奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎作用机制的实验研究

1、奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎作用机制的实验研究奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎作用机制的实验研究余枭 张圣道 雷若庆 夏宗勤韩天权汤耀卿陈胜 王建承 袁祖荣【摘要】目的探讨奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎(anp)的作用机制。方法作者采用核素示踪和放射自显影技术，研究了奥曲肽对正常大鼠和 大鼠anp时胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成及分泌功能的影响。结 果奥曲肽对止常胰腺腺泡细胞和呈点状出血坏死的anp胰腺腺泡细胞氨 基酸摄取、酶蛋白合成均无明显影响，但可明显抑制胰腺腺泡细胞的外分 泌功能，导致细胞内酶原颗粒积聚，anp时胰腺腺泡细胞出现底膜及侧膜 的异位分泌，奥曲肽能够减少腺泡细胞的这种异位分泌。结论奥

2、曲肽对 胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成无影响，但可抑制胰腺腺泡细胞的 外分泌，尤其对anp吋腺泡细胞的异位分泌具冇抑制作用，防止了酶原颗 粒在细胞间质的积聚。【关键词】奥曲肽；急性坏死性胰腺炎；细胞功能；核素示踪；放身寸自显影 experimentai study of the therapeutic mechanism of octreotide in acutenecrotizing pancreatitis (anp)yu xiao, zhang shengdao, lei ruoqing, et al.(department of surgery, hengyang central

3、 hospital, hengyang, 421001,china)【abstract objective to study the therapeutic mechanism of octreotide in acute necrotizing pancreatitis (anp). methods the authors observed the effects of octreotide on the pancreatic acinar cells with respect to amino acid uptake, protein synthesis and discharge of

4、protein by the techniques of radioactive tracer and autoradiography in anp and control rats results it showed that octreotide had no effects on pancreatic acinar cells in amino acid uptake and protein syhthesis both in anp and control rats, but it could inhibit the secretion of enzymatic protein. th

5、ere was ectopic secretion from the basal and lateral membranes of the acinar cells in anp, and octreotide could decrease the ectopic secretion. conclusion octreotide has no effects on pancreatic acinar cells in amino acid uptake and enzyme protein synthesis, but it inhibits the secretion of enzyme p

6、rotein, especially the ectopic secretion of acinar cells in anp and thus prevents the accumulation of zymogen granules in the interstitium【key words octreotide; acute necrotizing pancreatitis; cellular function; radioactive tracer; autoradiography自从人工合成八肽生长抑素拟似剂一一奥曲肽(octreotide)以来，目前 己广泛应用于临床治疗急性坏死性

7、胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis, anp) 1、胰痿2等疾病。初步临床观察具有明显疗效，但其作用机 制尚未完全得到阐明。为此，作者通过动物实验研究了奥曲肽对胰腺腺泡 细胞氨基酸摄収、酶蛋白合成及分泌功能的影响。材料与方法一、实验材料1. 实验动物：sd雄性大鼠140只，体重160180g,常规喂养，实验 前12h禁食，自由饮水。2. 实验材料：牛磺胆酸钠(sodium taurocholate):sigma公司；l3h苯 丙氨酸:amersham公司；核乳胶：屮科院原子能研究所；奥曲肽(octreotide)： 北京诺华制药有限公司赠送。二、实验方法1.

8、大鼠anp动物模型建立3：实验动物随机分为a、b、c、d组， a组：空口对照组；假手术，颈静脉用生理盐水对照，lh lml/100g大鼠体 重；b组：用药组；假手术，颈静脉用0.75 u g/ml奥曲肽，lh lml/100g 大鼠体重；c组：造模组；胰管内注射5%牛磺胆酸钠制成anp动物模型， 颈静脉用等量生理盐水对照；d组：anp治疗组，颈静脉用药同b组。2. 胰腺腺泡细胞摄取氨基酸放射性含量测定：造模后，静脉lomin内 匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸louci, 30min后颈椎脱位处死大鼠，取胰腺 标本，用匀浆缓冲液漂洗2次，滤纸吸干组织水份，光量电子天平称组织 重量(mg),置入25m

9、l玻璃杯中，加入4ml匀浆缓冲液，冰浴中内切式匀 浆器匀浆(5 ooorpmxlmin),再转移至tefflon匀浆器匀浆，上下10次，取 3ml匀浆液离心(150g,15min,4° c),取上清液2ml再次离心(4000g,15min,4° c),再取上清液 0.5ml 加入 6ml 0.6% bu-pbd z2甲苯乙 二醇甲讎闪烁杯中，测定放射性含量(dpm,即每分钟实际衰变次数)，并 计算每mg胰腺组织摄収的氨基酸放射性含s：(dpm/mg)o3. 胰腺腺泡细胞合成酶蛋白放射性含量测定：造模后，静脉10min内 匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸75nci,分别于30、60

