实验二细菌人工培养

1、 实验二实验二 细菌的人工培养细菌的人工培养实验目的实验目的n了解人工培养基的制作。了解人工培养基的制作。n了解了解细菌的接种方法细菌的接种方法 分离培养方法分离培养方法平板划线法平板划线法 （混合菌液）（混合菌液）n了解了解细菌的生长现象细菌的生长现象液体、固体、半固体培养基液体、固体、半固体培养基 一、一、人工培养基的制备和种类人工培养基的制备和种类n1. 1.制备原则制备原则n2.2.制备程序制备程序 n3.3.常用培养基的分类常用培养基的分类 1. 1.制备原则制备原则l （1 1）适当的营养成分；）适当的营养成分；l （2 2）合适的酸碱度；）合适的酸碱度；l （3 3）配制后经灭菌

2、使之无菌，方可应用。）配制后经灭菌使之无菌，方可应用。 2.2.制备程序制备程序l配料配料熔化熔化测定及矫正测定及矫正phph分装分装灭菌灭菌备用备用配制方法配制方法（1）称量）称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和nacl，置于烧杯中。置于烧杯中。（2）溶化）溶化 加入所需水量加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。药品全部溶化。（3）调）调ph 用用1mol/l naoh溶液调溶液调ph至至7.2。（4）定容）定容 将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。（5

3、）加琼脂）加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。（6）分装、加塞、包扎。）分装、加塞、包扎。（7）高压蒸汽灭菌）高压蒸汽灭菌100pa灭菌灭菌20min。lblb培养基的配制：培养基的配制：成分：胰蛋白胨成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g、酵母提取物、酵母提取物(yeast extract) 5g氯化钠氯化钠(nacl) 10g、固体培养基另加、固体培养基另加 琼脂粉琼脂粉 15-20g，加双蒸水至，加双蒸水至1000ml, 用用5mol/l naoh（约（约0.2ml）调）调ph至至7.2，121灭菌灭菌30min。按物理状态不同划分按物理状

4、态不同划分固体培养基固体培养基 液体培养基液体培养基在液体培养基中加入一定量凝固剂，使在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态，琼脂含量一般为其成为固体状态，琼脂含量一般为1.5%-2.0%1.5%-2.0%琼脂含量一般为琼脂含量一般为0.3%-0.5%不加任何不加任何凝固剂凝固剂半固体培养基半固体培养基固体培养基常用来进行微生物的分离、固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏鉴定、活菌计数及菌种保藏 观察微生物的运动特征、分类鉴定及观察微生物的运动特征、分类鉴定及噬菌体效价滴定噬菌体效价滴定 用于增菌，大规模工业生产及在实验用于增菌，大规模工业生产及在实验室进行微生

5、物的研究室进行微生物的研究 3.3.常用培养基的分类常用培养基的分类按用途不同划分按用途不同划分基础培养基基础培养基鉴别培养基鉴别培养基含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物。比如比如 肉汤培养基。肉汤培养基。选择培养基选择培养基利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应利用细菌代谢产物不同而使指示剂显色反应不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如不同的原理，鉴别和鉴定细菌。如麦糠凯琼麦糠凯琼脂培养基。脂培养基。营养培养基营养培养基在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于物质，抑制不需要的微生物

6、的生长，有利于所需微生物的生长。所需微生物的生长。用来将某种或某类微生用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。物从混杂的微生物群体中分离出来。如如ss琼琼脂培养基。脂培养基。在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。如一类营养丰富的培养基。如血琼脂培养基。血琼脂培养基。特殊培养基特殊培养基如厌氧培养基。如厌氧培养基。用于厌氧菌的培养。用于厌氧菌的培养。3.3.常用培养基的分类常用培养基的分类 二、细菌的接种技术二、细菌的接种技术 分离培养接种法分离培养接种法平板划线法、平行划线法平板划线法、平行划线法 纯种细菌接种法纯种细

7、菌接种法 固体斜面培养基接种法固体斜面培养基接种法 液体培养基接种法液体培养基接种法 半固体培养基接种法半固体培养基接种法 无菌操作：无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行 常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。或接种锄、玻璃涂棒等。图6接种工具接种工具 细菌分离培养接种法的原理细菌分离培养接种法的原理 根据机械分离作用，根据机械分离作用，在无菌培养基中从混杂在无菌培养基中从混杂的标本中分离出所需的的标本中分离出所需的单个细菌生长繁殖所形单个细菌生长繁殖所形成的菌落。成的菌落。

