香樟油抗水霉菌效果研究

1、芳樟油抗水霉菌效果研究摘要：大多植物油都有对霉菌有一定的抑制作用，通过了解植物精油对霉菌抑制机理，研究水霉菌的生活史，及芳樟油的特有化学成分，探究对水霉菌的抑制效果，了解其化学机理作用。关键字：芳樟油、抑制机理、水霉菌、抑菌率近年来，人们就发现植物精油具有抑菌、杀菌、驱虫、杀虫等生物活性，且对很多种植物油进行研究，大多都有对霉菌和害虫有一定的抑制及杀死的作用，同时很多研究还是用不同配比的混合植物油抑制霉菌的研究。同时植物精油在医药 、农药、饲料添加剂、食品防腐保鲜等方面有广泛应用。因植物精油具有来源于天然、对人体相对安全、与环境友好、生物活性多样等特点，开发植物精油具有广阔的发展前景，越来越引

2、起人们的关注1.1983年Singhcz 研究日本薄荷精油在200ppm的浓度下对稻长蠕孢等15种真菌的抑制作用达100% ， 其抗真菌毒性比杀菌剂多菌灵、代森锌、克瘟散等更大2.王国亮等科学家利用肉桂、山苍油、丁子香研究霉菌也有一定抑制作用，不同浓度有不同的效果，随着浓度升高抑制效果显著3.本文研究芳樟油对水霉菌的抑制作用，通过不同的浓度，与水霉菌培养，研究其抑制效果。 水霉菌分布极广,多生活在淡水中。常见于池塘的死鱼及植物残体上,还有伤病的水产品表面。产生一层棉絮状物,即水霉菌的菌丝、游动孢子囊和有性繁殖器官。菌丝顶端柔软,游动孢子囊有内层出现象,游动孢子有典型的两游现象4,5 。特殊营养

3、条件下，影响有性生殖时性器官的形成, 在充足的营养能够无限地保持在营养生长阶段。而在营养贫乏环境下能够很快进入有性阶段。当培养基中缺乏矿物元素时可以限制藏卵器的形成。在生长后期环境变化时,菌丝顶端及中间可见球形、长圆形或不规则形的芽孢子6。有些种寄生于鱼类和高等植物,水霉病是鱼体表的一种水霉寄生病，鲤科和鲑科鱼类、河鲈、鳗鲡以及虾等对水霉都具有易感性。水霉对寄主无严格选择性，各种水产品，从卵到各龄成体都可感染。当鱼、虾体表皮肤因物理化学因素，或细菌、病毒感染受损伤时，水霉的游动孢子侵入伤口，吸取皮肤及其组织内的营养而迅速生长，菌丝与伤口的组织细胞缠绕粘附，使组织发炎、坏死，鱼体负担过重，游动失

4、常，食欲减退，很快瘦弱死亡。水霉在寄主死后不久繁殖特别快，所以具腐生性，对水产动物是一种继发性感染14,15。给渔业带来很大的危害,串囊水霉引起水稻烂秧, 造成很大的经济损失7。 植物精油的抗菌成分植物精油的化学成分可分为四大类 ：（1）萜烯类化合物是精油的主成分，如金合欢烯等；（2）芳香族化合物是精油中仅次于萜烯类的第二大类化合物，如百里草酚等；（3）脂肪族化合物是精油中分子量较小的化合物，如香茅等精油中的异戊醛等；（4）含氮含硫化合物，如具有辛辣刺激香味的大蒜索11。 近年来，经过科学家的不断研究，植物精油对霉菌是抑制作用机理已经有一定是基础，是植物精油特有的化学成分的作用，以下总结了几点

5、：1醛类的电子接受能力越强，其抗真菌的活性越高。2、 一不饱和脂肪醛比、饱和酮的活性强。3、一饱和醛比相应的醇的抗真菌活性低。4一元醇比二元醇、三元醇抗真菌活性高。5 酚、愈刨木酚、苯甲醛、苯甲酵等在苯环上引入烷基后，其抗真菌活性增高12。 同时Collins JE研究 表明，他认为精油成分中醛类物质在抑菌性与其化学结构的分子轨道能有关。单卤化乙酸酯、过氧化衍生物、一不饱合酮引入环氧后及硫氰酸酯衍生物的抗菌活性增强。还有科学家研究发现不饱合羰基结构，是食品防腐剂表现抗菌活性的高效功能结构，具有相距约025rrn的电子容纳(接受)中心，和电子供给中心组成的电子中心系统是食品防腐剂体现强抗菌活性的