10、、90、120、150min颈椎脱位处死大鼠取胰腺标本(每个时间点每组5只)，用匀浆缓冲液漂洗2 次，滤纸吸干组织水份，称组织的重量(mg),置于25ml玻璃杯，加入3ml 匀浆缓冲液，内切式匀浆器匀浆(5 ooorpmx lmin),再转移至tefflon匀浆 器中匀浆,匀浆液离心(150g,15min,4° c)。沉淀部分称重(mg),取50mg 酶蛋白于闪烁杯中，酸消化法消化组织向闪烁杯加入0.6% bu-pbd二甲苯 乙二醇甲醞闪烁液10ml,测定放射性含量(dpm),计算每mg胰腺组织合 成酶蛋白放射性含量(dpm/mg)。4. 放射自显影法观察胰腺腺泡细胞酶蛋口分泌：造模

11、后，静脉lomin 内匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸75 口 ci, 2h后颈椎脱位处死大鼠取胰腺标 本，10%中性福尔马林液固定，病理切片、脱蜡、脱水、涂核乳胶，曝光 4周后显影、定影，he轻染，封片，计算机图像分析技术640倍高倍油镜 下观察胰腺腺泡细胞内外酶原颗粒分布。5. 统计学处理：采用单因素方差分析检验。结果一、胰腺腺泡细胞摄取氨基酸放射性含量比较见图lo奥曲肽对胰腺腺泡细胞摄取的氨基酸放射性含量与对照组相 比(b与a, a与c, d与c),各两组间结果比较差异均无显著性(p&gt；0.05)o 结果表明，无论是对止常胰腺腺泡细胞还是对呈点状出血坏死的胰腺腺泡 细胞，奥曲肽对胰

12、腺腺泡细胞氨基酸摄取均无明显影响。a组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp治疗组图1a、b、c、d四组胰腺腺泡细胞摄取氨基酸的放射性含量二、奥曲肽对胰腺腺泡细胞合成的酶蛋白放射性含量影响见表1及图2。胰腺组织腺泡细胞酶蛋白合成(n=5),主要观察氨基酸 静脉注入后060 min这一时段。图2中曲线上升支表示酶蛋口合成，下 降支则是合成与分泌的综合结果。作者观察到：a、b、c、d组在30、60 分钟其曲线变化基本一致，各点间差异无显著性(p&gt；0.05)o结果表明， 奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞、anp时胰腺腺泡细胞酶蛋白合成均无明显影 响。表1a、b、c、d

13、组胰腺腺泡细胞合成的酶蛋口放射性含量比较(土s)a组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp 治疗组。表示30、60、a90min 时 pab>0.05,pac>0.05,pcd>0.05；与*表示 120>150min 时 pac<0.05;*表示 120、150min 时 pcd>0.05oa组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp 治疗组。*表示该时点 pab>0.05zpac>005,pcd>005; *表示该时点 pa

14、b>0.05, pac<0.05,pcd>005图2 a、b、c、d组胰腺腺泡细胞合成的酶蛋口放射性含量曲线三、奥曲肽对胰腺腺泡细胞外分泌功能的影响观察各组标本在640倍高倍油镜下可见：a组酶原颗粒分布于细胞内，间质中未见酶原颗粒；b组细胞内酶原颗粒明显多于a组，间质中未见到酶 原颗粒；c组酶原颗粒分布于细胞内外，间质中亦可见较多酶原颗粒；d 组奥曲肽治疗后酶原颗粒主耍分布于细胞内，间质屮酶原颗粒明显少于c 组。奥曲肽明显抑制正常腺泡细胞内酶原颗粒分泌，导致b组细胞内酶原 颗粒较a组明显增多；anp时腺泡细胞除将酶原颗粒分泌到胰管内外，还 通过底膜及侧

15、膜异位分泌到细胞间质，奥曲肽明显抑制腺泡细胞的这种异 位分泌，减少间质中酶原颗粒的积聚。讨论生长抑素(somatostatin)是一种抑制多种激素释放的调节肽，可能是中 枢神经系统内的一种神经递质46,其作用方式是通过高亲和性的特异 g蛋白介导的膜受体调节。具有7五个不同受体亚型，广泛分布于细胞膜上，主要是抑制作用。目前人工合成生长抑素八肽拟似剂一一奥曲肽(octreotide)b广泛用于临床治疗anp。关于其作 用机制则尚未完全阐明。本实验研究结果发现：奥曲肽对胰腺腺泡细胞氨基酸摄取无明显抑制 作用；奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞和anp时胰腺腺泡细胞酶蛋白合成亦无 影响，酶蛋白合成高峰期均在60

