外照射、热疗及超激光对荷VX2瘤兔白细胞介素的影响.

1、外照射、热疗及超激光对荷 VX2 瘤兔白细胞介素的影响作者：刘建国 韩秋菊 尉继伟 作者单位：大同市第七人民医院， 山西 大同 037005【摘要】目的观察外照射（ teletherapy ）、局部热疗（ local hyperthermia ） 、超激光（super lizer,SL ）对荷VX2瘤兔的治疗作用，及其 细胞因子的改变。 方法将健康雄性 3 年的新西兰大白兔 80 只，分成四 组，外照射组（外放组）、体外高频热疗组（热疗组）、超激光治疗组（激光 组）和对照组各 20 只。观察肿瘤直径、生存期，同时检测白细胞介素 ,2、 6、 8（IL,2、IL,6、IL,8 ）在 VX2 瘤移

2、植前、后以及治疗 1、3、4 周后的变化情 况。结果 经治疗肿瘤直径从大到小和生存期从长至短依次为激光组、对照 组、热疗组、外放组；VX2 瘤移植成功后细胞因子的变化为 IL,2、IL,8 降低， IL,6 增高，治疗 4 周后 IL,2 、 IL,8 逐渐降低， IL,6 逐渐增高； IL,2 、 IL,6 的 变化程度外放组与热疗组比较有显著性差异（PV0.05），激光组各细胞因子与 对照组差异无显著性（P0.05） 。结论VX2 种植成功后对宿主细胞免疫产 生明显的抑制作用。外照射对其疗效明显好于热疗，且较明显地扭转其免疫过 程。超激光治疗对 VX2 瘤无效。【关键词】外照射高温疗法超激

3、光 VX2 瘤细胞因子LIU Jian,guo, HAN Qiu,ju, YU Ji,wei(No.7 Peoples Hospital of Datong City, Datong 037005, China)Abstract:PurposeTo investigate the effect of teletherapy,local hyperthermia and super lizer cytokines in VX2,bearing rabbits and the compacton cytokines.MethodsEighty white health malerabbits we

4、re divided into four groups (teletherapy group, local hyperthermia group,super lizer group and control group, 20 rabbits for each group). Tumor diameter, timeof survival changes of IL,2, IL,6, IL,8 before and after VX2 carcinoma transplantationand 1, 3, 4 weeks after treatment were observed.ResultsT

5、he tumor diameterand time of survival after treatment in descending order were as following: super lizergroup, control group, hyperthermia group and teletherapy group. The levels of IL,2and IL,8 increased and the level of IL,6 decreased. After 4 weeks of treatment thelevels of IL,2, IL,8 were gettin

6、g lower and the level of IL,6 was getting higher graduallyin all groups. There was significantly difference between teletherapy group andhyperthermia group in the levels of IL,2 and IL,6(Pv0.05). There was no sig nifica ntdiffere nee with cytokines between super lizer group and control group.Conclus

7、ionThe bearing of VX2 carcinoma obviously inhibited host immunity. The treatment effectof teletherapy was better than that of hyperthermia.Teletherapy can obviously improve the host immunity.Super lizer has no effect onVX2 carcinoma.Key words: teletherapy; hyperthermia; super lizer; VX2carci no ma;

8、cytoki ne VX2 瘤是 Shope 病毒诱发的乳头状瘤恶变后经兔传代而取得的实验性肿瘤，近似于人的实质器官原发恶性肿瘤，将其接种于兔的各个 部位进行动物实验研究模型的制作 1 ，2 。关于外照射、热疗及超激光对荷 VX2 瘤大白兔治疗作用的对比性观察在国内未见报道，现将我们的实验情况报 道如下。1 材料与方法1.1动物模型及其制作选用动物品种为健康雄性 3 年的新西兰大白兔 80 只，实验动物由山西 医科大学大同医学院动物饲养中心提供，体重 5kg（5 0.35）, 随机分为外照射 组（外放组）、热疗组、激光治疗组（激光组）、对照组各 20 只。中国医学科 学院细胞中心提供 VX2