6、反应活性中心的必备条件。精油有效成分的分子结构特征与生物膜脂成分的分子结构特征愈相似，则愈易进入菌体而发挥抑菌作用。 国内也有许多关于植物精油抗菌成分的研究。例如石香薷全草含挥发油主要抗菌成分为百里香酚、香荆芥酚和对聚伞花素等；肉桂醛、紫苏醛、环丙烷基脂及酸等植物精油成份能有效延长微生物的生长适应期，缩短对数生长期和稳定生长期。可有效降低微生物的生长势和养活微生物的生长量耋蓝宁正祥高建华几种植物精油成分的抗菌效果研究。那么芳樟油抗菌作用机理与上述机理应该有一定的联系，通过化学成分的生化作用，影响水霉菌的生长植物精油的抗菌作用机理 国内外对植物精油抗菌作用机理的研究有一定进展。KKnob lcn

7、lah等研究了4O种萜类(大多数为植物精油的有效成分对菌类初生能量代谢，NADH及丁二酸脱氢酶（SDH)的活性，呼吸过程中的电子传递及氧化磷酸化过程的影响作用。发现5×10 amol·L 浓度下，所有供试萜类都能抑制上述反应，这表明精油可影响菌类的呼吸作用及细胞膜功能。MxM-tin Bard等研究表明，精油成分香叶醇可以提高K 的细胞外渗透，并增加真菌的细胞膜的流动性。此外，香叶醇还可以降低细胞膜脂质层的相变温度、影响膜脂的流动性。有些精油如柠檬醛可通过其不饱和键与某些酶结合，进而导致微生物的代谢系统紊乱11。Cox等 对一种茶树中提取的精油研究表明，此茶树油导致微生物最

8、终死亡的机理是：破坏了细胞膜的通透屏障，并伴随化学渗透控制作用的丧失。表现在，阻碍革兰氏染色阴性及阳性细菌的细胞呼吸并增加了细菌细胞质的透性；通过一种磺化物破坏酵母的细胞质膜；导致大肠杆菌的K 大量渗漏12. 1.1 试验材料芳樟油 芳樟油樟油具有高度的抗氧化性，适度的溶解性，很好的表面活性，高效发泡性和去污性，可用于制造表面活性剂，还可以代替进口椰子油、棕榈仁油等制造月桂醇硫酸钠、月桂醇聚氧乙烯醚、樟核油醇酰胺等表面活性剂以及高级洗衣皂、香皂 ；天然冰片除是是名贵中药外，由于具有香气兼消炎灭菌功能，还是高级香料和重要的化工原料，已得到广泛应用 ，如在皂用香精和薰香香精中用以增加清爽嗅感，与薄

9、荷油同用于牙粉、痱子粉、气雾喷雾剂等，还可用于传统制墨、宗教仪式及生产糖果、软饮料等的食用香精；樟树中的桉叶素是制取桉叶油素的原料，也是一种重要的有机溶剂，可作矿石浮选剂 ；樟脑可用作杀虫防蛀剂，是制造赛璐珞的增韧剂，还可用于香料、胶片、塑料、橡胶、爆炸稳定剂等；樟树籽油富含中碳链脂肪酸，是合成中碳链甘油三酯的理想原料，而中碳链甘油三酯与普通植物油脂相比，热量低、能量高，对预防高脂血症、降低胆固醇、治疗肠道疾病有很好的效果旧，因此可用于制作减肥、运动食品和婴幼儿食品；中碳链甘油三酯还有很好的乳化稳定作用，可用作美容化妆品的乳化剂、均质剂、防冻剂，食品乳化剂、稳定剂、润湿剂8,9,10.主要器材

10、：1.1 材料1.1.1 菌种来源 多子水霉Saprolegnia ferax 水生生物学实验室提供（颈枯 纹枯 稻瘟）1.1.2 药品孔雀石绿：龙游第八化工厂戊二醛：国药集团化学试剂有限公司芳樟油乙醇丙二醇丙三醇庆大二甲基亚砜：汕头市西陇化工有限公司麦芽糖：上海强顺化学试剂有限公司 批号：20090808琼脂：泉州市泉港化工厂 批号：2009003蛋白胨：广东环凯微生物科技有限公司 批号：2009112531.1.3 仪器设备单人无菌操作台SW-CJ-1G型、MJX-150型霉菌培养箱、二十四孔板若干、d=9cm、d=15cm的培养皿若干、移液枪、离心管若干、相机、拍照显微镜、高压灭菌锅等。