16、min这一时点，与文献报道相一致3。 大量实验研究提示：奥曲肽能够抑制部分肿瘤细胞基因表达和mrna稳定 性(如结直肠癌)，可减少蛋白质合成，从而限制肿瘤细胞转化和增生8。 对胰腺腺泡细胞是否有类似作用，则有待进一步研究。通过放射自显影观 察到呈点状出血坏死的胰腺腺泡细胞，酶原颗粒除正常途径的顶膜分泌到 胰管内外，还出现侧膜及底膜向间质的异位分泌，导致酶原颗粒于细胞间 质内积聚。奥曲肽能够明显抑制正常胰腺腺泡细胞酶原颗粒分泌，导致细 胞内酶原颗粒积聚，同时亦能明显抑制anp胰腺腺泡细胞底膜及侧膜异位 分泌，减少间质中酶原颗粒积聚，有利于保护腺泡细胞膜结构的完整性。 这解释了为什么在腺泡细胞酶蛋

17、白合成的变化曲线屮120、150min时anp 模型组曲线反较空白对照组高，是由于合成的酶蛋白部分通过底膜及侧膜 分泌到细胞间质而不是通过顶膜分泌到胰管排泄到胃肠道之故。由于奥曲 肽抑制了腺泡细胞的外分泌和anp时腺泡细胞的异位分泌，导致合成的酶 原颗粒细胞内积聚。这也解释了酶蛋口合成曲线在120、150min时anp 治疗组为什么显著高于空白对照（a）组z故。首次采用核素示踪和放射自显影技术研究了奥曲肽对胰腺腺泡细胞 功能影响。直接观察到奥曲肽治疗anp的一个重要作用机制不在于对腺泡 细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成，而主要在于抑制腺泡细胞底膜及侧膜异位 分泌，阻止急性坏死性胰腺炎进一步恶化。因此

18、，我们认为呈弥漫性点状 出血坏死的急性坏死性胰腺炎，部分有可能转化为急性坏死性胰腺炎的水 肿性胰腺炎，及早使用奥曲肽，抑制腺泡细胞异位分泌的酶原颗粒于间质 中积聚，可能具有更为积极的治疗意义。（本文编辑夏维新）作者单位：余枭（421001湖南省衡阳市中心医院普外科）张圣道（上海第二医科大学瑞金医院普外科）雷若庆（上海第二医科大学瑞金医院普外科） 韩天权（上海第二医科大学瑞金医院普外科） 汤耀卿（上海第二医科大学瑞金医院普外科） 陈胜（上海第二医科大学瑞金医院普外科）王建承（上海第二医科大学瑞金医院普外科）袁祖荣（上海第二医科大学瑞金医院普外科）夏宗勤（上海第二医科大学核医学实验室）参考文献1

19、carballo f, domiguez e, fernandezcalvet l, et al. is somatostatin useful in the treatment of acute pancreatitis? digestion, 1991, 49:12132 torres aj, landa ji, more no-azecita m, et al. somatostatin in the management of gastrointestinal fistulas arch surgery, 1992, 127:97-99.3 saluja a, saito i, sal

20、uja m, et al. in vivo rat pancreatic aoinar cellular function with cerulein. am j physiol, 1985, 249:g709-710.4 brazeau p, burgus wr, butcher nlm, et al. hypothalamic polypeptide that inhibits the secretion of immunnoreactive pituitary growth hormone. science, 1973, 179:77-79.5 grosman i, simon d. p

21、otential gastrontestinal uses of somatostatin and its synthetic analogue octreotide am j gastreoenterol, 1990, 85:1061-10726 reichlin s. somatostatin. n engl j med, 1983, 309:1495-1501 7 resine t, bell di. molecular properties of somatostatin receptors. neuroscience, 1995, 67:777-790.8 tang lh, modl

22、in im. somatostatin receptor regulation of gastric carcinoid tumours. digestion, 1996, 57(suppl 1):11-14.奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎作用机制的实验研究余枭 张圣道雷若庆夏宗勤韩天权汤耀卿陈胜土建承袁祖荣【摘耍】冃的探讨奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎(anp)的作用机制。 方法 作者采用核素示踪和放射自显影技术，研究了奥曲肽对正常大鼠和 大鼠anp时胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成及分泌功能的影响。结 果奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞和呈点状岀血坏死的anp胰腺腺泡细胞氨 基酸摄取、酶蛋口合成均无明显

