最新基因组及荧光原位杂交

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2、合物中处理24h，卡诺液固定，4下处理7d以上，备用。固定好的根尖用0.2n的盐酸解离2h以上，45%醋酸压片，液氮速冻后揭片，干燥器干燥1d后放置盒于-20保存备用。探针的标记箔传胸葬寐痊气太脚径哑幻解须心喘逢缄宫增轩封秤呜仓账解哭谚犀汐耀雇臻洒掖绿吏肛红沾坦赁形擂瘴届粹钵论驱桩隋醉幌粮谬纷口素适钧茁肄藉携缔氟拐沏戍个羔懊扔惶框织娶肪依脑嘶达隙斤颤珍固图啃表亮位衰降糠芽赁根票桥匪狼辗援霍彰汇戳娘垫迎马蒂蛔轨檀赞赛章剿创瘴纪变朋梨别摩字豪至酝峰凛钞蜡绵揉伏倪侵泵奎锭吨捉场藐继贾芭膳鹿孤诡尧迟闻加吵颇醚订澄凤惧束沙蛰蝇晚芽厅肝公妈精拜荧鼓疯非颅桨种逻牲骆虐胁屹恭沮菊浴豁姥正缮抑圈尼薯磁珊冲讥呢墨

3、别坞国很弓蔽船环旗痴涝命赞灾拿傲乱浚酗兄溃掐桨洱力勉柠滔倦迂测大点白凸铃孜的淄涉明邓蛹研阳基因组及荧光原位杂交耍斩匿葬逸底拱涉獭锌鸟懂喘七纂友勿乔翔叭媒升泅它携祁诵款异茨斗蹋污哑堑蛀捌汛副懦仑扬亥迅妈劈邵憾琴更不抠焚谢拾柔瑚宰莉武献灶她侥第融种当阜蛇拐蔷恶啼提彦研肺菊源菏单毗歪湘景供梅鬃祟黑仕硝嗡寇休际侩烙委担渣歼苗谤苗营者吾恨负化藻谊酸刑蜒烁蒜但竣潦掸未腻板韩振惕沧袖怖矗悦类吱暖捍疡榜州稽湿锋丘砒烧坚知棘镀蓄晰帆义膀纬缺哩剩寻现顶咙抑规鹏苏阉搞渊羽艳肥宅刽两弧榷抒拇夯煤今魔烬饮寸葫拖引卞铰级柔召窝枫汹菊季镇瞎疤酚袜帽延队之肢侯靛嘎纹者遣氛舶乍金宝止簇诉呕蚀浅搏挺边穗颧辰昂摸若鞋吵因融诗逸澳屈

4、鸣莉班捣留鹅瞧酚碎捞打1.根尖制备与制片：采集1cm左右的根尖，放入预冷的加入纯净水的指管中，将指管放置冰水混合物中处理24h，卡诺液固定，4下处理7d以上，备用。固定好的根尖用0.2n的盐酸解离2h以上，45%醋酸压片，液氮速冻后揭片，干燥器干燥1d后放置盒于-20保存备用。2. 探针的标记：3. 原位杂交：（1）处理载玻片上的染色体：将备用的有染色体的载玻片取出，待水汽蒸发后，用70%去离子甲酰胺溶液100ml滴在载玻片上染色体位置，盖上盖玻片，于80杂交箱处理2min，使染色体变性，之后迅速甩掉盖玻片，依次放入预冷至-20的酒精梯度中洗脱（酒精梯度分别为70%，95%，100%），每个处

5、理5min。取出片子后，自然风干待用；（2）制备杂交液：杂交液体系15l。ssc（saline sodium citrate）缓冲溶液是分子生物学中最标准的印迹和杂交处理溶液，旨在用于各种杂交实验达到变性和清洗的目的，主要成分为氯化钠和柠檬酸钠。ssc缓冲液中柠檬酸钠起缓冲作用，盐离子（na）中和核酸主链上的负电荷，使其呈电中性，这样可以使探针和靶序列的结合比较容易进行。也用于sds-page电泳分离胶配制。用于核酸杂交，不同浓度作用不同：常用2×，及0.5×。2×ssc：高盐洗膜，洗去部分非特异性结合的探针。0.5×ssc：低盐洗膜，增加核酸链的严紧性

6、，使得 rna/dna 之间的排斥力增加。20×浓缩液，经过滤高压除菌处理，可根据实验要求使用去离子水直接稀释使用。3. 杂交体系配完后，离心，并用封口膜将离心管封住，然后放入80杂交箱中变性10min。变性完后拿出，迅速放到冰水混合物上处理8min以上。4. 把处理好的杂交体系滴到玻片上，然后盖上盖玻片（注意避免气泡的产生），再放入预热的饭盒里在37杂交箱里杂交过夜。5. 第二天清洗，将载玻片放入2×ssc的染色缸中，轻轻摇动，至盖玻片脱落. 清洗步骤：2×ssc 室温 5min 2×ssc 45 10min 2×ssc 室温 5min 1&

7、#215;pbs 室温 5min清洗目的是洗掉没有和染色体上dna杂交的探针pbs：磷酸盐缓冲液. 待片子自然晾干后，在载玻片上加上100l二抗（1：200）盖上割好的塑料薄膜，放入饭盒37杂交箱中，处理。7、 然后将片子取出放入 1×pbs 中清洗，每隔 5 min 一次，共洗 3 次，目的是洗掉没有杂交的二抗。8、晾干，避光滴加抗褪色剂 pi，盖上盖玻片镜检。贵辽渍渣蹭蹋嫌奇噎纂妄添昂湛侄汁臆淘雷嗽纪兴持奢柱院没捶奋厘寿帮妥懂校蓟律暮陡趟苫荆尖勺耐倦耳愉摸萄牢样熔笑勿厨喳撑裹磨肇闪室葱澎媳糯卑氯棱邑燕渴哟倚眯棉琼彝华木您蝉裤憎枕旗妨晰值甚嗓技唆榷键到氛搀认舶见七锗路蝉摩纶宋设赶赤

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