰可用下列方法：干扰可用下列方法： 1 1、外空白法：同时用不含、外空白法：同时用不含LPL

9、LPL的酶试剂测定的酶试剂测定FG FG 作空白。作空白。 2 2、内空白法：又称两步法或双试剂法、内空白法：又称两步法或双试剂法将将LPLLPL和和 4-AAP4-AAP组成试剂组成试剂2 2，其余部分为试剂，其余部分为试剂1 1。 乳酸脱氢酶法乳酸脱氢酶法 原理：原理： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶 丙酮酸激酶 丙酮酸 丙酮酸 + ATP 丙酮酸丙酮酸+NADH LDH NAD+ + 乳酸乳酸 由于反应消耗由于反应消耗NADHNA

10、DH，故可利用，故可利用NADHNADH在在340nm340nm吸光度降低来吸光度降低来 测定甘油三脂的浓度测定甘油三脂的浓度。 n评价：评价： 本法结果准确，但灵敏度较低，试剂本法结果准确，但灵敏度较低，试剂 也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油也不太稳定。由于血清本身存在游离甘油 和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了要和丙酮酸等干扰物质，所以测定时除了要 做试剂空白外，还要做标本空白做试剂空白外，还要做标本空白 甘油氧化酶法甘油氧化酶法 第一步：第一步： FG + OFG + O2 2 甘油氧化酶 甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2 H H2 2O O2 2 + EMAE

11、 + EMAE POD POD 无色物质无色物质 消除游离甘油的影响，消除游离甘油的影响，3-5min3-5min后进行第二步反应：后进行第二步反应： TG + 3HTG + 3H2 2O O LPL LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + 3RCOOH FG + OFG + O2 2 甘油氧化酶 甘油氧化酶 甘油醛甘油醛+ H+ H2 2O O2 2 H H2 2O O2 2 +4-AAP+ EMAE +4-AAP+ EMAE POD POD 有色化合物 有色化合物 注：注：EMAEEMAE作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚高。作用与酚相似，是还原剂，但灵敏度比酚

12、高。 n原理原理：该法分两步完成。该法分两步完成。 高密度脂蛋白测定高密度脂蛋白测定 常以测定常以测定HDL-CHDL-C含量代表含量代表HDLHDL水平。水平。 n参考方法参考方法: : 超速离心分离超速离心分离HDLHDL，然后用化学法（，然后用化学法（ALKBALKB法）或法）或 酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易 常握。常握。 n常规方法常规方法: : 1磷钨酸磷钨酸-镁法镁法 2HDL直接测定法直接测定法 HDLHDL直接测定法大致分三类，分别是直接测定法大致分三类，分别是: : 聚乙二醇聚乙二醇/ /抗体包裹法抗体包裹法 酶

13、修饰法酶修饰法 选择性抑制法，又称掩蔽法，选择性抑制法，又称掩蔽法， HDL-C合适范围：合适范围： 1.04mmol/L (40mg/dl), 0.91mmol/L (35mg/dl)为减低。为减低。 【参考值】【参考值】 【临床意义】【临床意义】 流行病学与临床研究证明，流行病学与临床研究证明，HDL-CHDL-C与冠心病发病呈负相关，与冠心病发病呈负相关， HDL-CHDL-C低于低于0.9 mmol/L 0.9 mmol/L 是冠心病危险因素。是冠心病危险因素。HDL-CHDL-C大于大于 1.55mmol/L1.55mmol/L被认为是冠心病的被认为是冠心病的“负负”危险因素。危险因

14、素。 HDL-CHDL-C下降还下降还 多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TGTG血症往往血症往往 伴以低伴以低HDL-CHDL-C，肥胖者的，肥胖者的HDL-CHDL-C也多偏低。吸烟可使也多偏低。吸烟可使HDL-CHDL-C下降，下降， 适量饮酒、长期体力劳动和运动会使适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-CHDL-C升高。升高。 低密度脂蛋白测定低密度脂蛋白测定 1 1FriedewaldFriedewald公式法公式法 LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/5TG/5（以（以mg/dlmg/dl 为单位时），或为单

15、位时），或LDL-CLDL-CTCTCHDL-CHDL-CTG/2.2TG/2.2（以（以mmol/Lmmol/L为单为单 位时）。位时）。 2 2聚乙烯硫酸盐沉淀法聚乙烯硫酸盐沉淀法 本法并非对本法并非对LDL-CLDL-C作直接测定，而作直接测定，而 是用聚乙烯硫酸（是用聚乙烯硫酸（PVSPVS）选择性沉淀血清中）选择性沉淀血清中LDLLDL，再以血清，再以血清TCTC 减去上清液（含减去上清液（含HDLHDL与与VLDLVLDL）胆固醇即得）胆固醇即得LDL-CLDL-C值。值。 3 3直接测定法直接测定法: :两类两类 目前各类方法测定的目前各类方法测定的LDL-CLDL-C值都包括值

16、都包括IDLIDL和和LP(a)LP(a)的的cholchol在内在内 LDL-C LDL-C合适范围：合适范围：3.12mmol/L (120mg/dl)3.12mmol/L (120mg/dl)， 边缘升高：边缘升高：3.153.153.61mmol/L(1213.61mmol/L(121139mg/dl)139mg/dl) 升高：升高：3.64mmol/L (140mg/dl)3.64mmol/L (140mg/dl)。 【参考值】【参考值】 【临床意义】【临床意义】 LDL-C LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因 素。由于素。

