消毒剂消毒效果及有效期确认方案

1、1制药有限公司制药有限公司 GMP 文件文件 文件编码：ZLYF00505Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案消毒剂消毒效力及有效期确认验证方案起 草： 日期： 审 核： 批 准： 日期： 实施日期： 颁发部门：质量部分发部门：质量部、工程部消毒剂消毒效果及有效期确认2验证小组名单验证小组名单组长姓 名职务/职称部 门成员姓 名职务/职称部 门消毒剂消毒效果及有效期确认3文件编码：RVP-CV-006a-00立项申请审批表立项申请审批表

2、立项题目消毒剂消毒效果及有效期确认立项编号VP-CV-006a-00立项部门生产部申请日期 年 月 日确认对象消毒剂确认内容1、先决条件确认 2、人员资质确认 3、文件确认4、检测仪器仪表确认 5、菌种确认6、培养基和稀释液的配制确认 7、中和剂鉴定试验9、75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认10、消毒效力现场考察试验11、消毒剂储存有效期确认12 0.2%新洁尔灭溶液和 75%乙醇溶液消毒效力周期的确认审核意见 签 名：年 月 日方案编制及实施要求方案编制要求：消毒剂消毒效果及有效期确认方案由生产部 起草。实施要求：消毒剂消毒效果及有效期确认方案实施的时间为 2012 年 月消

3、毒剂消毒效果及有效期确认4方方案案审审核核和和批批准准文件名称：消毒剂消毒效果及有效期确认文件编码：VP-CV-006a-00编写人 日 期： 年 月 日姓名职务签名日期审 核 人批 准 人： 日 期： 年 月 日执行日期： 年 月 日 年 月 日确认总负责人批准 签 名: 年 月 日消毒剂消毒效果及有效期确认5验证小组人员名单：小组职务姓 名所在部门职 务组 长生产部成 员生产部成 员生产部成 员生产部成 员生产部成 员生产部成 员生产部成 员质量部成 员质量部成 员质量部成 员质量部成 员质量部成 员质量部成 员质量部成 员质量部成 员工程部消毒剂消毒效果及有效期确认6Tablet of

4、Content目录目录 1. 目的和范围目的和范围 .42. .43. .54. 定义与缩写定义与缩写 .55. 参考文件参考文件.56. 概述概述 .57. 确认前准备确认前准备 .78. 消毒剂消毒效力试验消毒剂消毒效力试验.89. 消毒剂有效期确认试验消毒剂有效期确认试验 .1310. 验证偏差和变更验证偏差和变更 .1611. 附录列表附录列表 .17消毒剂消毒效果及有效期确认71 1 目的目的 通过消毒剂消毒效果及有效期的确认，科学制订消毒程序，以保证各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒防止污染的效果，2 2 适用范围适用范围 本方案适用于洁净区的墙面、天

5、花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、记录台、凳子等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等。 3 3 职责职责3.1 消毒剂消毒效果及有效期确认小组组长职责3.1.1 负责组织编写消毒剂消毒效果及有效期确认方案，组织消毒剂消毒效果及有效期确认方案的培训和实施。3.1.2 负责消毒剂消毒效果及有效期确认方案实施过程的监控。3.1.3 负责组织收集各项确认数据，并对实验结果进行分析，制订消毒操作程序。3.2 生产部3.2.1 负责消毒剂的配制，及消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验的实施。3.2.2 负责消毒剂配制相关记录的填写，及消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验实施过程关键项目参数的记录

6、。3.2.3 负责配合质量部进行消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验的实施。3.3 质量部3.3.1 负责消毒剂消毒效果及有效期确认方案的审核、实施、实施过程的监控、归档；确认报告的发放、文件资料的保存。3.3.2 负责消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验实施过程中的取样送检，检验结果的跟踪。3.3.3 负责消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验实施过程中样品的检验，并出检验报告。3.3.4 负责组织对确认过程中的偏差进行调查、处理、评估。3.4 工程部3.4.1 负责保证提供消毒剂消毒效果及有效期确认各项试验的条件。4 4 描述描述4.1 本公司的洁净区分为十万级、万级和百级，拟定用于洁净区表面消毒

