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文档简介
1、普通电泳的原理 生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。 在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移景象即所谓电泳。 电泳的样品支持物,生物实验大多为凝胶。普通电泳设备组成电泳仪 + 电泳槽普通电泳槽分三种:程度电泳垂直电泳转移电泳程度电泳 用琼脂糖凝胶作支持物的电泳法。借助琼脂糖凝胶的分子筛作用,核酸片段因其分子量或分子外形不同,电泳挪动速度有差别而分别。 是基因操作中常用的重要方法。程度电泳槽图片垂直电泳 作用:用于分别蛋白质和寡糖核苷酸。 作
2、用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状构造,具有分子筛效应。它有两种方式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE;非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质可以坚持完好形状,并根据蛋白质的分子量大小、蛋白质的外形及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。垂直电泳槽图片湿转电泳 将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分别后,转移至固相膜上,再用标志的抗体别后,转移至固相膜上,再用标志的抗体或二抗与之反响,以显示膜上特定的蛋白或二抗与之反响,以显示膜上特定的蛋白条带。条带。 整个电泳过程完全浸在缓冲液中完成的称整个电泳过程完全浸在缓冲液中完成的称为湿转电泳为
3、湿转电泳湿转电泳槽图片半干转电泳 将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分别后,转移至固相膜上,再用标志的抗体别后,转移至固相膜上,再用标志的抗体或二抗与之反响,以显示膜上特定的蛋白或二抗与之反响,以显示膜上特定的蛋白条带。条带。 膜和滤纸均为浸湿而非整个电泳过程完全膜和滤纸均为浸湿而非整个电泳过程完全浸在缓冲液中完成的称为半干转电泳浸在缓冲液中完成的称为半干转电泳半干转电泳槽图片安全盖 带有弹簧锁的负电极装置 滤纸 凝胶 膜 滤纸 带弹簧的正电极平台固定于 4 个固定栓上 电缆 底座普通电泳仪大体分三种根底电泳仪高电流电泳仪高电压电泳仪根底电泳仪 参数:普通电压为几百伏特,电流为几百毫安。 运用:主要用于程度电泳、垂直电泳、湿转电泳高电流电泳仪 参数:普通电压为几百伏特,电流为几千毫安。 运用:主要运用于程度电泳、垂直电泳、湿转电泳、半干转电泳高电压电泳仪 参数:普通电压为几千伏特,电流为几百
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