微生物检验技术 复习课2014

1、微生物检验技术复习第一章 绪论 了解微生物污染产品的来源（了解微生物污染产品的来源（6 6个）个） 理解微生物检验理解微生物检验涵义涵义及意义（及意义（3点）点） 了解微生物检验的任务（了解微生物检验的任务（5点）、范围（点）、范围（4点）和对象（点）和对象（7个）个）了解为什么要学这门专业课*第二章 细菌检验常规技术 1、微生物检验的基本程序、微生物检验的基本程序?（食品微生物检验的一般程序）（食品微生物检验的一般程序）（7步，其中每步的具体内容）步，其中每步的具体内容）2、食品微生物检验的指标、食品微生物检验的指标?（4个）个）3、微生物检验常规操作技术、微生物检验常规操作技术4、微生物培

2、养及实验基本操作技术微生物培养及实验基本操作技术包括哪些？（包括哪些？（6个方面，其中具体个方面，其中具体内容）内容）例如：培养基的类型和用途例如：培养基的类型和用途? 微生物接种方法包括哪些？微生物接种方法包括哪些？5、检验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？、检验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？6、革兰氏染色方法：负染色方法、革兰氏染色方法：负染色方法7、细菌、真菌、病毒如何分离纯化？、细菌、真菌、病毒如何分离纯化？4第一节第一节 微生物检验的基本程序微生物检验的基本程序一一 检验前的准备检验前的准备二二 样品的采集样品的采集三三 样品的送检样品的送检四四 样品的处理方法样品的处理方法

3、五五 致病菌检验参考菌群的选择致病菌检验参考菌群的选择六六 样品的检验样品的检验七七 检验结果的报告检验结果的报告5食品微生物检测食品微生物检测微生物检测微生物检测常规微生物常规微生物检测检测致病微生物致病微生物检测检测常规微生物项目：常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、酵母总数、霉菌总数，此细菌总数、大肠菌群、酵母总数、霉菌总数，此类细菌不致病，但会严重影响食品的外观及风味。目前常用微生物类细菌不致病，但会严重影响食品的外观及风味。目前常用微生物培养法来培养法来计数菌落计数菌落，允许允许有该类有该类菌落，但菌落总数菌落，但菌落总数不能超标不能超标。致病微生物项目致病微生物项目：沙门氏菌、李斯

4、特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆：沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌菌O157O157：H7H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单胞菌等。致病微生物在食品中是胞菌等。致病微生物在食品中是绝对不允许存在绝对不允许存在的，所以快速检测的，所以快速检测食品中是否存在有致病微生物，是食品安全检验的重中之重。食品中是否存在有致病微生物，是食品安全检验的重中之重。实例：实例：6食品微生物检验的一般步骤食品微生物检验的一般步骤样品采集样品采集与与送检送检样品预处理样品预处理选择参考菌群选择参考菌群菌落总数菌落总数大肠菌群大肠菌群致病菌致病菌

5、分离培养分离培养分离培养分离培养增菌增菌纯化纯化染色镜检染色镜检生化试验生化试验血清学试验血清学试验动物试验动物试验结果报告结果报告检验前的准备检验前的准备检验过程检验过程*第三章 细菌生化试验和血清学试验 细菌生化实验定义、方法（原理）、注意事项细菌生化实验定义、方法（原理）、注意事项 细菌鉴定的生化实验原理及现象细菌鉴定的生化实验原理及现象1、糖（醇）类代谢试验糖（醇）类代谢试验2、氨基酸和蛋白质代谢试验氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验有机酸盐和铵盐的利用试验4、呼吸酶类试验呼吸酶类试验5、毒性酶类试验毒性酶类试验81、糖醇类代谢试验（一）（一）糖醇类发酵试验糖醇类发酵试

