WatersAllianceHPLC操作及维护学习课程

1、2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL主要内容主要内容基本构造仪器日常操作仪器常见故障及维护保养第1页/共35页第一页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL基本构造基本构造 溶剂输送系统溶剂输送系统(串联泵串联泵) 进样系统进样系统 柱温箱柱温箱 检测器检测器基本构造第2页/共35页第二页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL基本构造基本构造溶剂瓶控制面板样品盘串联泵进样

2、器在线脱气机Waters e2695示意图第3页/共35页第三页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL溶剂输送系统溶剂输送系统基本构造第4页/共35页第四页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL基本构造基本构造2695溶剂输送系统（串联泵）示意图第5页/共35页第五页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL溶剂管理系统中的流路溶剂管理系统中的

3、流路 Prime/Vent ValveInletCheckvalveInletCheckvalveABCDFront基本构造第6页/共35页第六页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL样品管理系统样品管理系统基本构造第7页/共35页第七页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 样品管理系统可存放和定位样品瓶样品管理系统可存放和定位样品瓶并将样品注入溶剂流。样品管理系并将样品注入溶剂流。样品管理系统有统有 5 5 个样品转盘。

4、个样品转盘。 每个样品转盘中最多可容纳每个样品转盘中最多可容纳 24 24 个样品瓶，共计可容纳个样品瓶，共计可容纳 120 120 个样个样品瓶。品瓶。基本构造第8页/共35页第八页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL样品管理系统中的流路基本构造第9页/共35页第九页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL基本构造基本构造柱 温 箱第10页/共35页第十页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corpor

5、ation | COMPANY CONFIDENTIAL基本构造基本构造检测器第11页/共35页第十一页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL仪器日常操作仪器日常操作 开机开机 操作前准备操作前准备 灌注柱塞密封泵灌注柱塞密封泵(Prime Seal Wash) 灌注针头清洗泵灌注针头清洗泵 (Prime Needle Wash) 打开真空脱气机打开真空脱气机 干灌注干灌注(Dry Prime) 湿灌注湿灌注(Wet Prime) 冲洗进样器冲洗进样器 (Purge Injector)日常操作第12页/共35

6、页第十二页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 依次打开依次打开LAC/ELAC/E采集服务器、采集服务器、26952695分离单元、所需检测器以分离单元、所需检测器以 及计算机的电源。仪器进行及计算机的电源。仪器进行5 5分钟自检后，出现以下画面分钟自检后，出现以下画面。仪器日常操作仪器日常操作开机第13页/共35页第十三页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL仪器日常操作仪器日常操作第14页/共35页第十四页，编辑于星

7、期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经0.450.45m m滤滤膜膜过滤，脱气应充分。过滤，脱气应充分。 必须确保必须确保6 6根管子全部插到溶剂瓶的底部。根管子全部插到溶剂瓶的底部。 准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（Seal WashSeal Wash）液体。）液体。 准备合适的灌注针头清洗泵（准备合适的灌注针头清洗泵（Needle WashNeedle Wash）液体。）液体。操作前准备仪器日常操作第15页

8、/共35页第十五页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL灌注柱塞密封清洗泵(Prime Seal Wash)仪器日常操作当首次使用或整个管路都已干燥时1.回到Menu 画面，选择Diag。2. 将注射器适配器连接到注射器。3. 移除密封清洗入口管路上的滤头。4. 将注射器装满清洗液，然后将注射器适配器连到密封清洗管路末端。5. 按Prime Seal Wash ，再按Start 。6. 推进注射器使清洗液进入系统。7. 当有溶剂从密封清洗废液管中流出时，按Halt。8. 重新安装滤头。9. 按Close返回。

9、注意事项：当更换溶液时，只需执行步骤1，5，7和9。第16页/共35页第十六页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL灌注针头清洗泵 (Prime Needle Wash)仪器日常操作注意事项：1 溶剂的选择：根据样品及流动相的化学特性来作选择。 2 若为浓度较高的样品需要较强的溶剂来清洗。 3 若样品对pH较敏感，应考虑洗针液的pH。第17页/共35页第十七页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL1. 按“Menu/Stat

10、us” 键，进入Status (1)画面。2. 利用方向键 将光标移至“Degasser”位置，按Enter。3. 利用上下键选择模式为ON，如下图所示。打开真空脱气机（Degasser）注意事项：在开启真空脱气机时，要确认所有溶剂管路都充满溶 剂；若没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime 操作。仪器日常操作第18页/共35页第十八页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL干灌注（干灌注（Dry prime）：）：系统第一次运行或系统中无溶液时进行。系统第一次运行或系统中无溶液时进行。1 将溶剂管路插入到相应

11、的容器。2 轻轻摇动滤头，以除去可能存在的气泡。3 将注射器连到灌注/排放阀。如图所示。4 逆时针旋转阀1/2圈，将其打开。5 按Status屏幕中的Direct Function键，选择Dry Prime，然后按Enter。6 在上述对话框中，选择要灌注的溶剂管路对应的屏幕键。如图所示。7 抽回注射器活塞以将溶剂抽出管路。仪器日常操作第19页/共35页第十九页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL湿灌注（Wet prime）：更换流动相；排除气泡；仪器闲置了一段时间。仪器日常操作注意事项：为避免损坏柱塞密封

12、，仅在流路中存在溶剂时执行湿灌注。若更换流动相与之前流动相不互溶，采用中间溶液过渡。以最低粘度的溶液开始湿灌注，以帮助清除管路中的空气。第20页/共35页第二十页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL执行湿灌注执行湿灌注1 在在“status”屏幕的屏幕的“Composition”字段中，为要用字段中，为要用于湿灌注的溶剂输入于湿灌注的溶剂输入“100%”。2 按按“Direct Function”键，选择键，选择“Wet Prime”，出现湿灌注对话，出现湿灌注对话框。框。3 按按“OK”，执行湿灌注。，执