7、的有 2 种消毒剂：75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液。本次验证方案将选用以上 2 种消毒剂分别进行验消毒剂消毒效果及有效期确认8证试验。实验分为两部分：一是实验室考察部分；二是现场考察部分。4.2 消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期如下表： 消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期序序号号名称名称消毒对象消毒对象消毒方法消毒方法有效期有效期175%乙醇用于地面、墙面、器具、工作服、清洁布、拖布、洁净鞋水池、地漏和手的消毒。采用擦拭、喷洒、浸泡和液封方式密闭保存试验 6 天20.2%新洁尔灭溶液用于地面、墙面、器具、工作服、清洁布、拖布、洁净鞋水池、地漏和手的消毒。采用擦拭、喷洒、浸泡和液

8、封方式密闭保存试验 6 天4.3 作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。在利用消毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于 10 分钟，利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于 10 分钟。4.4 实验室考察部分，定量悬浮试验法适用于浸泡或液封方式的消毒方法；表面实验法适用于擦拭或喷洒方式的消毒方法。洁净区设施表面材质有不锈钢、镀锌板及玻璃三种，故表面试验法选用不锈钢载片、镀锌板及玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。 两种试验方法作用的消毒剂序号序号试验方法试验方法消毒剂消毒剂175%乙醇2表面实验法0.1%新洁尔灭溶液375%乙醇4定量悬浮试验法0.1%新洁尔灭溶液

9、4.5 现场考察试验部分选择 10 万级洁净区、万级的微生物限度室、超净工作台设备表面消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。5 确认确认程序程序5.1 菌种序号序号名称名称序列号序列号1金黄色葡萄球菌CMCC(B)260032大肠埃希菌CMCC(B)44102消毒剂消毒效果及有效期确认9白色念珠菌CMCC(F) 98001 5.2 培养基序号序号名称名称备注备注1营养琼脂培养基2营养肉汤培养基3改良马丁琼脂培养基4改良马丁液体培养基培养基经 121，20min 灭菌备用5大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085）6玫瑰红钠琼脂培养接触碟（编号：BZW15129）规格：55mm

10、，取样面积为 25m25.3 消毒液拟定选用的中和剂序号序号消毒剂名称消毒剂名称中和剂中和剂备注备注175%乙醇20.1%新洁尔灭溶液1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯 80中和剂经 121，20min 灭菌备用。5.4 器具及设备序号序号名称名称1无菌移液管2锥形瓶3无菌试管4漩涡混合器5恒温水浴锅6恒温恒湿培养箱7恒温恒湿培养箱消毒剂消毒效果及有效期确认10 5.5稀释液 0.9%无菌氯化钠溶液、PH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液6 中和剂鉴定试验中和剂鉴定试验6.1 试验目的通过该试验，确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用，对试验用菌剂及其恢复期培养示范有害或不良影响。6.2 菌液的

11、制备及计数6.2.1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌工作菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，3035培养 1824 小时。取上述培养物用 0.9无菌氯化钠溶液做 10 倍系列稀释成11085108CFU/ml 的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为 11085108CFU/ml，可不再用 0.9无菌氯化钠溶液稀释） 。计数时，将 11085108CFU/ml 的工作菌液 10 倍系列稀释成含 50100CFU/ml 菌液，并同时采用营养琼脂培养基 3035培养 2 天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。6.2.2 白色念珠菌工作菌液

12、的制备接种白色念珠菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，2328培养 2448 小时。取上述培养物用 0.9无菌氯化钠溶液做 10 倍系列稀释成 11085108CFU/ml 的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为 11085108CFU/ml，可不再用 0.9无菌氯化钠溶液稀释） 。计数时，将 11085108CFU/ml 的工作菌液 10 倍系列稀释成含50100CFU/ml 菌液，并同时采用改良马丁琼脂培养基 2328培养 3 天计数。计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。6.3 鉴定试验操作6.3.1 配制 75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液，具体操作执行清洁剂和消毒剂

13、管理 。将配置好的消毒剂置 201恒温水浴锅中备用。6.3.2 分组操作试验分组及稀释操作方法简表组号混合液 A混合液 B取混合液 B 或混合液B 的稀释级溶液0.5ml 平板计数（2 皿/组）消毒剂消毒效果及有效期确认11具体操作第 1 组目的：观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。操作：取消毒剂 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混匀作用 10min 后，取混合液 0.5ml+稀释液 4.5ml，混匀作用 10min，取 0.5ml 注皿，平行制备 2 皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置 3035培养 3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置 23