23、影响，但可明显抑制胰腺腺泡细胞的外分 泌功能，导致细胞内酶原颗粒积聚，anp时胰腺腺泡细胞出现底膜及侧膜 的异位分泌，奥曲肽能够减少腺泡细胞的这种异位分泌。结论 奥曲肽对 胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成无影响，但可抑制胰腺腺泡细胞的 外分泌，尤其对anp时腺泡细胞的异位分泌具有抑制作用，防止了酶原颗 粒在细胞间质的积聚。【关键词】奥曲肽；急性坏死性胰腺炎；细胞功能；核素示踪；放射自显影experimental study of the therapeutic mechanism of octreotide in acutenecrotizing pancreatitis (anp)yu x

24、iao, zhang shengdao, lei ruoqing, etal.(department of surgery, hengyang central hospital, hengyang, 421001,china)abstract objective to study the therapeutic mechanism of octreotide in acute necrotizing pancreatitis (anp). methods the authors observed the effects of octreotide on the pancreatic acina

25、r cells with respect to amino acid uptake, protein synthesis and discharge of protein by the techniques of radioactive tracer and autoradiography in anp and control rats results it showed that octreotide had no effects on pancreatic acinar cells in amino acid uptake and protein syhthesis both in anp

26、 and control rats, but it could inhibit the secretion of enzymatic protein. there was ectopic secretion from the basal and lateral membranes of the acinar cells in anp, and octreotide could decrease the ectopic secretion. conclusionoctreotide has no effects on pancreatic acinar cells in amino acid u

27、ptake and enzyme protein synthesis, but it inhibits the secretion of enzyme protein, especially the ectopic secretion of acinar cells in anp and thus prevents the accumulation of zymogen granules in thein terstitiu m.【key words octreotide; acute necrotizing pancreatitis; cellular function; radioacti

28、ve tracer; autoradiography自从人工合成八肽生长抑素拟似剂一一奥曲肽(octreotide)以来，目前 己广泛应用于临床治疗急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis, anp) 1、胰痿2等疾病。初步临床观察具有明显疗效，但其作用机 制尚未完全得到阐明。为此，作者通过动物实验研究了奥曲肽对胰腺腺泡 细胞氨基酸摄収、酶蛋白合成及分泌功能的影响。材料与方法一、实验材料1. 实验动物：sd雄性大鼠140只，体重160180g,常规喂养，实验 前12h禁食，自由饮水。2. 实验材料：牛磺胆酸钠(sodium taurocholate):si

29、gma公司；l3h苯 丙氨酸:amersham公司；核乳胶：中科院原了能研究所；奥曲肽(octreotide)： 北京诺华制药有限公司赠送。二、实验方法1. 大鼠anp动物模型建立3：实验动物随机分为a、b、c、d组， a组：空白对照组；假手术，颈静脉用生理盐水对照，lh lml/100g大鼠体 重；b组：用药组；假手术，颈静脉用0.75 p g/ml奥曲肽，lh lml/100g 大鼠体重；c组：造模组；胰管内注射5%牛磺胆酸钠制成anp动物模型， 颈静脉用等量生理盐水对照；d组：anp治疗组，颈静脉用药同b组。2. 胰腺腺泡细胞摄取氨基酸放射性含量测定：造模后，静脉lomin内 匀速缓慢注

30、入l3h苯丙氨酸lopci, 30min后颈椎脱位处死大鼠，取胰腺 标本，用匀浆缓冲液漂洗2次，滤纸吸干组织水份，光量电子天平称组织 重量(mg),置入25ml玻璃杯中，加入4ml匀浆缓冲液，冰浴中内切式匀 浆器匀浆(5 ooorpmx lmin)，再转移至tefflon匀浆器匀浆，上下10次，取 3ml匀浆液离心(150g,15min?4° c),取上清液2ml再次离心(4 000gj5min,4° c),再取上清液0.5ml加入6ml 0.6% bu-pbd二甲苯乙二醇甲瞇闪烁杯中， 测定放射性含量(dpm,即每分钟实际衰变次数)，并计算每mg胰腺组织摄 取的氨基酸放射