11、试验方法1.2.1 扩菌 1、 沙氏固体培养基配制：在电子天平上分别称取蛋白胨10g、麦芽糖40g、琼脂18g，倒入1000ml的三角锥形瓶中，用200ml左右的自来水加热溶解，用自来水定容至1000mL,装入三角瓶中，最后塞上棉花塞。配制PDA: 称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装三角瓶。2、 灭菌：将包扎好的培养皿、蒸馏水、沙氏固体培养基，PDA固体，统一进行高压蒸汽灭菌（121摄氏度、15min）3、 倒平板：超净工作台紫外灭菌（照射20min、吹风20min防止部分臭氧未被

12、全部吹出，影响接入的霉菌的生长，因为臭氧对真菌有抑制作用）；将沙氏固体培养基（PDA），倒入培养皿中，使其均匀铺开，培养皿厚度约为3mm，然后放在旁边凉。 4、接种：用直径为8mm的打孔器在水霉的培养皿上打孔，打出厚度均匀、的直径为8mm、霉菌长势良好的菌饼，接在新的、一个培养皿中，接3个菌饼。5、水霉菌和绵霉在19±0.5、相对湿度78%的真菌培养箱倒置培养。稻瘟、纹枯、颈枯在28±0.5. 相对湿度78%的真菌培养箱倒置培养。实验一 方法：1、配沙氏液体培养基：在电子天平上分别称取蛋白胨10g、麦芽糖40g、倒入1000ml的三角锥形瓶中，用200ml的自来水加热溶解，

13、最后定容1000ml，倒入三角瓶，最后塞上棉花塞。2、 灭菌：将包扎好的枪头（1000ul、100ul、10ul）、蒸馏水、沙氏固体培养基，统一进行高压蒸汽灭菌（120摄氏度、25min）3、 配制植物精油：一般配药先配母液，在加不同的量一达到不同的浓度，首先，分别先取9ml的乙醇，二甲亚枫，丙二醇三种溶剂于50ml的离心管中，再加分别加1ml的芳樟油，轻轻振荡。因丙三醇的粘度大，所以取1 ml的溶剂，再取8ml的蒸馏水配制。同时还要贴上标签，写明日期，精油名称及配比。3、设计药物梯度浓度：药+二甲亚枫：0.1ul/L、1 ul/L、10ul/L、100 ul/L、1000 ul/L、1000

14、0 ul/L药+丙二醇：0.1ul/L、1 ul/L、10ul/L、100 ul/L、1000 ul/L、10000 ul/L药+丙三醇：0.1ul/L、1 ul/L、10ul/L、100 ul/L、1000 ul/L、10000 ul/L药+乙醇：0.1ul/L、1 ul/L、10ul/L、100 ul/L、1000 ul/L、10000 ul/L以上母液浓度为：药：溶剂=1:9（丙三醇：药：蒸馏水=1:1:8）4、接种24孔板：（1）、实验反应体系总体积：2ml/孔。（2）、沙氏液体培养基+0.2%体积的庆大霉素（即200ml液体培养基+400ul庆大霉素）.（3）、将移液枪、酒精灯、试管

15、、24孔板等仪器放入超净工作台中，开启紫外灯消毒灭菌(照射20min、吹风20min)。（4）、待紫外灭菌结束后，用酒精灯将手擦拭干净，打开24孔板，用移液枪按照如下顺序依次加入药品：2ml/孔=1800ml的沙氏液体培养基+200ml的药物123456A:含药培养基0.1ul/L1 ul/L10ul/L100 ul/L1000 ul/L10000 ul/LB:含药培养基0.1ul/L1 ul/L10ul/L100 ul/L1000 ul/L10000 ul/LC:含药培养基0.1ul/L1 ul/L10ul/L100 ul/L1000 ul/L10000 ul/LD：对照组CK:纯培养基CK