14、28培养 5 天计数计数。第 2 组目的：观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。操作：取消毒剂 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混匀作用 10min 后，取混合液 0.5ml +中和剂 4.5ml，混匀作用 10min，用稀释液稀释成 10-1。分别取未稀释溶液（混合液 0.5mll+中和剂4.5ml 的混合液）及 10-1 0.5ml 注皿，各平行制备 2 皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于 3035培养 3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于 2328培养 5 天计数。第 3 组目的：观察中和剂是否有抑菌性操作：取中和

15、剂 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混匀作用 10min，取混合液 0.5ml l+稀释液 4.5ml，混匀作用 10min 后，用稀释液进行 10 倍系列稀释成 10-2、10-3。取相应稀释级 0.5ml 注皿，取 0.5ml 工作菌液加入下列溶液中取混合液 A 0.5ml加入下列溶液1消毒剂 4.5ml稀释液 4.5ml混合液 B、10-12消毒剂 4.5ml中和剂 4.5ml混合液 B、10-13中和剂 4.5ml稀释液 4.5ml10-2、10-34中和产物4.5ml（消毒液与中和剂比例为 1:1）稀释液 4.5ml10-2、0-35稀释液 4.5ml稀释液 4.5ml10-2、1

16、0-36稀释液和中和剂各 1.0ml 注入无菌平皿中，各制备 2 皿。消毒剂消毒效果及有效期确认12各稀释级平行制备 2 皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置 3035培养 3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置3035培养 3 天计数计数。第 4 组目的：观察中和产物，或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。操作：取消毒剂和中和剂 1:1 的混合液 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混匀作用 10min，取混合液0.5ml l+稀释液 4.5ml，混匀作用 10min 后，用稀释液进行 10 倍系列稀释成 10-2、10-3。取相应稀释

17、级 0.5ml 注皿，各稀释级平行制备 2 皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置 3035培养 3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置 3035培养 3 天计。第 5 组目的：作菌落数对照用操作：取稀释液 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混匀作用 10min，取混合液 0.5ml l+稀释液 4.5ml，混匀作用 10min 后，用稀释液进行 10 倍系列稀释成 10-2、10-3。取相应稀释级 0.5ml 注皿，各稀释级平行制备 2 皿。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置 3035培养 3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠

18、琼脂培养基，倒置3035培养 3 天计数。第 6 组目的：作为阴性对照用操作：分别取稀释液和中和剂各 1.0ml 注入无菌平皿中，各制备 2 皿。结果判断试验结果应符合下列全部条件，判断所选中和剂合格。第 1 组无菌生长，或仅有少数试验菌菌落生长。第 2 组菌落数比第 1 组菌落数多，但比第 3、4、5 组菌落数少，且符合下表要求第 1 组平板平均菌落数第 2 组平板平均菌落数05x(x+5)消毒剂消毒效果及有效期确认13第 3、4、5 组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过 15%。计算公式如下：（3 组间菌落平均数-各组菌落平均数）的绝对值之和误差率10033 组间菌落平均数第 6

19、 组无菌生长。否则，说明试剂有污染，应重新进行试验。7 定量悬浮试验定量悬浮试验 0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液消毒效力的确认（定量悬浮试验法）目的：由于 0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液要通过浸泡或液封消毒，采用将消毒剂置于无菌具塞试管中通过定量悬浮试验法，确定其消毒效力是否符合要求。程序：（1）菌种的选择 由于 0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌； （2）菌液制备：取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌接种于营养肉汤培养基中，于3035培养 1824h 即得，培养后微生物浓度应不少于 106cfu/m

20、l。取白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中，于 2328培养 2448h 即得，培养后微生物浓度应不少于 106cfu/ml。（3）消毒剂的配制：按照清洁剂、消毒剂配制使用程序进行配制 0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液，现配现用。（4）试验方法：（a）在室温条件下将配制好的 0.2%新洁尔灭溶液（或 75%乙醇溶液）按 9ml/支分注于 27 支无菌具塞试管中，按照“5 分钟组”、 “10 分钟组”和“15 分钟组”共3 组每组 9 支，进行分组编号。（b）取供试菌液（106cfu /ml 的金黄色葡萄球菌菌液，106cfu /ml 的大肠埃希菌菌液，106cfu /ml 的白色念珠菌菌液