31、性含(dpm/mg)o3胰腺腺泡细胞合成酶蛋口放射性含量测定：造模后，静脉lomin内 匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸75 h ci,分别于30、60、90、120、150min 颈椎脱位处死大鼠取胰腺标本(每个时间点每组5只)，用匀浆缓冲液漂洗2 次，滤纸吸干组织水份，称组织的重量(mg),置于25ml玻璃杯，加入3ml 匀浆缓冲液，内切式匀浆器匀浆(5 ooorpmx lmin),再转移至tefflon匀浆 器中匀浆,匀浆液离心(150g,15min,4° c)。沉淀部分称重(mg),取50mg 酶蛋白于闪烁杯中，酸消化法消化组织向闪烁杯加入0.6% bu-pbd二甲苯 乙二醇甲瞇闪

32、烁液10ml,测定放射性含量(dpm),计算每mg胰腺组织合 成酶蛋口放射性含量(dpm/mg)o4. 放射口显影法观察胰腺腺泡细胞酶蛋白分泌：造模后，静脉10min 内匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸75 p ci, 2h后颈椎脱位处死大鼠取胰腺标 本，10%中性福尔马林液固定，病理切片、脱蜡、脱水、涂核乳胶，曝光 4周后显影、定影，he轻染，封片，计算机图像分析技术640倍高倍油镜 下观察胰腺腺泡细胞内外酶原颗粒分布。5. 统计学处理：采用单因素方差分析检验。结果一、胰腺腺泡细胞摄取氨基酸放射性含量比较见图lo奥曲肽对胰腺腺泡细胞摄取的氨基酸放射性含量与对照组相 比(b与a, a与c, d与c)

33、,各两组间结果比较差异均无显著性(p>0.05)o 结果表明，无论是对正常胰腺腺泡细胞还是对呈点状出血坏死的胰腺腺泡 细胞，奥曲肽对胰腺腺泡细胞氨基酸摄取均无明显影响。a组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp治疗组图1a、b、c、d四组胰腺腺泡细胞摄取氨基酸的放射性含量二、奥曲肽对胰腺腺泡细胞合成的酶蛋白放射性含量影响见表1及图2。胰腺组织腺泡细胞酶蛋口合成(n=5),主要观察氨基酸 静脉注入后060 min这一时段。图2中曲线上升支表示酶蛋白合成，下 降支则是合成与分泌的综合结果。作者观察到：a、b、c、d组在30、60 分钟其曲线变化基本一致，各点

34、间差异无显著性(p&gt；0.05)o结果表明， 奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞、anp时胰腺腺泡细胞酶蛋白合成均无明显影 响。表1a、b、c、d组胰腺腺泡细胞合成的酶蛋白放射性含量比较(土 s)a组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp 治疗组。表不30、60、a90min 时 pab>0.05,pac>0.05,pcd>0.05；与*表示 120>150min 时 pac<0.05;*表示 120、150min 时 pcd>0.05oa组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组

35、；d组：anp 治疗组。*表示该时点 pab>0.05?pac>0.05,pcd>0.05; *表示该时点 pab>0.05, pac<0.05?pcd>0.05图2 a、b、c、d组胰腺腺泡细胞合成的酶蛋白放射性含量曲线三、奥曲肽对胰腺腺泡细胞外分泌功能的影响观察 各组标本在640倍高倍油镜下可见：a组酶原颗粒分布于细胞内，间 质中未见酶原颗粒；b组细胞内酶原颗粒明显多于a组，间质中未见到酶原颗粒；c组酶原颗粒分布于细胞内外，间质屮亦可见较多酶原颗粒；d 组奥曲肽治疗后酶原颗粒主要分布于细胞内，间质中酶原颗粒

36、明显少于c 组。奥曲肽明显抑制止常腺泡细胞内酶原颗粒分泌，导致b组细胞内酶原 颗粒较a组明显增多；anp时腺泡细胞除将酶原颗粒分泌到胰管内外，还 通过底膜及侧膜异位分泌到细胞间质，奥曲肽明显抑制腺泡细胞的这种异 位分泌，减少间质中酶原颗粒的积聚。讨论生长抑素(somatostatin)是一种抑制多种激素释放的调节肽，可能是中 枢神经系统内的一种神经递质46,其作用方式是通过高亲和性的特异 g 蛋白介导的膜受体调节。具有五个不同受体亚型，广泛分布于细胞膜上， 主要是抑制作用7。目前人工合成生长抑素八肽拟似剂一一奥曲肽 (octreotide)已广泛用于临床治疗anp。关于英作用机制则尚未完全阐明