6、验（二）（二）葡萄糖氧化发酵（葡萄糖氧化发酵（O/F）试验）试验 （三）（三）V-P试验试验（四）（四）甲基红（甲基红（Methyl Red）试验）试验 MR（五）（五）七叶苷水解试验七叶苷水解试验（六）（六）甘油品红试验甘油品红试验9制备好的培养制备好的培养基对照管基对照管培养基不变色培养基不变色非发酵菌非发酵菌斜面红色，斜面红色，底面黄色底面黄色培养基全黄色培养基全黄色斜面黄色、底部黑色，斜面黄色、底部黑色，并产生并产生H2S斜面红色，底部黑色，产生斜面红色，底部黑色，产生H2S底面黄色，并产生底面黄色，并产生CO210 5、毒性酶类试验F溶血溶血试验试验F链激酶链激酶试验试验F卵磷脂酶卵

7、磷脂酶试验试验F血浆凝固酶血浆凝固酶试验试验11甲型（甲型（-）溶血）溶血乙型（乙型（-）溶血）溶血丙型（丙型（-）溶血）溶血第四章 细菌常规检验 各论 细菌：细菌：20种种 显微形态及显微形态及染色特征染色特征 培养特性培养特性 生化特性生化特性 检验方法检验方法 大肠埃希氏菌、沙门氏菌大肠埃希氏菌、沙门氏菌 金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌 副溶血弧菌副溶血弧菌 蜡样芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌 单核增生李斯特菌单核增生李斯特菌 布氏杆菌布氏杆菌 椰毒假单胞菌酵米面亚种椰毒假单胞菌酵米面亚种 空肠弯曲菌空肠弯曲菌 结核分枝杆菌结核分枝杆菌第五章 真

8、菌及真菌毒素的检验 1、了解真菌的定义、分类、培养条件和方法、菌落、了解真菌的定义、分类、培养条件和方法、菌落形态形态2、霉菌的鉴定步骤，真菌产毒特征、霉菌的鉴定步骤，真菌产毒特征3、真菌毒素的种类、毒性作用和检测方法：、真菌毒素的种类、毒性作用和检测方法： (一一)化学检验法；化学检验法； (二二)免疫学检验法；免疫学检验法； (三三)生物学检验法生物学检验法真菌毒素的种类真菌毒素的种类 肝脏毒肝脏毒 主要致肝细胞变性、坏死，或引起肝硬化、肝主要致肝细胞变性、坏死，或引起肝硬化、肝癌，如黄曲霉毒素等。癌，如黄曲霉毒素等。 肾脏毒肾脏毒 主要引致急性或慢性肾脏病变，可使肾功能完主要引致急性或慢

9、性肾脏病变，可使肾功能完全丧失，如橘青霉素等。全丧失，如橘青霉素等。 神经毒神经毒 主要造成大脑和中枢神经系统的损害，引起严主要造成大脑和中枢神经系统的损害，引起严重的出血和神经组织变性，如黄绿霉素。重的出血和神经组织变性，如黄绿霉素。 造血组织毒造血组织毒 主要损害造血系统，发生造血组织坏死或主要损害造血系统，发生造血组织坏死或造血机能障碍、白血球减少症等，如某些镰刀菌毒素。造血机能障碍、白血球减少症等，如某些镰刀菌毒素。中毒性肝脏毒肾脏毒神经毒造血组织毒致畸、致癌、致突变毒素的产生毒素的产生 首先取决于菌株，其次依赖于外界环境，如基质、温度和湿度。首先取决于菌株，其次依赖于外界环境，如基质

10、、温度和湿度。 基质对霉菌的生长和产毒有一定的影响。一般而言，真菌产毒菌基质对霉菌的生长和产毒有一定的影响。一般而言，真菌产毒菌株主要在食物、粮食、饲草等植物上生长产毒，在乳、蛋等动物株主要在食物、粮食、饲草等植物上生长产毒，在乳、蛋等动物源基质上产毒能力较低。源基质上产毒能力较低。 霉菌的生长繁殖与温度有密切关系，大多数最适温度为霉菌的生长繁殖与温度有密切关系，大多数最适温度为2530，低于低于l0或高于或高于40生长减弱，产毒素能力也会受到影响。生长减弱，产毒素能力也会受到影响。 基质的水分、空气的湿度与真菌的生长繁殖和产毒素能力密切相基质的水分、空气的湿度与真菌的生长繁殖和产毒素能力密切