21、）1ml 按照下表，分别接入到盛有 9ml0.2%新洁尔灭溶液（或 75%乙醇溶液）的试管中（已进行 10 倍稀释） ，轻轻摇动，混合均匀，并立即开始计时。5 分钟组10 分钟组15 分钟组y(y+0.5y)消毒剂消毒效果及有效期确认14金黄色葡萄球菌1ml/支，共 3 支1ml/支，共 3 支1ml/支，共 3 支大肠埃希菌1ml/支，共 3 支1ml/支，共 3 支1ml/支，共 3 支白色念珠菌1ml/支，共 3 支1ml/支，共 3 支1ml/支，共 3 支（c） 消毒剂的稀释分别在 5 分钟、10 分钟和 15 分钟时迅速吸取 1ml 菌药混合液，加入到 9ml（1%卵磷脂 +0.1

22、%聚山梨酯 80）中和剂中，迅速混匀中和 10 分钟，分别取上述经中和的“5 分钟组”、 “10 分钟组”和“15 分钟组”的接种细菌的消毒液，倾入过滤杯滤过，然后各用 0.9%无菌生理盐水 50ml 清洗滤膜，滤过，重复用 50ml0.9%无菌生理盐水的洗涤共3 次。取下滤膜，含细菌的膜放入营养琼脂平板内，含真菌的膜放入玫瑰红钠琼脂平板内，含菌膜面向上。细菌于 30-35的生化培养箱内培养 3d，真菌于 23-28的霉菌培养箱内培养 5d。培养后在明亮处，对平板上的菌落数进行计数，记录计数结果。d 阳性对照分别将 106cfu/ml 金黄色葡萄球菌菌液、106cfu/ml 大肠埃希菌菌液、1

23、06cfu/ml 的白色念珠菌菌液用无菌注射用水进行梯度稀释至浓度为 10100cfu/ml，取稀释液体1ml 于平皿中，倾注冷却至 45营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基混匀，待凝固后于细菌于 30-35的生化培养箱内培养 3d，真菌于 23-28的霉菌培养箱内培养 5d。培养结束后对平板上的菌落数进行计数，记录计数结果。0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认试验组菌落数（cfu/ml）10-1与消毒剂作用时间菌种名称123平均菌落数（cfu/ml）杀菌率金黄色葡萄球菌大肠埃希菌5 分钟白色念珠菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌10 分钟白色念珠菌金黄色葡萄球菌15 分钟大肠埃希菌消毒剂消毒效果及有效期

24、确认15白色念珠菌 稀释级菌种名称10-310-410-5平均菌落数（cfu/ml）金黄色葡萄球菌大肠埃希菌阳性对照白色念珠菌确认结果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日 75%乙醇溶液消毒效力的确认试验组菌落数（cfu/ml）10-1与消毒剂作用时间菌种名称123平均菌落数（cfu/ml）杀菌率金黄色葡萄球菌大肠埃希菌5 分钟白色念珠菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌10 分钟白色念珠菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌15 分钟白色念珠菌阳性对照 稀释级菌种名称10-310-410-5平均菌落数（cfu/ml）消毒剂消毒效果及有效期确认16金黄色葡萄球菌大肠埃希菌白色念珠菌确认结

25、果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日8 表面试验表面试验 75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认（表面试验法）目的:由于 75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液要通过擦拭消毒，故选用不锈钢载片、镀锌片及玻璃裁片进行表面试验法，确定其消毒效力是否符合要求。程序：（1）菌种选择：由于 75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故表面试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌。（2）工作菌液制备 取金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌分别接种于营养肉汤培养基中，于 3035培养 1824h 即得，培养后微生物浓度应不少于 106cfu/ml。取

26、白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中，于 2328培养 2448h 即得，培养后微生物浓度应不少于 106cfu/ml。（3）染菌不锈钢载片制备：将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为 11085108CFU/ml 的菌液 0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备消毒剂消毒效果及有效期确认17两个染菌不锈钢载片；染菌镀锌载片制备：将经灭菌的镀锌载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为 11085108CFU/ml 的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染