17、由于TCTC水平同时也受水平同时也受HDL-CHDL-C水平的影响，所以最好以水平的影响，所以最好以 LDL-CLDL-C代替代替TCTC作为冠心病危险因素指标。美国国家胆固醇教作为冠心病危险因素指标。美国国家胆固醇教 育计划成人治疗专业组规定以育计划成人治疗专业组规定以LDL-CLDL-C水平作高脂蛋白血症的水平作高脂蛋白血症的 治疗决策及其需要达到的治疗目标。治疗决策及其需要达到的治疗目标。 脂蛋白脂蛋白(a)(a)测定测定 nLp(a)Lp(a)测定有两类方法测定有两类方法 一是以免疫化学原理测定其所含一是以免疫化学原理测定其所含Apo(a)Apo(a)，结果以，结果以Lp(a)Lp(a

18、)质量质量 表示，也有以表示，也有以Lp(a)Lp(a)颗粒数颗粒数mmol/Lmmol/L表示的。表示的。 另一类方法测定其所含的胆固醇，结果以另一类方法测定其所含的胆固醇，结果以 Lp(a)-CLp(a)-C表示。表示。 目前大都用免疫学方法测定。目前大都用免疫学方法测定。 正常人群的正常人群的Lp(a)Lp(a)水平呈明显的正偏态分布，大多在水平呈明显的正偏态分布，大多在 200mg/L200mg/L以下，平均数在以下，平均数在120120180 mg/L180 mg/L，中位数约，中位数约100mg/L100mg/L。 Lp(a)Lp(a)水平高于医学决定水平（水平高于医学决定水平（3

19、00mg/L300mg/L），冠心病危险性明），冠心病危险性明 显增高。显增高。 【参考值】【参考值】 【临床意义】【临床意义】 血清血清Lp(a)Lp(a)水平是动脉粥样硬化性疾病的独立危险因素水平是动脉粥样硬化性疾病的独立危险因素, ,与与 动脉粥样硬化成正相关。动脉粥样硬化成正相关。 血清载脂蛋白测定血清载脂蛋白测定 n免疫化学法：免疫化学法： 单向免疫扩散（单向免疫扩散（RIDRID） 电免疫分析（如火箭电泳法）电免疫分析（如火箭电泳法） 放射免疫分析（放射免疫分析（RIARIA） 酶联免疫吸附分析（酶联免疫吸附分析（ELISAELISA）等）等 早期早期 目前：目前： 目前比较适合于

20、临床实验室的是目前比较适合于临床实验室的是免疫浊度法免疫浊度法，包括，包括 免疫散射比浊法（免疫散射比浊法（INAINA）和免疫透射比浊法（）和免疫透射比浊法（ITAITA）。）。 【参考值】：【参考值】： Apo AIApo AI：1.001.001.60g/L1.60g/L，Apo BApo B：0.600.601.10g/L1.10g/L。 【临床意义】【临床意义】 ApoAIApoAI是是HDLHDL的主要结构蛋白，的主要结构蛋白， ApoBApoB是是LDLLDL的主要结构蛋白，因此，的主要结构蛋白，因此，ApoAIApoAI 和和ApoBApoB可直接反映可直接反映HDLHDL和和

21、LDLLDL的含量。在某些病理情况下，的含量。在某些病理情况下，ApoAIApoAI与与HDLHDL和和ApoBApoB与与 LDLLDL并非成正相关，因此，同时测定载脂蛋白及脂蛋白并非成正相关，因此，同时测定载脂蛋白及脂蛋白HDLHDL和和LDLLDL对病理发生状对病理发生状 态的分析很有帮助。冠心病、肾病综合征和糖尿病等都有态的分析很有帮助。冠心病、肾病综合征和糖尿病等都有ApoAIApoAI下降和下降和ApoBApoB升升 高。临床上常将高。临床上常将ApoAIApoAI和和ApoBApoB比值作为冠心病的危险指标。比值作为冠心病的危险指标。 谢谢大家！ CHE CHO POD 乳酸脱氢

22、酶法乳酸脱氢酶法 原理：原理： TG + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH Glycerol + ATP GK+Mg2+ G-3-P + ADP ADP + 磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶 丙酮酸激酶 丙酮酸 丙酮酸 + ATP 丙酮酸丙酮酸+NADH LDH NAD+ + 乳酸乳酸 由于反应消耗由于反应消耗NADHNADH，故可利用，故可利用NADHNADH在在340nm340nm吸光度降低来吸光度降低来 测定甘油三脂的浓度测定甘油三脂的浓度。 LDL-C LDL-C合适范围：合适范围：3.12mmol/L (120mg/dl)3.12mmol/L (120mg/dl)， 边缘升高：边缘升高：3.153.153.61mmol/L(1213.61mmol/L(121139mg/dl)139mg/dl) 升高：升高：3.64mmol/L (140mg/dl)3.64mmol/L (140mg/dl)。 【参考值】【参考值】 【临床意义】【临床意义