医学研究生开题报告

1、莅莅研究生研究生: 导导 师师: 教授教授1. 1.选题的目的选题的目的2. 2.选题的理论和实际意义选题的理论和实际意义7. 7.目前进展情况目前进展情况3. 3.主要研究内容主要研究内容5. 5.主要研究方法主要研究方法4. 4.主要技术路线主要技术路线6. 6.预期结果预期结果选题目的选题目的HCC是多血管实体瘤，本实验拟通过动物实验观察参雄抗癌丸对小鼠H22移植性实体肿瘤的抑瘤效果及该药物对荷瘤H22小鼠肿瘤血管形成情况和肝癌瘤组织中VEGF及MVD表达的影响，为临床应用该药治疗肝癌提供客观而科学的理论依据。选题的理论和意义选题的理论和意义原发性肝癌简称肝癌，我国每年约有23万人死于该

2、病，占全球肝癌死亡人数的53。被列为我国重点研究的癌症之一。目前中医药治疗中晚期肝癌发挥的作用越来越大，可以明显改善患者的生活质量和延长其生存期。原发性肝癌是典型的血供丰富的实体肿瘤，生长速度快，易转移，与其强大的血管生成能力有关。血管生成是肿瘤生长及转移必不可少的条件，1971年Folkman提出肿瘤生长及转移是血管依赖性的理论，阻断血管的生成可以作为抑制肿瘤生长的一种治疗策略。迄今多数学者充分肯定了MVD与肿瘤的生长转移预后的密切关系，认为它是一个反映恶性肿瘤生物学行为的重要参数。 肿瘤在其生长过程中可分泌大量的促血管生成因子。VEGF是一种分子量为34-50 KD的二聚体蛋白,由正常或肿

3、瘤细胞产生,是一个重要的促血管生成因子，甚至被认为是最强的血管形成因子，VEGF表达水平反映了肿瘤血管内皮细胞增殖迁移和血管构建的水平,直接反映肿瘤生长的速度和转移的倾向。在人类许多肿瘤中检测到VEGF的高表达，在肿瘤进展中血管生成可能是原癌基因激活和抑癌基因失活的结果。国内外研究表明，运用抗血管生成因子如内皮抑素等可有效地抑制内皮细胞增殖，降低肿瘤组织MVD，从而达到抑制肿瘤细胞的生长、侵袭和转移的目的。MVD的检测可用于肿瘤患者的预后估计,MVD值是反映肿瘤血供的客观指标。因此在治疗原发性肝癌中联合检测VEGF表达情况和MVD值,对于判断肿瘤的转移潜能,及时干预治疗,减少转移,对于提高治愈

4、率具有重要价值。 主要研究内容主要研究内容（2 2）通过对移植模型中治疗组与模型对照组肿瘤体积变化、肿瘤重量变化及正常组与模型对照组、各治疗组之间胸腺指数与脾指数的变化，研究参雄抗癌丸的作用机制。 （3 3）本实验采用肿瘤组织HE常规染色，从形态学上观察各组间肿瘤细胞密度，肿瘤坏死程度（1 1）动物移植性肿瘤模型的成功制备（4 4）用流式细胞仪检测各组的肿瘤细胞凋亡率；用免疫组化技术观察该药物对肿瘤组织VEGF及MVD表达的实验影响（5 5） 本项研究采用腹腔种植H22瘤株制造肝癌模型，通过动物实验研究参雄抗癌丸对荷瘤鼠VEGF及MVD表达的实验影响，从分子水平探讨参雄抗癌丸对肿瘤的影响机制。

5、从而为该药提供技术支持，并为其产品开发和走向市场提供理论依据。主要技术路线主要技术路线选购SPF级小鼠动物造模及分组参雄抗癌丸高剂量组参雄抗癌丸中剂量组参雄抗癌丸低剂量组5-FU组模型对照组正常组给药、标本采集和处理检测：1 肉眼观察2 抑瘤率的测定3 HE常规染色4 细胞凋亡率及细胞周期的测定5 免疫组化检测VEGF和MVD 统计数据，得出实验结果，撰写论文主要研究方法主要研究方法1.1.实验材料实验材料1)1)瘤株 H22北京药物研究所引进，甘肃医学科学院传代保种。2 2）实验药品参雄抗癌丸由甘肃省医学科学研究院制成水蜜丸剂，每包2克；5-FU注射液3 3）实验动物 SPF级昆明小鼠，雌雄