16、:纯培养基CK:纯培养基无菌水无菌水无菌水（一列前三个为平行实验，D1、D2、D3及D4、D5、D6为一组平行实验）（5）、接入菌饼：用2mm的打孔器在长势均匀的培养基上打出一系列的菌饼，然后接入24孔板中，并盖上盖子。重复上述步骤，分别再做同样一组。（菌种是同丝水霉菌、纹枯、颈枯、稻瘟）（6）、贴好标签，写上日期，药和溶剂，菌种，将24孔板放入真菌培养箱中静置培养。1.2.4 观察记录每24h观察一次菌落生长状况，用直尺测量菌落直径；并记录和计算抑制率。用解剖镜、相机拍照，记录菌丝的生长情况；抑制率（对照菌落生长值处理菌落生长值）对照菌落生长值100%；预实验结果：扒扒 浓度0123456C

17、K芳樟油+二甲亚砜0.45 1.10 1.60 1.10 0.91 0.20 0.20 1.60 0.42 0.81 1.60 1.08 0.91 0.20 0.20 1.60 0.35 1.50 1.21 0.81 0.20 0.20 1.60 平均值0.41 0.96 1.57 1.13 0.88 0.20 0.20 1.60 抑制率0.85 0.46 0.02 0.34 0.52 1.00 1.00 (0.00)扒 浓度0123456CK芳樟油+丙三醇0.50 0.65 0.79 0.49 0.70 0.20 0.20 1.60 0.20 0.72 0.70 0.65 0.45 0.20

18、 0.20 1.60 0.20 1.10 0.96 0.96 0.50 0.20 0.20 1.40 平均值0.30 0.82 0.82 0.70 0.55 0.20 0.20 1.53 抑制率0.92 0.48 0.49 0.58 0.71 1.00 1.00 0.00扒 浓度0123456CK芳樟油+丙二醇0.20 1.20 1.10 0.40 0.40 0.20 0.20 1.58 0.20 1.50 1.30 0.50 0.40 0.20 0.20 1.60 0.20 1.40 1.35 0.55 0.45 0.20 0.20 1.60 平均值0.20 1.37 1.25 0.48 0

19、.42 0.20 0.20 1.59 抑制率1.00 0.17 0.25 0.80 0.85 1.00 1.00 0.00 扒 浓度0123456CK芳樟油+乙醇0.20 1.35 1.20 1.10 1.20 0.20 0.20 1.50 0.20 1.40 1.30 1.20 1.00 0.20 0.20 1.60 0.20 1.50 1.10 1.00 0.70 0.20 0.20 1.40 平均值0.20 1.42 1.20 1.10 0.97 0.20 0.20 1.50 抑制率1.00 0.06 0.23 0.31 0.41 1.00 1.00 0.00 由图可知各溶剂加药的MIC

20、。丙二醇、 二甲亚枫、 乙醇、 丙三醇对照实验方法同上浓度设置：溶剂：1000ul/L、2000 ul/L 、4000ul/L 、6000ul/L 、8000ul/L 、10000ul/L（母液浓度：1/10）孔雀石绿：0.5mg/L、1 mg/L、2 mg/L、4mg/L、8 mg/L、16 mg/L（母液浓度：5g/L）戊二醛：10ul/L、20 ul/L、40ul/L、80 ul/L、160ul/L、320 ul/L（）123456A:含药培养基1000ul/L（0.5mg/L）（10 ul/L）2000ul/L（1mg/L）（20 ul/L）4000ul/L（2mg/L）（40 ul/

21、L）6000ul/L（4mg/）（80 ul/L）8000ul/L（8mg/L）（160ul/L）10000ul/L（16mg/）（320ul/）B:含药培养基1000ul/L（0.5mg/L）（10 ul/L）2000ul/L（1mg/L）（20 ul/L）4000ul/L（2mg/L）（40 ul/L）6000ul/L（4mg/）（80 ul/L）8000ul/L（8mg/L）（160ul/L）10000ul/L（16mg/）（320ul/）C:含药培养基1000ul/L（0.5mg/L）（10 ul/L）2000ul/L（1mg/L）（20 ul/L）4000ul/L（2mg/L）（40

22、 ul/L）6000ul/L（4mg/）（80 ul/L）8000ul/L（8mg/L）（160ul/L）10000ul/L（16mg/）（320ul/）D：CK:纯培养基CK:纯培养基CK:纯培养基无菌水无菌水无菌水（备注：第一行浓度为溶剂，第二行为孔雀石绿，第三行为戊二醛）（5）、接的菌种有同丝水霉菌和绵霉、纹枯，重复上述步骤，分别再做一组溶剂、孔雀绿、戊二醛板用于48h观察（6）、贴好标签，将24孔板放入真菌培养箱中静置培养。1.2.4 观察记录每24h观察一次菌落生长状况，用直尺测量菌落直径；并记录和计算抑制率。用解剖镜、相机拍照，记录菌丝的生长情况；抑制率（对照菌落生长值处理菌落生长

