2.2动物细胞工程PPT课件

1、二、植物体细胞杂交1、在植物体细胞杂交实验中所用的技术手段有哪些？其理论基础是？2、如何去除植物细胞的细胞壁？3、人工诱导原生质体融合的方法？4、原生质体融合成功的标志是？5、植物体细胞杂交技术的意义?6、植物细胞工程应用于哪些方面？克服远缘杂交不亲和的障碍植物细胞融合，植物组织培养 细胞膜的流动性，细胞全能性 第1页/共39页24日下午，中国科学院神经科学研究所的孙强团队宣布，成功克隆出了两只食蟹猴。这是世界首个体细胞克隆猴。人类首次通过体细胞核移植的方式克隆出来的灵长类动物。 克隆猴的到来给未来更多可能性从落后到并跑，如今领先世界而我们，有幸见证了一个伟大时代的开始，更可以期待一个更加美好

2、的未来。第2页/共39页常用的技术手段： 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体的制备2.2 动物细胞工程动物细胞工程（基础）第3页/共39页1.动物细胞培养的概念 从动物机体内取出相关组织，将它分散成单个细胞，放在适宜的培养液中，让这些细胞生长和增殖。2.动物细胞培养的原理：一、动物细胞培养 3.培养过程（理解细胞贴壁、接触抑制、原代培养、传代培养新概念）细胞的增殖第4页/共39页细胞贴壁:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.第5页/共39页细胞接触抑细胞接触抑制制 细胞在贴壁细胞在贴壁生长过程中，随生长过程中，随着细胞分裂

3、，数着细胞分裂，数量不断增加，最量不断增加，最后形成一个单层，后形成一个单层，此时细胞间相互此时细胞间相互接触，细胞分裂接触，细胞分裂和生长停止，数和生长停止，数量不再增加。量不再增加。第6页/共39页取材细胞悬液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液（可用胃蛋白酶吗？）原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质重新用胰蛋白酶处理贴壁细胞（动物胚胎或幼龄动物的组织、器官）从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养使细胞充分接触培养液，更容易进行物质交换第7页/共39页4.动物细胞

4、培养的条件无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境 培养液、用具无菌处理；培养液中加抗生素； 定期更换培养液（防止细胞代谢产物积累对细胞的毒害） 营养培养液：水、无机盐、葡萄糖、氨基酸、微量元素、维生素、促生长因子、动物血清（血浆） 适宜的温度和pH哺乳动物：T:36.5T:36.50.50.5 pH:7.27.4 pH:7.27.4气体环境（95%空气+5%CO2） O O2 2：有氧呼吸等细胞代谢必需的 COCO2 2: :维持培养液的pHpH与植物组织培养中所用培养基的区别？补充合成培养基中所缺的成分，如生长因子第8页/共39页（1 1）生产蛋白质生物制品： 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 （2

5、 2）基因工程受体细胞的培养（3 3）用于检测有毒物质（根据变异率）（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究（5 5）培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植动物细胞培养的应用 第9页/共39页1.动物核移植的概念：动物核移植的概念： 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。2、原理：动物细胞的细胞核具有全能性。用核移植方法得到的动物称为克隆动物。胚胎细胞核移植、体细胞核移植3、过程：第10页/共39页第11页/共39页1、受体细胞为减数第二次分裂中期的卵母细胞的 原因？卵母细胞比较大，易操作；细胞质中含有使体细胞核

6、全能性表达出来的物质3、克隆过程运用的技术手段？动物体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植4、克隆牛的大部分性状与谁一样？完全一样吗？供体牛5、此技术的繁殖方式属于？无性繁殖2、供体牛一般选传代10代以内的细胞，为什么？保证正常的二倍体核型，以保证供体细胞正常的遗传基础细胞质中的遗传物质；环境第12页/共39页体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景1.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2.保护濒危物种 3.转基因克隆动物作为生物反应器，产医用蛋白4.用于组织器官的移植5.5.了解胚胎发育及衰老过程6.6.用克隆动物做疾病模型，追踪研究疾病发展过程，治疗疾病第13页/共39页体细