9、瘤大白兔，断颈处死荷瘤兔，在无菌条件下取出肿瘤，机械匀浆制备成单细胞悬液（每毫升含 108 个细胞），选择大白兔的右后肢肌 肉内注射已制备好的单细胞液 1ml。接种后 1012d，实验动物均可触及 2.5c m3cm 的肿瘤，为种植成功。1.2治疗与方法外照射采用 SIEMENS PRIMUS,直线加速器产生的 6MV,X 射线，将野 中心对准兔右腿处肿瘤采用 SSD 照射，野边界在肿瘤边缘外放 3cm5cm 照射 剂量200cGy/F, DT2000cGy/10F 共 20d。常规分割治疗，将动物固定于木板之 上。热疗采用珠海产的 HG,2000 型体外高频热疗机，输入电压 220V, 温度

10、控制在 42.5C43.0C，机控输入功率在 90%95%计算机控制其与温度 相关，大于此值温度达 45C，小于此值温度低于 42C。每次热疗 10min, 1 次 /d, 共 15d。超激光设备为日本产 SUPER LIZER HA,550（ SL）直线偏振光近红外 线治疗仪。照射方法直接接触病变处皮肤，输出功率 90%选用 C 型镜头，照 射周期 8:1即照射 8s 停 1s，隔日 1 次，每次 5min，15 次。放射免疫监测：分别于移植前 24h、种植成功后（移植后）、治疗后1、 3、 4 周空腹状态下抽耳缘静脉血分离血清，检测： IL,2 、 IL,6 、 IL,8 。放免测定药盒及

11、设备：细胞因子放免测定试剂由九鼎医学生物有限公 司提供；使用上海原子能研究所日环仪器一厂 SN,695B 型智能放免Y,测量 仪，测定均严格按照试剂说明书进行操作。对照组未行任何治疗1.3统计学方法计量资料以均数标准差 （x s） 表示，结果采用 t 检验、 F 检验和 q 检验。计数资料采用卡方检验。2 结 果2.1肿瘤大小治疗前各组肿瘤直径大小无显著性差异（P0.05）,治疗结束比较各组 肿瘤直径。外放组肿瘤直径 2.23 0.54cm,其中有 6/20 例形成纤维硬结，破 溃 4/20 例。热疗组肿瘤张力比较高,中心有液化,其直径为7.65 2.78cm。对照组肿瘤直径 10.23 3.

12、01cm,肿瘤张力比较高。激光组肿瘤直径12.23 2.56cm,破溃 8/20 例，四个组中该组肿瘤最大、破溃最多。各组肿瘤直 径比较，差异有显著性（F=4.31 , Pv0.01 ）。2.2生存及转移情况外放组生存天数为 68.58 5.35d ;热疗组生存天数 58.51 5.23d ;对 照组生存天数为 45.23 3.56d ;激光组生存天数 38.35 3.2 6d。各组生存时间 比较有显著性差异（ F=17.12， Pv0.01） 。外放组肺转移 1/20 例，肝转移 1/20 例;热疗组肺转移 3/20 例，肝转 移 1/20例;对照组肺转移 16/20 例，肝转移 3/20

13、例;激光组肺转移 11/20 例，肝转移 2/20 例。各组肝、肺转移发生率比较有显著性差异（x2=37.89 , Pv0.01 ）。激光组、对照组死因以肺转移、肝转移为主，外放组、热疗组死因 以恶液质为主。2.3细胞因子变化情况2.3.1 IL,2 变化外放组 IL,2 降低的程度较热疗组、对照组、激光组低（Pv0.01 ） ，IL,2 在血清中的含量从低至高依次为：激光组/对照组v热疗组v外放组，且 与各组生存期呈正相关关系（ r=0.481 ， Pv0.01 ），降低的幅度越大生存期越 短。热疗组好于对照组，对照组与激光组无差异。治疗 4 周后外放组与热疗组 比较两组之间 IL,2 浓度

14、有显著性差异（ q=3.26， Pv0.05）。2.3.2 IL,6 的变化IL,6 在血清中的含量从低至高依次为外放组v热疗组v对照组/激光组，差异有显著性（ Pv0.01 ），与各组生存期比较呈负相关（ r=-0.297 ，Pv0.01 ） ，其增高的幅度越大，生存期越短。治疗 4 周后外放组与热疗组比较 IL,6 浓度有显著性差异（ q=7.39， Pv0.01）。2.3.3 IL,8 的变化IL,8 在血清中的含量依次为：激光组/对照组v热疗组v外放组，且与 各组生存期呈正相关（r=0.359，Pv0.01 ）。降低的幅度越大生存期越短。各组移植前各细胞因子血清含量比较无显著性差异（P