13、行湿灌注。4 可根据实际情况重复灌注。可根据实际情况重复灌注。仪器日常操作第21页/共35页第二十一页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL冲洗自动进样器（冲洗自动进样器（Purge Injector） 更换为当前流动相更换为当前流动相 清除流路或注射器中的气泡清除流路或注射器中的气泡仪器日常操作第22页/共35页第二十二页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL仪器日常操作日常操作步骤选择合适溶剂 湿灌注清洗系统 Purge

14、 Injector实验操作 洗针 平衡系统 Purge Injector洗针 第23页/共35页第二十三页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL常见故障及维护保养常见故障及维护保养 流动相流动相 输液泵输液泵 进样系统进样系统 色谱柱色谱柱 检测器检测器仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第24页/共35页第二十四页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养流动相故障故障可能原

15、因可能原因排除排除基线噪声大；出毛刺基线噪声大；出毛刺脱气不充分脱气不充分充分脱气充分脱气泵压力不稳；流动相泵压力不稳；流动相供给不畅供给不畅流动相接近用完或滤流动相接近用完或滤头堵塞头堵塞用用HPLC试剂试剂/溶剂，溶剂，并使用并使用0.45m滤膜过滤膜过滤滤产生有规则噪声；基产生有规则噪声；基线上升；梯度洗脱出线上升；梯度洗脱出鬼峰鬼峰流动相被污染流动相被污染使用干净容器，确认使用干净容器，确认试剂未被污染试剂未被污染第25页/共35页第二十五页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL仪器维护保养仪器维护保

16、养输液泵输液泵故障故障可能原因可能原因排除排除打不出溶剂（缓冲盐流动相）打不出溶剂（缓冲盐流动相）球和阀座粘在一起，堵死球和阀座粘在一起，堵死用高质量不同极性溶剂用高质量不同极性溶剂冲洗；更换新单向阀。冲洗；更换新单向阀。压力和流速变化大压力和流速变化大球和阀座密封不严，压力球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中不稳，气泡进入阀中清除气泡：打开排液阀清除气泡：打开排液阀，用脱过气的甲醇大流，用脱过气的甲醇大流量冲洗，一般可解决问量冲洗，一般可解决问题。题。Wet Prime从泵头往外渗漏流动相，色谱从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变峰的保留时间会改变泵垫圈磨损或破碎泵垫圈磨损或破碎

17、更换新垫圈更换新垫圈柱塞杆磨损、漏液柱塞杆磨损、漏液使用不当被折断使用不当被折断被卡住，不能运动被卡住，不能运动正常损耗或安装不合适正常损耗或安装不合适更换新柱塞杆更换新柱塞杆第26页/共35页第二十六页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL注意事项注意事项 每天实验结束一定要认真冲洗泵每天实验结束一定要认真冲洗泵,减少密封垫损耗及堵塞。减少密封垫损耗及堵塞。 输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的,但有的垫圈适但有的垫圈适用于甲醇、水

18、、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。 注意流动相组分的互溶性，使用正确的注意流动相组分的互溶性，使用正确的Seal Wash 溶剂。溶剂。 必要时清洗单向阀：如果使用过缓冲盐溶液应使用必要时清洗单向阀：如果使用过缓冲盐溶液应使用40 50的温水超声的温水超声20min。如果使用过纯乙腈应使用异丙醇超声如果使用过纯乙腈应使用异丙醇超声20min。如果使用过其他流动相或上述两种。如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后应使用纯甲醇超声溶液超声后应使用纯甲醇超声20min。仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第27页/共35页第二十七页，编

19、辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL进样系统进样系统故障故障可能原因可能原因排除排除针弯、折断、抽不上针弯、折断、抽不上样、瓶破碎样、瓶破碎样品瓶不配套样品瓶不配套更换合适的样品瓶更换合适的样品瓶进样器针头堵塞进样器针头堵塞样品、缓冲样品、缓冲盐、隔垫碎片盐、隔垫碎片、针头本身、针头本身可用溶剂清洗，或换新针头可用溶剂清洗，或换新针头空白溶剂出色谱峰空白溶剂出色谱峰洗针未洗净洗针未洗净更换洗针液，或调整样品瓶更换洗针液，或调整样品瓶顺序顺序仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第28页/共35页第二十八页

20、，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL注意事项注意事项 每次批量进完样后手动清洗，或最后进一针每次批量进完样后手动清洗，或最后进一针50ul流动相，如果流动相中有盐的话则用纯流动相，如果流动相中有盐的话则用纯净水替代缓冲盐那部分比例。净水替代缓冲盐那部分比例。 打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出，注意保持样品仓内和样品盘清洁。打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出，注意保持样品仓内和样品盘清洁。 使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值。使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值。 注射器，样品瓶最好使用仪

21、器自配的，不要用其它仪器的。注射器，样品瓶最好使用仪器自配的，不要用其它仪器的。 仪器右侧的仪器右侧的Syringe要注意不能有气泡，一旦出现，应使用面板上的要注意不能有气泡，一旦出现，应使用面板上的Purge Injector功功能。能。 停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成样品交停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成样品交叉污染，硬件磨损或管路堵塞。叉污染，硬件磨损或管路堵塞。仪器常见故障及维护保养第29页/共35页第二十九页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL色谱柱色谱柱仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养第30页/共35页第三十页，编辑于星期日：七点 五十四分。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL注意事项注意事项 pH值范围。值范