23、值）对照菌落生长值100%；对照实验结果：菌种是扒，溶剂分别是丙二醇、二甲亚枫、乙醇、丙三醇。（横坐标为浓度，纵坐标为直径）扒0 1 2 3 4 5 6 CK丙二醇0.20 1.10 1.08 0.89 0.55 0.65 0.79 0.90 0.20 1.15 0.89 0.81 0.65 0.69 0.60 0.90 0.20 0.70 1.02 0.70 0.79 0.75 0.90 1.14 平均值0.20 0.98 1.00 0.80 0.66 0.70 0.76 0.98 抑制率1.00 0.00 -0.02 0.23 0.41 0.36 0.28 0.00 扒0123456CK二

24、甲亚枫0.20.550.710.710.890.50.91.010.20.810.710.80.90.490.90.730.20.70.790.610.820.450.611.02平均值0.20.690.740.710.870.480.80.92抑制率10.320.250.30.070.610.160扒0123456CK乙醇0.21.020.910.90.850.650.4510.21.150.920.770.90.520.490.920.21.191.121.010.890.790.421.15平均值0.21.120.980.890.880.650.451.02抑制率1-0.120.040.

25、150.170.450.690扒0 1 2 3 4 5 6 CK丙三醇0.20 0.89 0.82 0.69 0.45 0.50 0.45 0.85 0.20 0.78 0.91 0.56 0.46 0.41 0.40 0.80 0.20 0.72 0.69 0.65 0.49 0.49 0.42 0.51 平均值0.20 0.80 0.81 0.63 0.47 0.47 0.42 0.72 抑制率1.00 -0.15 -0.17 0.17 0.49 0.49 0.57 0.00 （由上往下依次是：乙醇、丙二醇、丙三醇、二甲亚枫）对图进行分析：由图分析可知，乙醇和丙三醇的菌直径曲线比较平滑。说

26、明相对误差比较小，乙醇和丙三醇对菌的生长影响比较小，不同浓度下，扒的生长比较明显，生长趋势有一定的抑制。再加上取的菌饼有一定的差异，通过取平均值及制出的曲线，我们选择乙醇和丙三醇作为药的溶剂比较合适，可以减少溶剂对菌生长的影响。菌种是纹枯纹枯0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 CK丙二醇0.20 1.10 1.08 0.89 0.55 0.65 0.79 0.90 0.20 1.15 0.89 0.81 0.65 0.69 0.60 0.90 0.20 0.70 1.02 0.70 0.79 0.75 0.90 1.14 平均值0.20 0.98 1.00 0

27、.80 0.66 0.70 0.76 0.98 抑制率1.00 0.00 -0.02 0.23 0.41 0.36 0.28 0.00 纹枯0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 CK二甲亚枫0.20 0.55 0.71 0.71 0.89 0.50 0.90 1.01 0.20 0.81 0.71 0.80 0.90 0.49 0.90 0.73 0.20 0.70 0.79 0.61 0.82 0.45 0.61 1.02 平均值0.20 0.69 0.74 0.71 0.87 0.48 0.80 0.92 抑制率1.00 0.32 0.25 0.30 0.0

28、7 0.61 0.16 0.00 纹枯0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 CK乙醇0.20 1.02 0.91 0.90 0.85 0.65 0.45 1.00 0.20 1.15 0.92 0.77 0.90 0.52 0.49 0.92 0.20 1.19 1.12 1.01 0.89 0.79 0.42 1.15 平均值0.20 1.12 0.98 0.89 0.88 0.65 0.45 1.02 抑制率1.00 -0.12 0.04 0.15 0.17 0.45 0.69 0.00 纹枯0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.0

29、0 CK丙三醇0.20 0.89 0.82 0.69 0.45 0.50 0.45 0.85 0.20 0.78 0.91 0.56 0.46 0.41 0.40 0.80 0.20 0.72 0.69 0.65 0.49 0.49 0.42 0.51 平均值0.20 0.80 0.81 0.63 0.47 0.47 0.42 0.72 抑制率1.00 -0.15 -0.17 0.17 0.49 0.49 0.57 0.00 （乙醇、丙三醇和丙二醇、二甲亚枫）分析：阳性对照孔雀石绿和戊二醛两种药作为抑制药物，对扒进行实验。菌落直径（mm）孔雀石绿 24h 48hABC平均值抑制率ABC平均值抑