8、1、以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液，将菌液点种在、以无菌操作用接种环取待分离纯化的菌液，将菌液点种在平板边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。平板边缘一处，取出接种环，烧去多余的菌种。 2、将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙（约、将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙（约45度角）伸入平度角）伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后从接种有菌然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线。的部位在平板上自左向右轻轻划线。 3、划线时平板面与接种环面成、划线时平板面与接种环面成30-40度角，以手腕力量在平板度角，以手腕力量在平板表面轻巧滑动划线表

9、面轻巧滑动划线, 线条要平行密集，充分利用平板表面积，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖.灼烧接种环。灼烧接种环。 4.用接种环先将培养物涂布于平板用接种环先将培养物涂布于平板1区并作数次划线区并作数次划线,再在再在2、3区依次划线。区依次划线。 5.每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，待冷后再划下一区域域 6.每一区域的划线均接触上一区域的接种线每一区域的划线均接触上一区域的接种线12次，使接种量逐次，使接种量逐渐减少，以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划

10、线分离法相渐减少，以获得单个菌落。其他操作与上述曲线划线分离法相同。同。 斜线斜线( (分区分区) )划线分离法划线分离法划线接种注意要点划线接种注意要点 划线时接种环与平皿约成划线时接种环与平皿约成30-40度角度角,轻轻接触轻轻接触,以腕力以腕力在琼脂表面轻快滑动在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面以后每次划线约占面积的积的1/41/5. 划线为连续划线划线为连续划线,不能间断不能间断.应占满平皿应占满平皿.划线不能交叉重划线不能交叉重复复. 每次划完后接种环应灭菌每次划完后接种环应灭菌.1、琼脂斜面接

11、种法、琼脂斜面接种法菌种：葡萄球菌、大肠菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养埃希菌等普通琼脂培养物；物；培养基：斜面固体培养培养基：斜面固体培养基；基；用途：扩增细菌、保存用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某菌种；或用于观察其某些生化特性些生化特性纯种细菌接种法纯种细菌接种法 2、液体接种法、液体接种法菌种：葡萄球菌或大肠埃菌种：葡萄球菌或大肠埃希菌、枯草杆菌等普通琼希菌、枯草杆菌等普通琼脂培养物；脂培养物；培养基：液体培养基；培养基：液体培养基；接种方法：液体接种法。接种方法：液体接种法。 从斜面菌种接入液体培从斜面菌种接入液体培养液；从液体培养液接入养液；从液体培养液接入液体培养液

12、；液体培养液；用途：扩增细菌，用于观用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定察细菌的生长特性或测定其生化特性。其生化特性。纯种细菌接种法纯种细菌接种法 3、半固体穿种接种法、半固体穿种接种法菌种：葡萄球菌、大肠埃菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌等普通琼脂培养物；希菌等普通琼脂培养物；培养基：半固体培养基培养基：半固体培养基接种方法：接种方法：穿刺接种法。穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养用接种针垂直地穿入培养基中心至底部；然后沿着基中心至底部；然后沿着原接种线将针拔出。原接种线将针拔出。用途：检验细菌的运动性用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。或观察细菌的生化反应。纯种细菌接种法纯种细菌

13、接种法 （1 1）固体培养基）固体培养基 形成菌落和菌苔。形成菌落和菌苔。 观察菌落的大小、形态、透明度、颜色、表面和边缘观察菌落的大小、形态、透明度、颜色、表面和边缘情况及菌落周围有无溶血环等。情况及菌落周围有无溶血环等。三三. .细菌生长现象观察（示教）细菌生长现象观察（示教）不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。（2 2）液体培养基）液体培养基均匀混浊生长均匀混浊生长菌膜形成（专性需氧菌）菌膜形成（专性需氧菌）沉淀生长（多见于链状排列的细菌）沉淀生长（多见于链状排列的细菌）（3 3）半固体培养基）半固体培养基可用于观察细菌有无可用于观察细菌有无动力。动力。痢疾志贺菌沿穿刺线痢疾志贺菌沿穿刺线生长，穿刺线清晰，生长