11、相关，基质含水量在关，基质含水量在17%18%时为真菌产毒素的最适条件。时为真菌产毒素的最适条件。中毒性毒素的检验毒素的检验 实例实例 检测真菌毒素有许多方法，如检测黄曲霉毒素有检测真菌毒素有许多方法，如检测黄曲霉毒素有生物生物学方法和学方法和ELISA法法等。等。 生物学方法生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、小白鼠作毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。小白鼠作毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。 ELISA法法操作简便，并具有安全快速高效、费用低，操作简便，并具有安全快速高效、费用低，适用于大批量标本的筛选。适用于大批量标本的筛选。中毒

12、性4 4、真菌的常规实验室检验法（镜检、培养）、真菌的常规实验室检验法（镜检、培养）5 5、真菌的主要生化反应实验（、真菌的主要生化反应实验（7 7个）个）6 6、病原真菌的分类和特征、病原真菌的分类和特征（1 1）感染性：）感染性：新生隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌的微生新生隐球菌、荚膜组织胞浆菌、白色念珠菌的微生物学检验（典型例子）物学检验（典型例子）（2 2）中毒性：）中毒性：重点在掌握毒素重点在掌握毒素黄绿青霉、桔青霉、岛青霉产生的毒素及特征黄绿青霉、桔青霉、岛青霉产生的毒素及特征镰刀菌属产生的毒素种类及其理化性质镰刀菌属产生的毒素种类及其理化性质 （3 3）两性兼有：）两性兼有：

13、曲霉的微生物学特征及产生毒素的种类和性质曲霉的微生物学特征及产生毒素的种类和性质 黄曲霉的微生物学特性和毒素特征？黄曲霉的微生物学特性和毒素特征？第六章 病毒的检验1 1、了解病毒的大小、形状、性质、了解病毒的大小、形状、性质* *2 2、病毒的培养方法及优缺点（实验动物、鸡胚、细胞培养法）、病毒的培养方法及优缺点（实验动物、鸡胚、细胞培养法）动物接种动物接种 和鸡胚接种的部位和适用范围和鸡胚接种的部位和适用范围* *3 3、细胞培养的类型、方法和、细胞培养的类型、方法和适用范围适用范围 类型：原代细胞类型：原代细胞 、二倍体细胞株、传代细胞系、二倍体细胞株、传代细胞系 方法：静置培养、方法：

14、静置培养、 旋转培养、旋转培养、 悬浮培养、悬浮培养、 微载体培养微载体培养* *4 4、评价病毒在培养细胞中增殖的指标有哪些？、评价病毒在培养细胞中增殖的指标有哪些？CPECPE效应及现象、红细胞吸附、干扰现象、细胞代谢改变、包涵体效应及现象、红细胞吸附、干扰现象、细胞代谢改变、包涵体* *5 5、病毒数量和感染性（毒价）的测定指标和方法、病毒数量和感染性（毒价）的测定指标和方法指标：指标：PFU/mLPFU/mL、LDLD5050 、 ID ID5050、 ELD ELD5050、 EID EID5050、 TCID TCID5050方法：有空斑试验、终点稀释法、荧光方法：有空斑试验、终点稀释法、荧光- -斑点试验、转化试验，动斑点试验、转化试验，动物接种实验、鸡胚接种实验物接种实验、鸡胚接种实验* *6 6、病毒如何进行分离鉴定？、病毒如何进行分离鉴定？P35-40 (P35-40 (禽流感病毒为例禽流感病毒为例) )7 7、如何检测病毒颗粒？、如何检测病毒颗粒？方法：方法：电镜技术电镜技术、血凝试验血凝试验、病毒酶活性病毒酶活性测定、测定、绿色荧光蛋白标