实验七-平板菌落计数与接种PPT课件

1、 三、实验材料三、实验材料 l样品：样品：取土取土 l试剂和仪器：试剂和仪器： 无菌水、无菌培养皿、无菌吸管、记号无菌水、无菌培养皿、无菌吸管、记号 笔、接种环、接种针、酒精灯、标签纸、水浴锅笔、接种环、接种针、酒精灯、标签纸、水浴锅 l2人人/组：组： 稀释平板计数用：稀释平板计数用：6只平皿、只平皿、2根三角玻棒、根三角玻棒、2支装支装9ml无无 菌水的试管、菌水的试管、 4根无菌吸管、牛肉膏培养基；根无菌吸管、牛肉膏培养基； 接种用：接种用： 2支液体牛肉膏蛋白胨培养基、支液体牛肉膏蛋白胨培养基、2支半固体牛支半固体牛 肉膏蛋白胨培养基、肉膏蛋白胨培养基、2支黄豆饼粉固体斜面培养基。支黄

2、豆饼粉固体斜面培养基。 四、实验过程、实验过程 （一）（一）平板菌落计数平板菌落计数 （二）微生物的接种（二）微生物的接种 （一）稀释平板菌落计数（一）稀释平板菌落计数 1 1、 编号与稀释编号与稀释: 每组取无菌平皿每组取无菌平皿6只，一个稀释度做只，一个稀释度做3只。标明只。标明10 3 和和10 4各 各3只。只。 2、制备土壤稀释液：、制备土壤稀释液： 称取土壤称取土壤1g1g，制备，制备10 2 土壤稀释液，再取 土壤稀释液，再取4只只 无菌无菌 试管稀释制备试管稀释制备10 3 、 、10 4菌液。 菌液。 3、倒平皿与平板涂布：、倒平皿与平板涂布： 取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，

3、倒入平皿中，取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿中， 冷却凝固。分别吸取冷却凝固。分别吸取 0.1 ml上述制备的上述制备的10 3或 或10 4菌液 菌液 玻棒涂布，室温静置玻棒涂布，室温静置510 min，使菌液吸附进培养基，使菌液吸附进培养基， 倒置于倒置于37 0C恒温培养恒温培养24 h。 4、观察细菌菌落形态以及计数菌落：观察细菌菌落形态以及计数菌落： 培养培养24 h后，取出培养皿数菌落数，算出同一稀释度后，取出培养皿数菌落数，算出同一稀释度 三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算：三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每每ml 中菌落形成单位（中菌落形成单位（

4、cfu）同一稀释度三次重复的平）同一稀释度三次重复的平 均菌落数均菌落数稀释倍数稀释倍数10 5、计算出每、计算出每g土壤中细菌的数量：土壤中细菌的数量： 即用某一培养皿内细菌的菌落数乘以该培养皿接种液即用某一培养皿内细菌的菌落数乘以该培养皿接种液 的稀释倍数即得。的稀释倍数即得。 图图1 菌液逐级稀释过程示意图菌液逐级稀释过程示意图 l接种方法：接种方法： 常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、 试管深层固体培养基的穿刺接种法。试管深层固体培养基的穿刺接种法。 l接种工具：接种工具： 常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接常用的有接种针、

5、接种环、接种钩、接种圈、接 种铲或接种锄、玻璃涂棒等。种铲或接种锄、玻璃涂棒等。 （二）微生物的接种（二）微生物的接种 （1）斜面接种法（）斜面接种法（1支试管支试管/人）人） 使用黄豆饼粉斜面培养基，用接种环从平皿上挑取放线菌使用黄豆饼粉斜面培养基，用接种环从平皿上挑取放线菌 或霉菌单菌落。或霉菌单菌落。 l左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种试左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种试 管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时向管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时向 上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。

6、 l右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可 能伸入试管的其余部位也过火灭菌。能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 l将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将 两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让 试管口缓缓过火焰。试管口缓缓过火焰。 l将已灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却，而将已灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却，而 后再用环沾取一定量的菌苔，将沾有菌苔的接种环抽出试后再用环沾取一定量的菌苔，将沾

7、有菌苔的接种环抽出试 管。管。 l迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部，迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部， 轻轻向上划线（直线或曲线）。轻轻向上划线（直线或曲线）。 l接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即 塞入试管内。塞入试管内。 l将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼，将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼， 使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆 溅，造成污染。溅，造成污染。 l放下环后，再将棉塞旋紧，在试管

8、斜面上距试管口放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2 3cm处贴上标签。处贴上标签。 l280C恒温培养。恒温培养。 试管拔塞后过火灭菌和取菌试管拔塞后过火灭菌和取菌 斜面划线法（斜面划线法（a）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态（）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b） （2）液体接种法（）液体接种法（1支试管支试管/人）人） 使用牛肉膏蛋白胨液体培养基。使用牛肉膏蛋白胨液体培养基。 用接种环从平皿上挑取细菌单菌落，用接种环从平皿上挑取细菌单菌落，接入液体培养基。接入液体培养基。 l放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2 3cm处贴上

9、标签。处贴上标签。 l37 0C恒温培养。恒温培养。 （在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种，（在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种， 同时要求无菌操作。）同时要求无菌操作。） （3）穿刺接种（）穿刺接种（1支试管支试管/人）人） 使用牛肉膏蛋白胨半固体培养基。用接种针从平皿上挑取使用牛肉膏蛋白胨半固体培养基。用接种针从平皿上挑取 细菌单菌落，细菌单菌落，接入半固体培养基。接入半固体培养基。 l用接种针经火焰灭菌后，沾取少量菌种，垂直地穿入试管用接种针经火焰灭菌后，沾取少量菌种，垂直地穿入试管 固体培养基中心至底部，然后沿着原接种线将针拔出，要固体培养基中心至底部，然后

10、沿着原接种线将针拔出，要 做到手稳、动作轻巧迅速，最后塞上棉塞。再将接种针上做到手稳、动作轻巧迅速，最后塞上棉塞。再将接种针上 残留的菌体在火焰上烧掉。残留的菌体在火焰上烧掉。 l在试管斜面上距试管口在试管斜面上距试管口23cm处贴上标签。处贴上标签。 l37 0C恒温培养。恒温培养。 图图48 穿刺接种：（穿刺接种：（a）水平穿刺接种；（）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种）垂直穿刺接种 五、实验任务五、实验任务 1、2人一组人一组: 6只平皿稀释平板计数，做只平皿稀释平板计数，做2个稀释度。个稀释度。24 h观察并计数。观察并计数。 2、每人：、每人： 做做1支斜面接种（接放线菌或霉菌），支斜面接种（接放线菌或霉菌），1支支 液体接种（接细菌），液体接种（接细菌），1支半固体穿刺接种支半固体穿刺接种 （接细菌）。（接细菌）。 六、思六、思 考