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1、主要目的：测定物质还原性谷胱甘肽（GSH的含量。主要原理：参照GSH检测分析试剂盒说明书，5,5 -二硫代-双-（2 -硝基苯甲酸）能和 谷胱甘肽（GSH反应产生2 -硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG, 由于2 -硝基-5-巯基苯甲酸是一黄色产物，通过测定其在 412 nm处的最大吸 收可确定样品中谷胱甘肽的含量用纯化的谷胱甘肽（ GSH抗体包被微孔板，制 成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽 （GSH，再与HRP标记的谷胱甘 肽（GSH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRF酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最

2、终的黄 色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH呈正相关。用酶标仪在412 nm波长 下测定吸光度（0D值），通过标准曲线计算样品中谷胱甘肽（GSH的含量。实验室签章一、试剂谷还原性胱甘肽（GSH测定试剂盒（南京建成生物研究所）二、仪器设备96孔酶标板UV-Vis可见多功能酶标仪旋涡混匀器离心机移液枪及其相应量程枪头三、实验方法根据试剂盒说明书具体操作步骤如下：1. 上清液的制备：取稀释后的血清或组织匀浆液 mL,加试剂一应用液2 mL 混匀，4000 rpm离心10分钟，取上清液1 mL进行显色反应。2. 显色反应：空白管中加入1 mL试剂一，标准管加入20卩mol/LGSH标准 液1 mL

3、,测定管加入上步骤得到的上清液 1 mL,然后各管中分别加入 mL试剂 二、试剂三、mL试剂四。3. 混匀，室温静置5分钟后，在412 nm处将酶标板空板进行扫描，准确吸 取mL各管反应液加入到新的96孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（OD值）。4. 血清中GSH含量计算公式GSH含量（mg/L）测定OD值-空白O值 X标准品浓度（20X 10-3mmol/L）标准OD值-空白OD值X GSH分子量（307）X样本测试前稀释倍数组织中GSH含量公式GSH含量(mg/gprot )标准定D值-空白OD值X标准品浓度（20X10-3mmol/L） 标准OD值-空白OD值X GSH分子量（307）X样本测试前稀释倍数宁待测组织匀浆液蛋白浓度（gprot/L ）参考文献Lapshina E A, Sudnikovich E J, Maksimchik J Z, et al. Antioxidativeenzymeand glutathi one S-tra nsferase activities in diabetic rats exposed toIong-term

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