37、。本实验研究结果发现：奥曲肽对胰腺腺泡细胞氨基酸摄取无明显抑制 作用；奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞和anp时胰腺腺泡细胞酶蛋白合成亦无 影响，酶蛋白合成高峰期均在60min这一时点，与文献报道相一致3。 大量实验研究提示：奥曲肽能够抑制部分肿瘤细胞基因表达和mrna稳定 性(如结直肠癌)，可减少蛋白质合成，从而限制肿瘤细胞转化和增生8。 对胰腺腺泡细胞是否有类似作用，则有待进一步研究。通过放射自显影观 察到呈点状出血坏死的胰腺腺泡细胞，酶原颗粒除正常途径的顶膜分泌到 胰管内外，还出现侧膜及底膜向间质的异位分泌，导致酶原颗粒于细胞间 质内积聚。奥曲肽能够明显抑制正常胰腺腺泡细胞酶原颗粒分泌，导致细

38、胞内酶原颗粒积聚，同时亦能明显抑制anp胰腺腺泡细胞底膜及侧膜异位 分泌，减少间质屮酶原颗粒积聚，有利于保护腺泡细胞膜结构的完整性。 这解释了为什么在腺泡细胞酶蛋白合成的变化曲线中120、150min时anp 模型组曲线反较空白对照组高，是由于合成的酶蛋口部分通过底膜及侧膜 分泌到细胞间质而不是通过顶膜分泌到胰管排泄到胃肠道z故。由于奥曲 肽抑制了腺泡细胞的外分泌和anp时腺泡细胞的异位分泌，导致合成的酶 原颗粒细胞内积聚。这也解释了酶蛋白合成曲线在120、150min时anp 治疗组为什么显著高于空白对照（a）组之故。首次采用核素示踪和放射自显影技术研究了奥曲肽对胰腺腺泡细胞 功能影响。直接

39、观察到奥曲肽治疗anp的一个重耍作用机制不在于对腺泡 细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成，而主要在于抑制腺泡细胞底膜及侧膜异位 分泌，阻止急性坏死性胰腺炎进一步恶化。因此，我们认为呈弥漫性点状 出血坏死的急性坏死性胰腺炎，部分有可能转化为急性坏死性胰腺炎的水 肿性胰腺炎，及早使用奥曲肽，抑制腺泡细胞异位分泌的酶原颗粒于间质 中积聚，可能具有更为积极的治疗意义。（本文编辑夏维新）作者单位：余枭（421001湖南省衡阳市中心医院普外科）张圣道（上海第二医科大学瑞金医院普外科）雷若庆（上海第二医科大学瑞金医院普外科）韩天权（上海第二医科大学瑞金医院普外科）汤耀卿（上海第二医科大学瑞金医院普外科） 陈胜（上海

40、第二医科大学瑞金医院普外科） 王建承（上海第二医科大学瑞金医院普外科） 袁祖荣（上海第二医科大学瑞金医院普外科）夏宗勤（上海第二医科大学核医学实验室）参考文献1 carballo f, domiguez e, fernandez-calvet l, et al. is somatostatin useful in the treatment of acute pancreatitis? digestion, 1991, 49:1213.2 torres aj, landa ji, moreno-azecita m, et al. somatostatin in the management o

41、f gastrointestinal fistulas. arch surgery, 1992, 127:97-993 saluja a, saito i, saluja m, et al. in vivo rat pancreatic aoinar cellular function with cerulein. am j physiol, 1985, 249:g709-7104 brazeau p, burgus wr, butcher nlm, et al. hypothalamic polypeptide that inhibits the secretion of immunnore

42、active pituitary growth hormone. science, 1973, 179:77-79.5 grosman i, simon d. potential gastrontestinal uses of somatostatin and itssynthetic analogue octreotide. am j gastreoenterol, 1990,85:1061-1072.6 reichlin s. somatostatin. n engl j med, 1983, 309:1495-1501.7 resinet, bell di. molecular prop

43、erties of somatostatin receptors neuroscience, 1995, 67:777-790.8 tang lh, modlin im. somatostatin receptor regulation of gastric carcinoid tumours digestion, 1996, 57（suppl 1）:11 14.奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎作用机制的实验研究 余枭 张圣道 雷若庆 夏宗勤韩天权汤耀卿陈胜 王建承 袁祖荣【摘要】目的探讨奥曲肽治疗急性坏死性胰腺炎(anp)的作用机制。方法 作者采用核素示踪和放射自显影技术，研究了奥曲肽对正常大鼠和

