DNA重组技基本工具PPT学习教案

1、会计学1DNA重组技基本工具重组技基本工具第第2页页/共共14页页第1页/共14页第第3页页/共共14页页第2页/共14页第第4页页/共共14页页第3页/共14页第第5页页/共共14页页第4页/共14页基因拼接技术或基因拼接技术或DNADNA重组技术重组技术生物体外生物体外基因基因DNADNA分子水平分子水平人类需要的基因产物人类需要的基因产物剪切剪切 拼接拼接 导入导入 表达基因重组基因重组第第6页页/共共14页页第5页/共14页 限制酶主要从原核生物限制酶主要从原核生物( (主要是主要是微生微生物物) )中分离纯化出来的。它们能够识别双中分离纯化出来的。它们能够识别双链链DNADNA分子中

2、某种特定核苷酸序列，并且分子中某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二脂键断开。间的磷酸二脂键断开。 酶的作用有什么酶的作用有什么特点？特点？ 特异性。特异性。 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割在特定的切点上切割DNA分子。分子。第第7页页/共共14页页第6页/共14页 例如，例如，EcoR限制酶限制酶能识别能识别GAATTC序列序列，并在，并在G和和A之之间切开。间切开。第第8页页/共共14页页第7页/共14页问题：问题：1.EcoRI、SmaI限制

3、酶识别的序列是否都为限制酶识别的序列是否都为6个核苷酸？个核苷酸？ 2.是否都产生粘性末端？是否都产生粘性末端？第第9页页/共共14页页第8页/共14页2. DNA连接酶“分子缝合针” DNADNA连接酶连接酶可把黏性末端可把黏性末端之间的缝隙之间的缝隙“缝缝合合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的来，这样一个重组的DNADNA分子就形成了。分子就形成了。DNA连接酶可以分为几类？有什么区别？连接酶可以分为几类？有什么区别？EcoliDNA连接酶：连接酶： 粘性末端粘性末端T4DNA连接酶：连接酶： 粘性末端、平末端粘性末端、平末端第第10页

4、页/共共14页页第9页/共14页3.基因进入受体细胞的载体”分子运输车” 最常用的质粒是大肠杆菌的最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的四环素的标记基因标记基因。质粒的存在。质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内作用，但复制只能在宿主细胞内成。成。什么是质粒？什么是质粒？第第11页页/共共14页页第10页/共14页作为运载体必须具备哪些条件？1 1）能够在宿主细胞中）能够在宿主细胞中复制复制并稳定地并稳定地保存保存。2 2）载体）载体DNADNA必须有一个或多个必须有一个或多个限制酶切点限制酶切点，以便目的基因插，以便目的基因插入到载体上去。入到载体上去。3 3）具有某些）具有某些标记基因标记基因，便于进行，便于进行筛选筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。4)4)载体载体DNADNA必须是安全的必须是安全的, ,不会对受体细胞有害不会对受体细胞有害, ,或不能进或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去入到除受体细胞外的其他生物细胞中去; ;5) 5) 载体载体DNADNA分子大小应适合分子大小应适合, ,以便提取和在体外进行操作以便提取和在体外进行操作, ,太大就不便操