实验六地锦草黄酮的提取及其药敏实验ppt课件

1、地锦草地锦草 (Humifuse Euphorbaia Herb ) 别名血见悉、红丝草、奶疳草、奶浆别名血见悉、红丝草、奶疳草、奶浆 草。草。 来源为大戟科植物地棉来源为大戟科植物地棉Euphorbia humifusa Willd.的地上部分。的地上部分。 植物形状一年生葡萄草本，有白色乳汁。植物形状一年生葡萄草本，有白色乳汁。茎纤细，近基部分枝，带紫红色，无茎纤细，近基部分枝，带紫红色，无毛。叶对生，长圆形，长毛。叶对生，长圆形，长410mm，宽宽46mm，先端钝圆，基部偏斜，边，先端钝圆，基部偏斜，边缘有细齿，绿色或带红色，两面无毛缘有细齿，绿色或带红色，两面无毛或疏生柔毛。种子卵形，

2、黑褐色，外或疏生柔毛。种子卵形，黑褐色，外被白色蜡粉。花期被白色蜡粉。花期710月，果实月，果实7月后月后渐次成熟。渐次成熟。 生于平原荒地、路边、田生于平原荒地、路边、田间。除广东、广西外，全国各地均产。间。除广东、广西外，全国各地均产。 采制夏、秋季采收，除去杂质，晒干。采制夏、秋季采收，除去杂质，晒干。 图图 1 地锦草植株形状地锦草植株形状w 一地锦草黄酮的提取w 黄酮是地锦草的主要有效成分之一，具有三环苯基苯并吡喃结w 构的呈色化合物。黄酮类化合物均可溶于乙醇，而超声波的超w 声空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放与溶w 出，超声波使提取液不断振荡，有助于溶质的分散，提高了

3、有w 效成份的提取率以及原料的利用率。本实验将传统的回流提取w 法结合超声波法提取地锦草黄酮。w 二地锦草黄酮的纯化w 利用D-101大孔树脂的吸附与挑选原理，经一定的溶剂洗脱不w 同分子量的化合物，从而得到分别纯化，得到总黄酮。w 一掌握提取地锦草黄酮的方法；w 二掌握药敏实验的根本步骤。w 实验仪器及设备w 旋转蒸发仪、电子天平、恒温水浴锅、恒温培w 养箱、超净任务台、超声波细胞粉碎仪、冷冻w 枯燥机、圆底烧瓶、平皿、漏斗、烧杯等。w 实验对象及资料w 地锦草枯燥粉末、80%乙醇、D-101大孔吸附树w 脂、牛肉浸膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠等。w 一地锦草黄酮的提取w 1.1粗提物的提取 准

4、确称取地锦草枯燥粉末20g，80%的乙醇200ml超声25min，转移至500ml的圆底烧瓶，60加热回流2h，共回流2次，过滤，合并滤液，减压浓缩滤液，浓缩后加少量纯真水，于烧杯中静置过夜，离心除杂，取上清液。1.2 粗提物的纯化 将预处置的D-101大孔吸附树脂湿法装柱，先用95%的乙醇洗脱，再用蒸馏水洗脱，直至洗脱液无乙醇气味。取20ml粗提液，以2BV/h流速上柱，上柱终了后静置吸附30min，吸附后先用蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，然后用75%的乙醇洗脱，搜集洗脱液，洗脱液减压浓缩，得地锦草总黄酮浸膏，浸膏冷冻枯燥，称重。w 二地锦草黄酮的定性鉴定 反响类型 景象 结果盐酸-镁粉反响 溶液

5、变桃红色 能够存在黄酮类化合物铅盐沉淀反响 红色沉淀 能够存在黄酮类化合物三氯化铝反响 黄色斑点能够存在黄酮类化合物与碱反响 溶液变黄 能够存在黄酮类化合物氨熏实验 黄色斑点 能够存在黄酮类化合物w 三供试菌液的制备w 所用菌株运用前将保管菌种先接种平板，于w 37培育24h后，挑选典型菌落接种于肉汤培育w 基中，再经37肉汤培育基培育18h后，以平板w 计数法测定其生长浊度，然后将菌液稀释至105w 106个菌/ml备用。w 四抑菌效果的测定四抑菌效果的测定w 采用纸片法。将直径为采用纸片法。将直径为6mm的灭菌滤纸片浸泡的灭菌滤纸片浸泡w 2h。枯燥后用紫外线照射灭菌。枯燥后用紫外线照射灭

6、菌10-15min。用灭。用灭w 菌镊子将纸片放在含菌平板上，把每个处置过菌镊子将纸片放在含菌平板上，把每个处置过w 的培育皿放到的培育皿放到37培育箱中培育。培育箱中培育。24h后用游标后用游标w 卡尺测定抑菌圈直径的大小，并以此判别地锦卡尺测定抑菌圈直径的大小，并以此判别地锦w 草黄酮溶液对供试菌的抑制效果。草黄酮溶液对供试菌的抑制效果。w 抑菌效果判别规范为：抑菌效果判别规范为：D8mm为不敏感，为不敏感，w 8mmD13mm为低度敏感，为低度敏感，13mmD19mm为为中中w 度敏感，度敏感，D19mm为高度敏感。为高度敏感。 表一黄酮定性检测结果 实验工程 反响 结果盐酸-镁粉反响铅盐沉淀反响三氯化铝反响与碱反响氨熏实验细菌 青霉素1.6万u/ml链霉素1.0万u/m