44、 大鼠anp时胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成及分泌功能的影响。结 果 奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞和呈点状出血坏死的anp胰腺腺泡细胞氨 基酸摄取、酶蛋白合成均无明显影响，但可明显抑制胰腺腺泡细胞的外分 泌功能，导致细胞内酶原颗粒积聚，anp时胰腺腺泡细胞出现底膜及侧膜 的异位分泌，奥曲肽能够减少腺泡细胞的这种异位分泌。结论奥曲肽对 胰腺腺泡细胞氨基酸摄取、酶蛋白合成无影响，但可抑制胰腺腺泡细胞的 外分泌，尤其对anp时腺泡细胞的异位分泌具有抑制作用，防止了酶原颗 粒在细胞间质的积聚。【关键词】奥曲肽；急性坏死性胰腺炎；细胞功能；核素示踪；放 射自显影experimental study of

45、 the therapeutic mechanism of octreotide in acutenecrotizing pancreatitis (anp)yu xiao, zhang shengdao, lei ruoqing, etal.(department of surgery, hengyang central hospital, hengyang, 421001, china)【abstract objective to study the therapeutic mechanism of octreotide in acute necrotizing pancreatitis

46、(anp). methods the authors observed the effects of octreotide on the pancreatic acinar cells with respect to amino acid uptake, protein synthesis and discharge of protein by the techniques of radioactive tracer and autoradiography in anp and control rats results it showed that octreotide had no effe

47、cts on pancreatic acinar cells in amino acid uptake and protein syhthesis both in anp and control rats, but it could inhibit the secretion of enzymatic protein. there was ectopic secretion from the basal and lateral membranes of the acinar cells in anp, and octreotide could decrease the ectopic secr

48、etion. conclusionoctreotide has no effects on pancreatic acinar cells in amino acid uptake and enzyme protein synthesis, but it inhibits the secretion of enzyme protein, especially the ectopic secretion of acinar cells in anp and thus prevents the accumulation of zymogen granules in thein terstitium

49、.【key words】 octreotide; acute necrotizing pancreatitis; cellular function; radioactive tracer; auto-radiography自从人工合成八肽生长抑素拟似剂奥曲肽(octreotide)以来，日前己广泛应用于临床治疗急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis, anp) 1、胰痿2等疾病。初步临床观察具有明显疗效，但其作用机 制尚未完全得到阐明。为此，作者通过动物实验研究了奥曲肽对胰腺腺泡 细胞氨基酸摄取、酶蛋口合成及分泌功能的影响。材料与方法一、实验材料1.

50、实验动物：sd雄性大鼠140只，体重160180g，常规喂养，实验 前12h禁食，自由饮水。2. 实验材料：牛磺胆酸钠(sodium taurocholate):sigma公司；l3h苯 丙氨酸:amersham公司；核乳胶：中科院原子能研究所；奥曲肽(octreotide)： 北京诺华制药有限公司赠送。二、实验方法1. 大鼠anp动物模型建立3：实验动物随机分为a、b、c、d组， a组：空白对照组；假手术，颈静脉用生理盐水对照，lh lml/100g大鼠体 重；b组：用药组；假手术，颈静脉用0.75 u g/ml奥曲肽，lh lml/100g 大鼠体重；c组：造模组；胰管内注射5%牛磺胆酸钠

51、制成anp动物模型， 颈静脉用等量生理盐水对照；d组：anp治疗组，颈静脉用药同b组。2. 胰腺腺泡细胞摄取氨基酸放射性含量测定：造模后，静脉lomin内 匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸louci, 30min后颈椎脱位处死大鼠，取胰腺 标本，用匀浆缓冲液漂洗2次，滤纸吸干组织水份，光量电子天平称组织 重量(mg),置入25ml玻璃杯中，加入4ml匀浆缓冲液，冰浴中内切式匀 浆器匀浆(5 ooorpmx lmin),再转移至tefflon匀浆器匀浆，上下10次，取 3ml匀浆液离心(150gj5mie4° c),取上清液2ml再次离心(4 000g5min,4° c),再取上清

52、液0.5ml加入6ml 0.6% bu-pbd二甲苯乙二醇甲醞闪烁杯中， 测定放射性含量(dpm,即每分钟实际衰变次数)，并计算每mg胰腺组织摄 取的氨基酸放射性含量(dpm/mg)o3. 胰腺腺泡细胞合成酶蛋白放射性含量测定：造模后，静脉lomin内 匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸75 口 ci,分别于30、60、90、120、150min 颈椎脱位处死大鼠取胰腺标本(每个时间点每组5只)，用匀浆缓冲液漂洗2 次，滤纸吸干组织水份，称组织的重量(mg),置于25ml玻璃杯，加入3ml 匀浆缓冲液，内切式匀浆器匀浆(5 ooorpmx lmin),再转移至tefflon匀浆 器中匀浆，匀浆液离心(

