索氏提取法步骤

1、索氏抽提法测定粗脂肪含量的改进钟红舰1魏红2( 1 农业部农产品质检中心2 河南省商丘市质量技术监督检验中心)摘要! 将粮食、油料脂肪测定方法的抽提过程和抽提前后采用的处理手段进行改进, 并将热浸提- 油重法、残余法和国标法进行多方面比较对照试验。结果表明, 3 种方法测定的结果无 显著性差异, 在一定条件下 3 种方法可以相互代替使用。关键词! 测定; 粗脂肪含量; 索氏抽提法; 浸提中图分类号: TS224文献标识码: A文章编号: 1009- 1807 ( 2004) 02- 0039- 02粗脂肪含量是粮食、油料、饲料等产品标准中重要的质量指标, 是评价产品品质, 组织生产的重要依据之

2、一。在国内 外测定粗脂肪含量的 10多种方法中, 索氏抽提法是应用最广泛的测定方法。在实际生产中, 此法存在的问题主要是抽提时间过长和抽提结束后抽提瓶不易恒重。围绕这些问题, 对抽提过程和抽提前后采用的处理手段进行了改进。以国标方法为参照, 热浸提- 油重法和残余法为改进方法, 对照比较这 3 种检测方法的测定结果。1 方法原理索氏提取法测定脂肪是将样品放在抽提筒内以水浴蒸馏冷凝的乙醚进行回流浸提, 一般要十几个小时。热浸提- 油重法由于样品处于高温溶剂中, 分子运动加快, 使脂肪的浸出速度加快, 因而 大大地缩 短了浸提 时间, 从而加快了测定速度。一般完成样品的整个提取过 程不到 2h。此

3、法中铝杯可代替玻璃瓶, 电热板可代替水浴加热, 抽提杯容易恒重, 而且抽提杯不易被污染, 操作简单容易。残余法不同之处在于采用抽提过脂肪的残余物的质量来计算脂肪含量。较以前的残渣法相比, 其不需要恒重纸袋质量, 直接在电子天平上称出试样质量, 抽提前后样品的质量差即为浸出的脂肪含量。测得的结果为原样脂肪含量, 不是干基脂肪含量, 与国标法测得的结果一致。2检测方法2 1试剂分析纯的无水乙醚或沸程为30-60 的石油醚。2 2仪器索氏脂肪提取器、FOSS 2055 型脂肪测定仪、电子天平。2 3试样制备选取 具 有代 表 性的 样 品 200g,粉碎后全部通过 60 目筛, 装于密封容器中, 防

4、止试样成分的变化。2 4分析步骤2 4 1国标法按 GB/ T5512 食 品中脂 肪的测定方法或 GB/ T 6433 饲料 粗脂肪测定方法进行检测。为使抽提终点有一量化的概念, 消除不同人员目测产生的差异, 同时避免检查抽提终点时乙醚大量挥发伤害检验人员的健康。采取同时平行测定 6 个 样品, 8h 后取出一个抽提瓶, 以后每隔 2h 取出一个, 直到样品脂 肪含量不 再增加 为止。测出不同类别的样品需要的抽提时间, 可作为日常工作的参照, 也是改进法试验条件确定的依据之一。样品测定脂肪需要的抽提时间见表 1。表 1 样品 测定脂肪需要的抽提时间样品名称花生大豆鱼粉抽提时间 ( h)201

5、6 1816样品名称肉粉方便面玉米抽提时间 ( h)181082 4 2热浸提- 油重法称样 1 5g ( M ) 于滤纸筒中,烘干。把滤纸筒放到脂肪测定仪中。铝 杯 在 105 # 2 条 件 下 恒 重( M 1) 。放到仪器加热板上, 压下仪器连接手柄, 使铝杯与回流器紧密连接。从加液孔加入乙醚 80mL, 接通冷凝水。视脂肪 含量设定 仪器条 件为: 加 热 温 度 135 , 浸 提 30 90min, 淋 洗 30min,试 剂 回 收10min, 蒸干 5m in。取下铝杯, 105粮油加工与食品机械% 2004 年第 2 期39粮油加工与食品机械油脂工程表 2 样品脂肪含量的重

6、复性测定结果样品名称 检验方法12345平均置花生热浸提52. 8352. 6752. 6452. 9952. 7152. 77残余法52. 7752. 6452. 4952. 8852. 8452. 72鱼粉热浸提10. 6810. 5210. 3610. 7710. 4410. 55残余法10. 6610. 4310. 5610. 3410. 4510. 48玉米热浸提3. 683. 543. 883. 723. 573. 68残余法3. 663. 803. 743. 563. 553. 66表 4 不同实验室脂肪含量 ( % ) 测定结果比较比对单位样品名称样品编号中心测定值热浸提残余法