27、菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备两个染菌镀锌载片；染菌玻璃载片制备：因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。进行菌液滴染前，用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积（50mm50mm） ，标注清晰。菌液滴染操作同染菌不锈钢载片制备。（4）取样 试验组：将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上，消毒剂作用时间分别为5min、10min、15min，不锈钢载片、镀锌载片及玻璃载片每个作用时间分别制备 2 个。作用结束后，用接触碟取样（接触碟规格：55mm，取样面积为 25m2） 。取金黄色葡萄球菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085） ；取大肠埃希菌

28、用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085） ； 取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟（编号：BZW15129） 。接触碟取样方法：打开接触碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触 10秒左右，盖上碟盖。对照组：对照组的活菌浓度同工作菌液的制备。阴性对照：用接触碟在已灭菌的载片上（未染菌片的载片）按压取样，操作同上。每种载片及每种接触碟平行制备两份。（5）培养：将取样金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的接触碟倒置于 3035培养 3 天计数；取样白色念珠菌的接触碟倒置于 2328培养 5 天计数计数。（6）结果计算：计算试验组和对照

29、组的活菌浓度 （CFU/ml） ，并换算为对数值（N） ，并按下式计算杀灭对数值: 杀灭对数值 (KL)对照组平均活菌浓度的对数值（NO）试验组活菌浓度对数值（NX）可接受标准：杀灭对数值 (KL)应不低于 3 个对数单位。75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认杀灭对数平均值（KL）不锈钢载片（min）玻璃载片（min）镀锌载片（min）序号消毒剂名称工作菌液510155101551015金黄色葡萄球菌175%乙醇大肠埃希菌消毒剂消毒效果及有效期确认18白色念珠菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌20.2%新洁尔灭溶液白色念珠菌可接受标准 阴性对照无菌生长； 杀灭对数值 (KL)应不低于 3

30、 个对数单位确认结果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日9 9 消毒效力现场考察试验消毒效力现场考察试验目的：确认消毒剂对相应设施的实际消毒效力。操作：（1）生产车间岗位操作人员按照洁净区卫生清洁程序 、 地漏的清洁消毒程序 、 10 万级洁净区洁具清洁消毒程序 、 万级洁净区洁具清洁消毒程序 、 地漏清洁程序进行清洁。（2）生产车间岗位操作人员，使用放冷的注射用水，按照清洁剂、消毒剂配制使用程序进行 75乙醇溶液、0.2%的新洁尔灭溶液配制，现配现用。按照洁净区卫生清洁程序进行清洁消毒，分别清洁消毒 10 万级洁净区各房间的顶棚、墙面、工作台面和墙面、地漏、水池下

31、水；10 万级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布；万级区微生物限度室等房间顶棚、墙面、工作台面和墙面、地漏、水池下水，万级洁净区的工作鞋、消毒剂消毒效果及有效期确认19清洁布、拖布等区域。（3）消毒 15 分钟后，由 QA 人员到车间按照接触碟法取样程序进行洁净区表面微生物的采样；用浸泡或液封方式的采用无菌吸管取浸泡液或液封液 1ml，连续逐日测定，共测定 3 次。记录测定结果。可接受标准：所监测的洁净区的微生物均在公司环境质量控制范围内，各洁净区符合各自的洁净级别要求。 75%乙醇溶液消毒后环境监测表面微生物测定结果 单位：cfu/皿平均菌落数监测区域洁净级别第一次第二次第三次可接受标准是否合格裁

32、剪间口是口否包装间口是口否洁具间10 万级50CFU/25cm2口是口否无菌检查室万级25CFU/25cm2口是口否微生物限度室操作台百级1CFU/25cm2口是口否确认结果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日0.2%新洁尔面溶液消毒后环境监测表面微生物测定结果 单位：cfu/皿平均菌落数监测区域洁净级别第一次第二次第三次可接受标准是否合格裁剪间口是口否包装间口是口否洁具间10 万级50CFU/25cm2口是口否无菌检查室万级25CFU/25cm2口是口否微生物限度室操作台百级1CFU/25cm2口是口否确认结果评价：消毒剂消毒效果及有效期确认20操作人： 日期：