30、制率00.20 0.20 0.20 0.20 1.00 0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 0.5mg/L0.70 0.70 0.60 0.67 0.58 0.41 0.31 0.45 0.39 0.83 1mg/L0.20 0.50 0.20 0.30 0.91 0.32 0.24 0.27 0.28 0.93 2mg/L0.40 0.20 0.40 0.33 0.88 0.23 0.26 0.22 0.24 0.97 4mg/L0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 8mg/L0.20 0.20 0.20 0.20

31、1.00 0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 16mg/L0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 CK1.30 1.30 1.30 1.30 0.00 1.32 1.35 1.31 1.30 1.18 戊二醛 24h 48hABC平均值抑制率ABC平均值抑制率00.70 0.20 0.20 0.37 0.86 0.30 0.45 0.36 0.37 0.79 10ul/L1.20 1.30 1.40 1.30 0.06 1.38 1.02 0.98 1.13 -0.14 20ul/L1.00 1.50 0.80 1.10

32、 0.23 0.96 0.98 0.56 0.83 0.22 40ul/L1.40 1.60 0.70 1.23 0.12 0.82 0.81 0.89 0.84 0.21 80ul/L1.00 1.50 1.40 1.30 0.06 0.78 0.82 0.82 0.81 0.25 160ul/L0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 0.72 0.58 0.48 0.59 0.51 320ul/L0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 0.20 0.20 0.20 0.20 1.00 CK1.20 1.50 1.40 1.37 0.00 1.15 1.15 0.73 1

33、.01 0.00 从表可以看出：孔雀石绿、戊二醛、在24h和48h时的MIC，如下所示： 24h时： 48h时：孔雀石绿的MIC：4 mg/L 孔雀石绿的MIC：4mg/L戊二醛的MIC：160ul/L 戊二醛的MIC：320ul/L 由表可知，孔雀石绿 无论是在24h还是48h， MIC都是4 mg/L,戊二醛MIC在24h和48h时发生变化，由160ul/L 变成320ul/L，孔雀石绿抑制能力没有随着时间的增长而减弱，而戊二醛抑制能力却发生变化，表明，戊二醛抑制能力下降可能于菌消耗物质有关，或菌适应了某一较小的浓度，只有在更大浓度才会抑制菌的生长。并且多子水霉菌丝在纯无菌水中的长势也有一

34、定的差异。可能与打菌饼时接种的菌有一定的差异。结合以上表，以24孔板为载体，2ml为体系，将药物以不同浓度加到液体沙氏培养基，来培养多子水霉菌丝，以此测定不同浓度的药物对多子水霉菌丝生长的影响，及找出药物对菌抑制的MIC,此实验方法的科学性与可靠性。1.2.3 正式试验从预实验的结果中，可知，在不同药物浓度的培养基中，菌饼生长情况均不相同，同时随药物浓度增加，其菌落是直径也越来越小，到某一浓度时达到完全抑制，所以药物对多子似水霉生长的影响的方法是可行的。再从对照实验结果分析时，溶剂丙三醇和丙二醇对菌生长影响较小，从而先这两种溶剂加药培养，参考以上实验结果，两种溶剂与药物均以2ul/L 和 20

35、ul/ L为顶端，进行抑菌实验。菌种是纹枯和扒。溶剂是丙三醇和丙二醇方法同一，但是配药比例改变，药：溶剂=0.1ml：9.9ml。（丙三醇：药：蒸馏水=1:0.1:8.9） 1、方法同1.2.2.12、设计浓度：0.1ml/L、 0.2ml/L、0.4 ml/L、0.6 ml/L 0.8ml/L 、1ml/L 3、接种24孔板：（1）、沙氏液体培养基+0.2%体积的庆大霉素的比例混合均匀。（2）、打开24孔板，用移液枪按照如下顺序依次加入：123456A药+基药+基药+基药+基药+基药+基B药+基药+基药+基药+基药+基药+基C药+基药+基药+基药+基药+基药+基D培养基培养基培养基无菌水无菌水无菌水加药方法：123456浓度0.1ml/L0.2ml/L0.4 ml/L0.6 m