不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较

1、不同dna提取试剂盒提取作物种子基因组dna效果的比较 摘要：比较3种不同dna提取试剂盒（宝生物、天根、lgc）在转基因产品检测中的应用效果，分别提取玉米、水稻和大豆种子的基因组dna。结果表明，天根dna提取试剂盒dp305更为适合从作物种子中提取基因组dna进行转基因成分检测。 关键词：dna提取试剂盒；基因组dna；作物；比较 中图分类号：q943.2 文献标识码：a 文章编号：0439-8114（2013）08-1956-03 随着转基因作物种类的增多和种植面积的增加1，转基因种子的应用越来越广泛。转基因技术在提高作物产量、改善作物品质、缓解粮食危机等方面作出了巨大贡献，然而其安全性

2、方面的不确定因素也带来了转基因生物安全问题2，3。2001年发布实施了农业转基因生物安全管理条例，对农业转基因作物及其产品实行安全评价制度、生产许可制度、经营许可制度和产品标识制度4，5。因此，需要对作物种子进行转基因检测，而基因组dna提取作为转基因检测中的关键步骤，需要稳定、重复性好、简便快捷的方法进行提取。基因组dna提取的方法有很多6-8，目前广泛使用的是商业化的基因组dna提取试剂盒9，常见的dna提取试剂盒主要分为3类：离心柱型、无毒型（不使用酚氯仿）、磁珠型。 本研究使用常见的不同dna提取试剂盒对玉米、水稻、大豆种子的基因组dna提取效果进行比较，确定了适合转基因检测使用的dn

3、a提取试剂盒。 1 材料和方法 1.1 材料 转基因玉米mon810、转基因水稻科丰6号、转基因大豆gts40-3-2均为农业部发放的标准品。 1.2 试剂与仪器 天根dp305 dna提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司，宝生物d9093 dna提取试剂盒购自沈阳联星生物技术公司，lgc41602 dna提取试剂盒购自北京昊诺斯科技有限公司，pcr反应试剂均购自宝生物工程（大连）有限公司。 5424型高速离心机购自德国eppendorf公司，nd2000型dna定量仪购自美国thermo公司，c1000型pcr仪及geldoc xr+凝胶成像系统购自美国bio-rad公司，bg-600

4、k核酸水平电泳系统购自北京百晶生物技术有限公司。 1.3 方法 1.3.1 转基因作物基因组dna的提取 使用3种dna提取试剂盒分别提取转基因玉米mon810、转基因水稻科丰6号和转基因大豆gts40-3-2的基因组dna，操作方法具体见试剂盒说明书。测定其dna浓度及od260 nm/od280 nm。dna提取率（g/g）=dna浓度（ng/l）体积（l）/取材量（g）5。 1.3.2 pcr扩增验证 通过扩增筛选因子camv35s启动子基因来检测3种dna试剂盒提取的基因组dna在转基因成分检测中的效果，试验重复3次。pcr扩增引物和扩增条件10见表1。 2 结果与分析 2.1 3种d

5、na提取试剂盒提取基因组dna的效果比较结果 3种dna试剂盒所提取的dna及相关结果见表2。从表2中可以看出，lgc dna试剂盒提取率最高，成本最高；宝生物试剂盒提取率次之，提取时间也较长，成本也较高；天根试剂盒提取率最低，成本也最低。在操作过程中还发现，lgc试剂盒和宝生物试剂盒的操作步骤比较繁琐，天根试剂盒的操作最简便快捷。 3种dna提取试剂盒提取的基因组dna浓度和纯度比较见图1和图2。从图1中可以看出，无论是玉米、水稻还是大豆，lgc试剂盒提取的dna浓度为最高，宝生物和天根试剂盒提取的玉米和水稻的dna浓度比较接近，但提取的大豆dna浓度有明显差异，天根试剂盒提取的较低。从图2

6、中可以看出，就大豆而言，天根试剂盒提取dna纯度最高，宝生物试剂盒提取的次之，lgc试剂盒提取的最低；就玉米而言，lgc试剂盒提取的dna纯度最高，宝生物试剂盒提取dna纯度次之，天根试剂盒提取的最低；就水稻而言，lgc试剂盒提取的dna纯度最高，天根试剂盒提取dna纯度次之，宝生物试剂盒提取的最低。 2.2 3种dna试剂盒提取基因组dna的pcr验证结果分析 使用3种dna试剂盒分别提取的玉米、水稻、大豆种子的基因组dna进行pcr反应，扩增camv35s启动子基因结果如图3。从图3中可以看出，在均取1 l dna进行pcr反应的情况下，pcr反应扩增camv35s启动子来检测提取的dna

7、，宝生物和天根试剂盒的图谱较清晰，lgc试剂盒效果较差。 3 小结与讨论 天根试剂盒采用的是离心柱法，dna损耗量较大，但是对于日常检测提取的样品是足够使用的。由于其对样品需求量小、耗时短、操作简单、成本低、纯度好，在日常检测中应用较广。宝生物试剂盒在样品使用量上较大，水浴时间也较长，操作步骤较天根试剂盒更为繁琐一些。英国lgc类型属于磁珠型，试剂盒内包含一个小的磁力架（可放置2个1.5 ml离心管），过程中不使用酚和氯仿，操作中不需要高速离心，提取的dna浓度较高，但成本也较高。综上所述，天根dna提取试剂盒dp305较适合从作物种子中提取基因组dna进行转基因成分检测。 参考文献： 1 j

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