医学基因工程及其医学应用课件

1、医学基因工程及其医学应用1 Genetic Recombination and Genetic Engineering 医学基因工程及其医学应用2 医学基因工程及其医学应用3 医学基因工程及其医学应用4 重组重组DNA技术发展史技术发展史 医学基因工程及其医学应用5 pSC101 医学基因工程及其医学应用6 pSC101 医学基因工程及其医学应用7 医学基因工程及其医学应用8 医学基因工程及其医学应用9 医学基因工程及其医学应用10 医学基因工程及其医学应用11 医学基因工程及其医学应用12 生物技术工程生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、基因工程、蛋白质工程、 酶工程、细胞工程等酶工程、细

2、胞工程等 目的目的 分离获得某一感兴趣的基因或分离获得某一感兴趣的基因或DNA 获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质）获得感兴趣基因的表达产物（蛋白质） 基因工程基因工程(genetic engineering) 实现基实现基 因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程，因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程， 又称又称重组重组DNA工艺学工艺学。 （二）基因工程（二）基因工程 医学基因工程及其医学应用13 SS 医学基因工程及其医学应用14 医学基因工程及其医学应用15 第第 二二 节节 自然界的基因自然界的基因重组重组 DNA Recombination 医学基因工程及其医学应用16 医学基因工程

3、及其医学应用17 医学基因工程及其医学应用18 医学基因工程及其医学应用19 医学基因工程及其医学应用20 医学基因工程及其医学应用21 医学基因工程及其医学应用22 噬菌体的生活史噬菌体的生活史 溶菌生长途径溶菌生长途径 (lysis pathway) 溶源菌生长途径溶源菌生长途径 (lysogenic pathway) 例例 目目 录录 医学基因工程及其医学应用23 目目 录录 医学基因工程及其医学应用24 医学基因工程及其医学应用25 医学基因工程及其医学应用26 医学基因工程及其医学应用27 医学基因工程及其医学应用28 第第 三三 节节 基因工程的核心技术基因工程的核心技术 医学基因

4、工程及其医学应用29 医学基因工程及其医学应用30 医学基因工程及其医学应用31 医学基因工程及其医学应用32 医学基因工程及其医学应用33 医学基因工程及其医学应用34 类酶识别序列特点类酶识别序列特点 回文结构回文结构(palindrome) 切口切口 ：平端切口平端切口、粘端切口粘端切口 GGATCC CCTAGG 医学基因工程及其医学应用35 Bam H GTC CAG G CCTAG GATCC G GGATCC CCTAGG Hind GTCGAC CAGCTG GAC CTG 平端切口平端切口粘端切口粘端切口 医学基因工程及其医学应用36 同功异源酶同功异源酶 来源不同的限制酶，

5、但能识别和切割来源不同的限制酶，但能识别和切割 同一位点，这些酶称同一位点，这些酶称同功异源酶同功异源酶。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G Bam H GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G Bst 医学基因工程及其医学应用37 同尾酶同尾酶 有些限制性内切酶虽然识别序列不完全有些限制性内切酶虽然识别序列不完全 相同，但切割相同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，后，产生相同的粘性末端， 称为称为同尾酶同尾酶。这两个相同的粘性末端称为。这两个相同的粘性末端称为配配 伍未端伍未端(compatible end)。 GGATCC CCTAGG AG

6、ATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G A TCTAG GATCT A 医学基因工程及其医学应用38 医学基因工程及其医学应用39 医学基因工程及其医学应用40 医学基因工程及其医学应用41 医学基因工程及其医学应用42 目目 录录 医学基因工程及其医学应用43 医学基因工程及其医学应用44 医学基因工程及其医学应用45 医学基因工程及其医学应用46 酵母人工染色体酵母人工染色体 (yeast artificial chromosome, YAC) 细菌人工染色体细菌人工染色体 (bacterial artificial chromosome, BAC) 动物病毒动物病毒DNA

7、改造的载体改造的载体 （如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）（如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒） 其他其他 医学基因工程及其医学应用47 （一）核酸探针与分子杂交（一）核酸探针与分子杂交 医学基因工程及其医学应用48 复性复性 RNADNA 医学基因工程及其医学应用49 医学基因工程及其医学应用50 医学基因工程及其医学应用51 医学基因工程及其医学应用52 三种印迹技术的比较三种印迹技术的比较 医学基因工程及其医学应用53 DNA 点阵点阵 医学基因工程及其医学应用54 5 Primer 1 5 Primer 2 Cycle 2 Cycle 1 5 5 5 5 5 5 Template

8、 DNA 5 5 5 5 5 5 5 5 （二）聚（二）聚 合合 酶酶 链链 反反 应应 医学基因工程及其医学应用55 Cycle 3 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 2530 次循环后，模板次循环后，模板DNA的含量的含量 可以扩大可以扩大100万倍以上。万倍以上。 医学基因工程及其医学应用56 医学基因工程及其医学应用57 PCR的基本反应步骤的基本反应步骤 变性变性 95C 延伸延伸 72C 退火退火 Tm-5C 医学基因工程及其医学应用58 医学基因工程及其医学应用59 医学基因工程及其医学应用60 医学基因工程及其医学应用61 医学基因工程及其医学应用

9、62 医学基因工程及其医学应用63 医学基因工程及其医学应用64 mRNA cDNA 双链双链cDNA 重组重组DNA分子分子 cDNA文库文库 反转录酶反转录酶 载体载体 受体菌受体菌 复制复制 * 从从cDNA文库获取目的基因文库获取目的基因 逆转录酶逆转录酶 A A A A T T T T AAAA SISI核酸酶核酸酶 DNA聚合酶聚合酶 碱水解碱水解 T T T T 医学基因工程及其医学应用65 医学基因工程及其医学应用66 G CCTAG G CCTAG G CCTAG G CCTAG GATCC G GATCC G GATCC G GATCC G G CCTAG G CCTAG

10、G CCTAG G CCTAG GATCC G GATCC G GATCC G GATCC G G CCTAG G CCTAG GATCC G GATCC G G CCTAG G CCTAG GATCC G GATCC G 医学基因工程及其医学应用67 医学基因工程及其医学应用68 医学基因工程及其医学应用69 医学基因工程及其医学应用70 医学基因工程及其医学应用71 医学基因工程及其医学应用72 人工接头及其应用人工接头及其应用 CCGAATTCG GGCTTAAGC 5- 3- Eco R Eco R Eco R Eco R 医学基因工程及其医学应用73 医学基因工程及其医学应用74 医学基因工程及其医学应用75 ( (插入失活法 插入失活法) ) 抗药性标记选择抗药性标记选择 目目 录录 医学基因工程及其医学应用76 医学基因工程及其医学应用77 Southern印迹印迹 目目 录录 医学基因工程及其医学应用78 医