7、比对方测定值结论农业部谷物品质质检中心玉米M - 64. 484. 324. 17符合大豆S- 322. 5922. 1422. 17符合农业部油料质检中心( 武汉)油菜籽2000- 01940. 4339. 9140. 20符合农业部食品质检中心( 武汉)油菜籽2000M - 1344. 7944. 5945. 08符合# 2 烘箱中干燥 30 min, 在干燥器中冷却, 称重 ( M 2) 。脂肪含量= ( M 2- M 1) & 100/ M2 4 3残余法称取式样 2g ( M ) 用 滤纸包好( 准确至 0 000 2g) , 105 # 2 烘箱中干 燥 3h 取出, 在干燥器 中

8、冷却,称重 ( M 1) 。将样包装入索氏脂肪抽提器抽提筒中, 再倒入无水乙醚, 乙醚高度为完全浸泡样包, 连接好仪器各部分, 浸泡至少 16h。将浸泡后的无水乙醚放入抽提瓶中, 在抽提瓶中放入几粒玻璃球, 然后, 往抽提筒中重新 倒入无水乙醚 使之完全浸 泡样包, 连 接好仪器 各部分, 接通冷 凝水, 在 60 75 的水浴上加 热, 使乙醚回流, 控制 乙醚 回流次 数为 8次/ h。一般抽提 6 8h。抽提完毕,取出样包, 置样包于通风处使乙醚挥发。将样包放入 105 # 2 烘箱中干燥 2h, 取出, 在干燥 器中冷却, 称重 ( M 2) 。脂肪含量= ( M1- M 2) & 1

9、00/ M3 结果分析( 1) 样品 选取脂 肪含 量高的 花生、脂肪含量中等的鱼粉和脂肪含量较低的玉米, 采用热浸提- 油重法和残余法分别测定, 结果的重复性见表2。由表中数据看出两种测定方法的重现性都比较好。( 2) 选取一组样品分别用 3 种方法测定样品脂肪含量, 取 5 次测定结果的平均值为最终结果进行比较, 数据见表 3。两种测定结果无显著性差异 ( P 0 05) 。表 3 3 种方法测定样品脂肪含量( % )样品名称国标法热浸提残余法大豆19. 2919. 3619. 20花生52. 7552. 7752. 72鱼粉10. 5710. 5510. 48肉粉17. 2617. 36

10、17. 06方便面18. 3518. 4618. 29玉米3. 683. 683. 66小鱼料6. 196. 206. 09( 3) 为确定热浸提法和残余法的有效性和可比性, 与其他实验室测定结果进行了比较, 结果见表 4。绝对差均小 于 0 5% , 相 对 偏差 最 高为3 6% , 符合标准 GB/ T 6433- 1994、GB/ T5512- 85 不同实验室间重复性要求。4结论( 1) 国标法、热浸提- 油重法和残余法均具 有较好的重现 性和准确度, 说明两种改进方法测定结果准确可靠, 在一定条件下 3 种方法可以相互代替使用。( 2) 热浸提法的优势在于利用脂肪测定仪使试样浸入沸

11、腾的溶剂中,使脂肪 迅速进入溶 剂中。样 品不同时, 只需改变浸提时间, 淋洗时间改变没有浸提时间改变影响大。30min的淋洗时间足以使脂肪完全洗脱。( 3) 残余 法浸泡 时间可 利用 晚上, 由于不加热回流, 不必守护。回流时间可参照表 1 进行调整。外加的脂肪如方便面等油炸食品, 虽然含量高, 但脂 肪容易 浸出, 浸泡 后回 流2 3h 即可提取完全。( 4) 试验过程中应注意称量, 天平室的环境条件除满足一般要求外,相对湿度应 控制在 45% 以下。在 此条件下滤纸包在烘箱中干燥 2h 即达到恒重要求, 不必复烘。铝杯在整个抽提 过程中 一直 处于 135 的环 境中, 只需烘 30min 即达到恒重要求。与国标法相比节约了恒重所需的大量时间, 简化了试验操作。5) 脂肪测定仪同时可测定 6 个试样, 在 1 个工作日内可完成检测,实现脂肪快速、准确地测定。能满足日常生产和商贸交易中对脂肪含量测定的要求。残余法在一套提取器内可同时放置多个滤纸包, 同时测定多个样品, 显著提高了工作效率, 节省了水、电和试剂。残余法对大批量的样品脂肪检测时更能显现