6、各半，体重1820g, 56w龄，由甘肃省中医学院动物实验中心提供2.实验方法：实验方法：（1）造模：从H22瘤株传代小鼠的腹腔抽取乳白色的瘤液，用生理盐水稀释至瘤细胞计数为2106个/ml，胎盘蓝染色证实活细胞数达到96%，将瘤细胞悬液注射到小鼠右前肢腋窝部皮下0.2ml只，接种的瘤细胞数约为5106个只。均在无菌条件下进行（2）动物分组及给药方法:接种次日，将除正常组外的80只小鼠随机分为5组: A组为模型对照组，每日用蒸馏水灌胃；B组为阳性对照组，每天5-FU 10/kg腹腔注射；C组为药物高剂量组1560/kg灌胃。D组为药物中剂量组780/kg 灌胃。E组为药物低剂量组390/kg灌

7、胃。每天一次，连续灌胃10天。(4)标本采集及处理：实验结束后第二天，将禁食12小时的所有实验动物脱颈处死取脾脏、胸腺和瘤组织。v3.观察指标观察指标（2）计算相关免疫器官指数及抑瘤率分别按以下公式计算脾指数、胸腺指数和抑瘤率（单位：单位：mg/l0gmg/l0g）胸腺指数=胸腺重量（mgmg）/体重(g g)脾指数=脾脏重量（mg）/体重(g)（3）抑瘤率完整剥离肿瘤, 用1/1000电子天平称取瘤重。抑瘤率( %) = (1 - T/C)100 % ,( T/ C: 治疗组平均瘤重/ 对照组平均瘤重) 。（4）病理形态学观察瘤组织块以4甲醛固定，石蜡包埋，切片，经HE染色，光学显微镜下观察

8、瘤组织病理变化（1）造模后，观察各组小鼠局部瘤组织情况，小鼠活动、进食、精神状态等情况。（ （5）细胞凋亡率的测定 根据试剂盒上的说明书具体步骤进行（6）标本切取:停药次日小鼠颈椎脱臼处死，完整剥离肿瘤，10中性缓冲福尔马林固定，常规石蜡包埋，石蜡切片厚5um。各组计量资料输入计算机，采用SPSS16.0 for windows 统计软件包，以平均值士标准差(X士S)表示，各组间的比较采用单因素方差分析。统计学处理统计学处理 参雄抗癌丸对参雄抗癌丸对荷瘤小鼠的肿荷瘤小鼠的肿瘤生长有抑制瘤生长有抑制作用，治疗后作用，治疗后抑瘤率较模型抑瘤率较模型组有显著差异组有显著差异 参雄抗癌丸参雄抗癌丸可提

9、高肿瘤可提高肿瘤细胞的凋亡细胞的凋亡率，具有促率，具有促进或诱导肿进或诱导肿瘤细胞发生瘤细胞发生凋亡的作用。凋亡的作用。参雄抗癌丸可抑制参雄抗癌丸可抑制肝癌组织肝癌组织VEGF的的表达水平，同时降表达水平，同时降低肝癌组织低肝癌组织MVD。（各治疗组的（各治疗组的MVD和和VEGF水平水平与病理模型组比较与病理模型组比较均有明显的下降。）均有明显的下降。） 预期结果预期结果目前进展情况目前进展情况目前已完成文献检索经费预算 1.材料购置费 2000元 2.试剂购置费3000元 3.检测劳务费2500元 4.文献检索费200元 5.论文打印及版面发表1500元 6.论文答辩1500元 共计：10700元 实验经费为研究生科研经费研究进度及具体时间安排研究进度及