PCR及其衍生技术学习课程

1、第1页/共87页第一页，编辑于星期六：十二点 十四分。第2页/共87页第二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第3页/共87页第三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第4页/共87页第四页，编辑于星期六：十二点 十四分。第5页/共87页第五页，编辑于星期六：十二点 十四分。第6页/共87页第六页，编辑于星期六：十二点 十四分。第7页/共87页第七页，编辑于星期六：十二点 十四分。第8页/共87页第八页，编辑于星期六：十二点 十四分。第9页/共87页第九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第10页/共87页第十页，编辑于星期六：十二点 十四分。第11页/共87页第十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。

2、第12页/共87页第十二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第13页/共87页第十三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第14页/共87页第十四页，编辑于星期六：十二点 十四分。第15页/共87页第十五页，编辑于星期六：十二点 十四分。第16页/共87页第十六页，编辑于星期六：十二点 十四分。第17页/共87页第十七页，编辑于星期六：十二点 十四分。第18页/共87页第十八页，编辑于星期六：十二点 十四分。第19页/共87页第十九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第20页/共87页第二十页，编辑于星期六：十二点 十四分。第21页/共87页第二十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。第22页/共87页

3、第二十二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第23页/共87页第二十三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第24页/共87页第二十四页，编辑于星期六：十二点 十四分。第25页/共87页第二十五页，编辑于星期六：十二点 十四分。第26页/共87页第二十六页，编辑于星期六：十二点 十四分。第27页/共87页第二十七页，编辑于星期六：十二点 十四分。第28页/共87页第二十八页，编辑于星期六：十二点 十四分。第29页/共87页第二十九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第30页/共87页第三十页，编辑于星期六：十二点 十四分。第31页/共87页第三十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。3第32页/共87页

4、第三十二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第33页/共87页第三十三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第34页/共87页第三十四页，编辑于星期六：十二点 十四分。第35页/共87页第三十五页，编辑于星期六：十二点 十四分。第36页/共87页第三十六页，编辑于星期六：十二点 十四分。第37页/共87页第三十七页，编辑于星期六：十二点 十四分。第38页/共87页第三十八页，编辑于星期六：十二点 十四分。第39页/共87页第三十九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第40页/共87页第四十页，编辑于星期六：十二点 十四分。第41页/共87页第四十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。第42页/共87页第

5、四十二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第43页/共87页第四十三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第44页/共87页第四十四页，编辑于星期六：十二点 十四分。第45页/共87页第四十五页，编辑于星期六：十二点 十四分。第46页/共87页第四十六页，编辑于星期六：十二点 十四分。第47页/共87页第四十七页，编辑于星期六：十二点 十四分。第48页/共87页第四十八页，编辑于星期六：十二点 十四分。第49页/共87页第四十九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第50页/共87页第五十页，编辑于星期六：十二点 十四分。第51页/共87页第五十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。第52页/共87页第五

6、十二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第53页/共87页第五十三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第54页/共87页第五十四页，编辑于星期六：十二点 十四分。第55页/共87页第五十五页，编辑于星期六：十二点 十四分。第56页/共87页第五十六页，编辑于星期六：十二点 十四分。第57页/共87页第五十七页，编辑于星期六：十二点 十四分。第58页/共87页第五十八页，编辑于星期六：十二点 十四分。第59页/共87页第五十九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第60页/共87页第六十页，编辑于星期六：十二点 十四分。第61页/共87页第六十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。第62页/共87页第六十

7、二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第63页/共87页第六十三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第64页/共87页第六十四页，编辑于星期六：十二点 十四分。（1）反向PCR技术(Inverse PCR, IPCR)：（2）锚定PCR技术(Anchored PCR, APCR)：（ 3）不对称PCR技术(asymmetric PCR)：（ 4）反转录PCR技术(reverse transcription PCR, RT-PCR)：（5）巢式PCR技术(NEST-PCR)：（6）多重PCR技术(multiplex PCR)：（7）重组PCR技术：（8）原位PCR技术： （9）荧光定量实时PCR技术

8、 技术 第65页/共87页第六十五页，编辑于星期六：十二点 十四分。（1）反向PCR技术(Inverse PCR, IPCR)：反向PCR是克隆已知序列旁侧序列的一种方法。一种在已知序列中无 切点的限制性内切酶消化基因组DNA。酶切片段自身环化。以环化的DNA作为模板，用一对与已知序列两端特异性结合的引物，扩增夹在中间的未知序列。 扩增产物是线性的DNA片段，大小取决于上述限制性内切酶在已知基闲侧翼DNA序列内部的酶切位点分布情况。用不同的限制性内切酶消化，可以得到大小不同的模板DNA，再通过反向PCR获得未知片段 。第66页/共87页第六十六页，编辑于星期六：十二点 十四分。cDNA末端快速

9、扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE） 通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5和3端，包括单边PCR和锚定PCR。1.基于蛋白质保守性的兼并引物的设计及基于蛋白质保守性的兼并引物的设计及ORF保守区保守区RT-PCR克隆；克隆；2. 3-RACE3. 5-RACE第67页/共87页第六十七页，编辑于星期六：十二点 十四分。1.基于蛋白质保守性的兼并引物的设计及ORF保守区RT-PCR克隆；利用ncbi搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列因为密码子的关系，不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的，所

10、以氨基酸序列才是真正保守的。 对所找到的序列进行多序列对。 确定合适的保守区域 设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域，且两个保守区域相距50 400个aa为宜，使得pcr产物在1501200bp之间，最重要的是每一个保守区域至少有6个aa残基，因为每条引物至少18bp左右。利用软件设计引物 RAG，YCT，MAC，KGT，SCG，W AT，H ACT，B CGT，ACG， DA/G /T,N=ACG/T密码子的兼并性氨基酸密码子数、第68页/共87页第六十八页，编辑于星期六：十二点 十四分。第69页/共87页第六十九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第70页/共87页第七十页，编辑于星期

11、六：十二点 十四分。第71页/共87页第七十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。第72页/共87页第七十二页，编辑于星期六：十二点 十四分。第73页/共87页第七十三页，编辑于星期六：十二点 十四分。第74页/共87页第七十四页，编辑于星期六：十二点 十四分。第75页/共87页第七十五页，编辑于星期六：十二点 十四分。第76页/共87页第七十六页，编辑于星期六：十二点 十四分。第77页/共87页第七十七页，编辑于星期六：十二点 十四分。第78页/共87页第七十八页，编辑于星期六：十二点 十四分。Ct值的确定 第79页/共87页第七十九页，编辑于星期六：十二点 十四分。第80页/共87页第八十页，编辑于星期六：十二点 十四分。第81页/共87页第八十一页，编辑于星期六：十二点 十四分。第82页/共87页第八十二页，编辑于