33、年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日0.2%新洁尔灭溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿平均菌落数监测区域洁净级别第一次第二次第三次可接受标准是否合格裁剪间地漏口是口否包装间地漏口是口否洁具间水池下水10 万级50CFU/25cm2口是口否微生物限度室地漏口是口否微生物限度室水池下水万级25CFU/25cm2口是口否确认结果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日75%溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿平均菌落数监测区域洁净级别第一次第二次第三次可接受标准是否合格裁剪间地漏口是口否包装间地漏口是口否洁具间水池下水10 万级50CFU/25cm2

34、口是口否微生物限度室地漏口是口否微生物限度室水池下水万级25CFU/25cm2口是口否确认结果评价：消毒剂消毒效果及有效期确认21操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日75%乙醇溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿平均菌落数监测区域洁净级别第一次第二次第三次可接受标准是否合格工作鞋口是口否清洁布口是口否拖布10 万级50CFU/25cm2口是口否工作鞋口是口否清洁布口是口否拖布万级25CFU/25cm2口是口否确认结果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日0.2%新洁尔灭溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿平均菌落数监测区域洁净

35、级别第一次第二次第三次可接受标准是否合格工作鞋口是口否清洁布口是口否拖布10 万级50CFU/25cm2口是口否工作鞋口是口否清洁布口是口否拖布万级25CFU/25cm2口是口否确认结果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日1010 消毒剂储存有效期确认试验消毒剂储存有效期确认试验消毒剂消毒效果及有效期确认22目的：通过该试验，确定消毒剂在有效期内是稳定的，并且消毒效力不会发生变化，符合要求。程序：（1）在进行消毒剂有效期确认时，每天开启装消毒剂的容器不少于 5 次，其每次开启时间在 12 分钟，以模拟实际操作的最差条件。（2）按照清洁剂、消毒剂管理规程和清洁剂、消毒

36、剂配制使用程序配制 75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液。（3）分别在消毒剂储存的第 3 天、第 4 天、第 5 天、第 6 天进行取样做消毒剂消毒效力的确认。分别按照上述 7 或 8 做 0.2%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液消毒效力的确认。（4）结果计算：计算试验组和对照组的活菌浓度 （CFU/ml） ，并换算为对数值（N） ，并按下式计算杀灭对数值：杀灭对数值 (KL)对照组平均活菌浓度的对数值（NO）试验组活菌浓度对数值（NX）可接受标准：在消毒液有效期末，杀灭对数值 (KL)应不低于 3 个对数单位。消毒剂储存有效期确认杀灭对数平均值 KL(天)序号方法消毒剂名称工作菌液3456可接受标准

37、金黄色葡萄球菌大肠埃希菌175%乙醇白色念珠菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌2定量悬浮试验0.2%新洁尔灭溶液白色念珠菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌375%乙醇白色念珠菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌4表面试验0.2%新洁尔灭溶液白色念珠菌阴性对照无菌生长；杀灭对数值 (KL)应不低于 3 个对数单位确认结果评价：操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日11 0.2%新洁尔灭溶液和新洁尔灭溶液和 75%乙醇溶液消毒效力周期的确认乙醇溶液消毒效力周期的确认11.1 0.2%新洁尔灭溶液和 75%乙醇溶液消毒效力周期的确认目的：确认消毒剂在实际应用中，其消毒效力能够保持的期限。消毒剂消毒效果及有

38、效期确认23程序：（1）在万级实验室的墙面和百级级层流下设备表面作为验证对象。实验室墙面编号为 1 号、百级层流下设备表面 2 号，分别使用 0.2%新洁尔灭溶液、75乙醇溶液进行擦拭消毒（1 号为 0.2新洁尔灭溶液消毒剂、2 号为 75乙醇溶液） 。（2）采用接触碟法在消毒过的实验室墙面和百级层流下设备表面取样。（3）取样完毕完毕后第 24、48、72 小时取样送 QC 做微生物限度。可接受标准：百级：1CFU/25cm2、万级：25CFU/25cm2。 0.1%新洁尔灭溶液和 75%乙醇溶液消毒效力周期确认（单位：cfu/25cm2）次序第一次平均菌落数区域消毒剂24h48h72h微生物限度室墙面0.2%新洁尔灭溶液百级设备表面75%乙醇溶液第二次平均菌落数区域消毒剂24