好氧反硝化细菌培养基配制

1、好氧反硝化细菌培养基配制以及实验方法一、好氧反硝化培养基（液体）醋酸钠/ 0.5 g ; KNO3 / 0.1 g ; K2HPO 4 / 0.01g ;MgCl 2 / 0. 02 g ;CaCl 2 / 0. 01g ; H2O/ 1 000 ml ;p H 77. 5.好氧反硝化培养基（固体）醋酸钠/ 0.5g ; KNO3/ 0.05g ; Na2 HPO 4 .7H 2 O/ 0. 5 g ;NaNO 2/0.01g;MgSO 4 ·7H 2 O/ 0. 1 g ; 琼脂 18 g ;p H 77. 5.富集分离：取样品泥样置于上述液体培养基中，经过每天24 小时曝气富集

2、10 天。之后，取 1毫升底泥与 10 毫升去离子水混合，之后进行10 7 倍稀释，在上述固体培养基上进行平板划线分离。细菌初筛： 将分离得到的细菌接种到上述液体培养基中，然后在30 摄氏度环境下进行 24 小时的摇瓶培养，用紫外分光光度法检测硝态氮含量，重复 2次，取降低最多的样品继续进行平板划线，再重复上述操作，得到单一菌落。（验证所得菌落是否单一：将所得菌落接种在牛肉膏蛋白胨培养基上，进行无菌培养，检测菌落是否单一。）细菌复筛：将初筛得到的单一菌落，进行实际污水测试，测试其实际降解硝态氮的能力。二、 BTB 初筛培养基 ：琼脂 20 g 、 KNO3 1 g 、KH2PO41 g 、 F

3、eCl2 ·6H2O 0.5 g 、 CaCl2 ·7H2O 0.2 g 、MgSO4·7H2 O 1 g 、琥珀酸钠 8.5 g 、溴百里酚蓝1 / 3(BTB)(1% 乙醇溶液 )1 mL ，用 1 mol/L 的 NaOH 调节pH 至 7.0 7.3 ，121 灭菌 20 minLB 液体培养基 (/L) ：KNO3 1 g 、 KH2 PO41 g 、FeCl2·6H2O 0.05 g 、CaCl2·7H2 O 0.02 g 、MgSO4 ·7H2O 1 g 、琥珀酸钠 8.5 g ， 121 灭菌 20 minDM 反硝化

4、培养基 (/L) ：KNO 3 0.72 g 、KH 2 PO4 1g 、MgSO 4 ·7H 2 O 1 g 、琥珀酸钠 2.8 g ，121 灭菌20 min采用梯度稀释法 将污泥样品稀释至适当浓度，取0.1 mL 均匀涂布于 BTB 培养基表面，置入恒温培养箱，30 下培养 2 3 d 后，用接种环挑取使周围培养基出现蓝色晕圈的单菌落，进行分离纯化即为初筛菌株。接种初筛菌株至LB 培养基，在 30 、 160 r/min条件下进行液体培养 24 h 后，以 10% 的接种量接种到反硝化培养基 (DM 培养基 )中， 30 、 160 r/min条件下进行摇瓶发酵，间隔一定时间取

5、样。测定发酵液中硝基氮浓度(NO-3-N)和亚硝基氮浓度 (NO-2-N) ，通过分析其 NO3-N和TIN(NO-N+NO-2 -N)去除率，考察所筛菌株的反硝化性能。 NO-3 -N：用紫外分光光度法测定；NO-2 -N：用 N-(1- 萘基 )-乙二胺分光光度法测定 4 。菌体量：光密度法，用721 型分光光度计在 600nm 处测定吸光度值。微量元素溶液 :EDTA(乙二胺四乙酸) 50.0 g ,ZnSO 4 2.2 g , CaCl 2 5.5 g , MnCl2· 4H2O 5.06 g , FeSO42 / 3·7H 2 O 5.0 g , CuSO 4 · 5H2O .157 g , CoCl 2