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文档简介

1、原代肾细胞培养原代肾细胞培养( (二二) )-观察细胞结果观察结果观察有无污染（是否浑浊，或有颗粒样物质）有无污染（是否浑浊，或有颗粒样物质） 常见污染病原体:细菌,支原体,真菌 常见污染原因: 取材 环境 操作是否形成单层是否形成单层细胞形态细胞形态如果有杂质看不清细胞，先换如果有杂质看不清细胞，先换维持维持液（上次课配制的）液（上次课配制的）后观察。后观察。 (1)(1)从液氮中取出冻存的细胞，夹住上端，立即放入从液氮中取出冻存的细胞，夹住上端，立即放入3737水浴中快速解冻。水浴中快速解冻。（2 2）1000rp/10 1000rp/10 离心离心5 5 分钟。分钟。 （3）无菌操作下开

2、瓶，弃上清液。加生长液（在大离心管中）约1ml轻轻悬浮细胞团（洗）（洗） ，移入离心管中，混匀。1000rp/10 离心5 分钟。（4 4）无菌操作下开瓶，弃上清液。）无菌操作下开瓶，弃上清液。加加1ml PBS 1ml PBS 液悬浮，液悬浮，0.9ml0.9ml移入含移入含0.4% 0.4% 台盼兰台盼兰 100ul100ul 管中（做死细胞鉴定）。染10-15分，细胞计数。加生长液（在培养瓶中）约加生长液（在培养瓶中）约1ml1ml轻轻悬浮细胞团，移入到培轻轻悬浮细胞团，移入到培养瓶中，养瓶中， 轻轻混匀。加轻轻混匀。加10ml10ml生长液，培养。生长液，培养。（这一步不做）（这一步不做）解冻冷冻保存细胞解冻冷冻保存细胞( (细胞复苏）细胞复苏）（1）解冻时务必注意安全，预防冷冻管爆裂。要带手套，用镊子将细胞冷冻管从液氮中取出，放入37水浴中。切不可直接用手，以免冻伤。（2）快速解冻。冻存细胞从液氮中取出后，应立即放入37水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1 分钟内全部融化（不要超过3 分钟）。（3）冷冻管在水浴中解冻时，液面不可超过冻存管盖面，否则，易发生污染。 （4）解冻操作过程动作要轻。由于冷冻保

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