53、150g,15min,4° c)。沉淀部分称重(mg),取50mg 酶蛋白于闪烁杯中，酸消化法消化组织向闪烁杯加入0.6% bu-pbd二甲苯 乙二醇甲瞇闪烁液10ml,测定放射性含量(dpm),计算每mg胰腺组织合 成酶蛋白放射性含量(dpm/mg) o4. 放射自显影法观察胰腺腺泡细胞酶蛋白分泌：造模后，静脉lomin 内匀速缓慢注入l3h苯丙氨酸75 u ci, 2h后颈椎脱位处死大鼠取胰腺标 本，10%中性福尔马林液固定，病理切片、脱蜡、脱水、涂核乳胶，曝光 4周后显影、定影，he轻染，封片，计算机图像分析技术640倍高倍油镜 下观察胰腺腺泡细胞内外酶原颗粒分布。5. 统计学

54、处理：采用单因素方差分析检验。结果一、胰腺腺泡细胞摄取氨基酸放射性含量比较见图1o奥曲肽对胰腺腺泡细胞摄取的氨基酸放射性含量与对照组相 比(b与a, a与c, d与c),各两组间结果比较差异均无显著性(p>0.05)o 结果表明，无论是对正常胰腺腺泡细胞还是对呈点状出血坏死的胰腺腺泡 细胞，奥曲肽对胰腺腺泡细胞氨基酸摄取均无明显彫响。a组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp 治疗组图1a、b、c、d四组胰腺腺泡细胞摄取氨基酸的放射性含量 二、奥曲肽对胰腺腺泡细胞合成的酶蛋白放射性含量影响 见表1及图2。胰腺组织腺泡细胞酶蛋口合成(n=5),主要观察氨基

55、酸 静脉注入后060 min这一时段。图2中曲线上升支表示酶蛋白合成，下 降支则是合成与分泌的综合结果。作者观察到：a、b、c、d组在30、60 分钟其曲线变化基本一致，各点间差异无显著性(p&gt；0.05)o结果表明， 奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞、anp时胰腺腺泡细胞酶蛋白合成均无明显影 响。表1a、b、c、d组胰腺腺泡细胞合成的酶蛋白放射性含量比较(土s)a组：空口对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp 治疗组。表不30、60 >a90min 时 pab>0.05,pac>005,pcd>0.05；与*表示 120

56、>150min 时 pac<0.05;*表示 120、150min 时 pcd>0.05oa组：空白对照组；b组：空白用药组；c组：anp模型组；d组：anp 治疗组。*表示该时点 pab>0.05,pac>005,pcd>0.05; *表示该时点 pab>0.05, pac<0.05,pcd>005图2 a、b、c、d组胰腺腺泡细胞合成的酶蛋白放射性含量曲线三、奥曲肽对胰腺腺泡细胞外分泌功能的影响观察各组标本在640倍高倍油镜下可见：a组酶原颗粒分布于细胞内，间 质屮未见酶原

57、颗粒；b组细胞内酶原颗粒明显多于a组，间质中未见到酶原颗粒；c组酶原颗粒分布于细胞内外，间质中亦可见较多酶原颗粒；d组奥曲肽治 疗后酶原颗粒主要分布于细胞内，间质中酶原颗粒明显少于c组。奥曲肽 明显抑制正常腺泡细胞内酶原颗粒分泌，导致b组细胞内酶原颗粒较a组 明显增多；anp时腺泡细胞除将酶原颗粒分泌到胰管内外，还通过底膜及 侧膜异位分泌到细胞间质，奥曲肽明显抑制腺泡细胞的这种异位分泌，减 少间质屮酶原颗粒的积聚。讨论生长抑l(somatostatin)是一种抑制多种激素释放的调节肽，可能是中 枢神经系统内的一种神经递质46,其作用方式是通过高亲和性的特异 g 蛋口介导的膜受体调节。具有五个不同受体亚型，广泛分布于细胞膜上， 主耍是抑制作用7。冃前人工合成生长抑素八肽拟似剂一一奥曲肽 (octreotide)已广泛用于临床治疗anp。关于其作用机制则尚未完全阐明。本实验研究结果发现：奥曲肽对胰腺腺泡细胞氨基酸摄取无明显抑制 作用；奥曲肽对正常胰腺腺泡细胞和anp时胰腺腺泡细胞酶蛋白合成亦无 影响，酶蛋白合成高峰期均在6