7、胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题1.1.成功率非常低2.2.绝大多数克隆动物还存在健康问题，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等3 3、克隆动物食品的安全性问题第14页/共39页动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基细胞增殖细胞增殖培养结果培养结果培养目的培养目的培养基特有培养基特有成分

8、成分培养基性质培养基性质原理原理第15页/共39页回顾一动物细胞培养1、动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性（ ）2、简述动物细胞培养的过程？2、培养动物细胞时，需要使用两次胰蛋白酶，这两次的作用分别是？3、原代培养的细胞是指从贴壁生长到发生接触抑制的细胞（ ）区分原代培养和传代培养4、动物细胞培养一般能够传到4050代，但其遗传物质发生了改变（ ）5、为了防止培养过程中发生微生物污染，应将培养箱抽成真空以消毒灭菌（ ）6、动物培养基与植物培养基的区别？错错错错细胞增殖怎样保证无菌无毒的环境？第16页/共39页2、受体细胞为减数第二次分裂中期的卵母细胞的 原因？卵母细胞比较大，易操作；细胞质中

9、含有使体细胞核全能性表达出来的物质3、克隆过程运用的技术手段？动物细胞培养、动物体细胞核移植、胚胎移植4、克隆牛的大部分性状与谁一样？完全一样吗？供体牛5、此技术的繁殖方式属于？无性繁殖细胞质中的遗传物质；环境1、简述动物体细胞核移植技术的原理及过程？回顾二动物体细胞核移植技术第17页/共39页第18页/共39页第19页/共39页4、过程、过程融合完成的标志：融合成功的标志：两个或多个细胞核融合为一个细胞核。杂交细胞进行有丝分裂植物体细胞杂交与动物细胞融合的主要区别？第20页/共39页5.意义：意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植

10、物之间）杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为可能。6.应用：应用：最重要的用途是最重要的用途是制备单克隆抗体制备单克隆抗体第21页/共39页思考？1. 1. 抗体由何种细胞产生？抗体由何种细胞产生？如何产生？如何产生？2. 2. 抗体抗体的化学本质是什么？的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？主要分布在哪里？3. 3. 用传统的方法如何获得抗体？用传统的方法如何获得抗体？四、单克隆抗体四、单克隆抗体第22页/共39页第23页/共39页 单克隆单克隆抗体抗体: : 单个细胞克隆产生的化学单个细胞克隆产生的化学 性质单一、特异性强的抗体性质单一、特

11、异性强的抗体v利用浆细胞产生抗体的功能v利用肿瘤细胞无限增殖的特性v利用细胞融合技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞v利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞设计方案：第24页/共39页第25页/共39页第一次筛选是为了得到杂交瘤细胞，淘汰掉B B淋巴细胞与B B淋巴细胞的融合类型及骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞的融合类型。 第二次筛选是进行抗体检测，为了得到能产生单一抗体的杂交瘤细胞。第26页/共39页动物细胞融合：1、动物细胞融合的原理： 动物细胞融合技术常用的诱导方法： 。2、植物体细胞杂交和动物细胞融合的主要区别？单克隆抗体的制备：1、选取的细胞是：2、该过程共筛选了几次？目的各是？3、杂交瘤细胞的

12、优点？4、单克隆抗体的优点？特异性强、灵敏度高、并能大量制备灭活的病毒、聚乙二醇、电激、离心、震动效应B细胞、骨髓瘤细胞既能大量繁殖，又能产生专一性抗体细胞膜的流动性第一次筛选杂交瘤细胞；第二次筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞第27页/共39页第28页/共39页第29页/共39页阳性孔阳性孔第30页/共39页5 5、单克隆抗体的优点是什么？既能迅速大量增殖，又能产生单克隆抗体既能迅速大量增殖，又能产生单克隆抗体动物细胞培养、动物细胞融合动物细胞培养、动物细胞融合特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备第31页/共39页（1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛应用最广泛应用 准确

13、、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速第32页/共39页第33页/共39页1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.A.经过免疫的B B淋巴细胞 B.B.没经过免疫的T T淋巴细胞C.C.经过免疫的T T淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞A第34页/共39页2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（正确的是（ ）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.操作步骤基本相同操作步骤基本相同 C.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 D第35页/共39页3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ ）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