15、0.05），移植后 各组各细胞因子亦无差异 （P0.05） ， 移植前后各细胞因子比较则差异有显著 性 （Pv0.01 ） 。在各阶段中对照组与激光组比较无差异（P0.05）。外放组、 热疗组、激光组、对照组在移植前和治疗前（VX2 种植成功后）所观察的细胞 因子变化表现在 IL,2 、IL,8 降低， IL,6 增高。3 讨 论兔 VX2 瘤模型是一个成熟、稳定且应用广泛的肿瘤实验模型，种在兔大 腿上的 VX2 瘤，一般用作传种之瘤株。兔大腿肌肉血运丰富，VX2 瘤易于成活和观察，因此选择在兔大腿处接种。移植前后IL,2、6、8 的变化说明 VX2 瘤的生长对肌体细胞因子的正常应答产生了影响

16、。IL,2 主要由 T 细胞或 T 细胞系产 生，能直接增强单核细胞的细胞毒作用，具有独特的促进T 细胞抗肿瘤和杀伤肿瘤细胞的作用3。VX2 种植成功后 IL,2 降低对宿主细胞免疫产生明显的抑 制作用，特别是对 T 细胞的抑制4，IL,6 可促进或抑制肿瘤细胞增殖5。IL,8 是目前已知的最强的中性粒细胞趋化和激活因子 6 。由此产生一系列的 损伤性病理过程，即所谓的“瀑布效应 （cascade） ”。在本实验中外放组 IL,2 、 IL,8 高于其它组，降低幅度小于其它组。降低的幅度越大，其生存期越 短。 IL,6 在外放组中最低，也可能与对照组 /激光组转移比例高有关，其在各 组之间增高

17、的幅度越大，生存期越短。这只是我们在实验中观察到的现象，其 确切的机制还有待于进一步的研究。全身热疗导致机体免疫的抑制 , 局部热疗则能提高免疫力，表现在增强 T 淋巴细胞、NK 细胞和巨噬细胞的功能，从而阻止肿瘤的扩散 4。在本次实 验中观察到外放组、热疗组肺转移均较对照组 /激光组轻，与文献报道相同 4。外照射我们用的是 6MV,X 射线，直接损伤细胞的 DNA 链，也通过间接作用 对肿瘤细胞产生杀伤作用。常规分割符合放射生物学“4R原则，与现行临床治疗模式一致。肿瘤得到很好的控制，实验中外放组肿瘤DT2000cGy/10F 共20d，直径明显小于其它两组，提示 VX2 瘤对放射治疗高度敏

18、感。SL 产生 6001600nm 波长的近红外线，与普通的红外线相比不易被反 射分散和被机体吸收，治疗时红外线可达深部组织50mm 激光照射后神经细胞膜电位超极化， 血管扩张致局部血流改善抑制神经传导而起到很好的镇痛作用7， 8 ，对 IL,2、IL,6、IL,8 影响与对照组比较无显著性差异，提示超激光对 肿瘤没有治疗作用。激光组肿瘤直径大、破溃比例高，可能与超激光促进血液 循环，细胞通透性增高以及局部的加热作用有关。综上所述，可以认为 VX2 种植成功后对宿主细胞免疫产生抑制作用。外 照射、热疗对 IL,2 、 6、 8 的变化有逆转的作用，外照射对于热疗在治疗 4 周后 IL,2 、 IL,6比较差异有显著性，其意义有待于进一步阐明。【参考文献】柳曦，李欣，赵俊功，等 .兔 VX2 肝癌模型制作及综合影像评价 J. 实用 放射学杂志 , 2002 ，18(2)： 132-134.邵国良,周康荣,王建华,等.介入治疗研究中兔 VX2 肝癌模型制作的改进和CT 评价J.临床放射学杂志,2002,19 ( 10) :653-654.邱实，闵志廉,雷虹，等L,2 基因修饰对巨噬细胞杀瘤活性的影响J.第 二军医大学学报， 2000，21(1)：24-26.辛红. 局部热疗与肿瘤免疫 J. 北京医学 , 2000,22(5):298-300.王越，姚智 IL,