转化生长因子β1在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

1、转化生长因子b 1在食管鳞癌组织中的表达及临床意义摘耍日的通过检测食管鳞癌组织标本及癌旁正常组织标木中转化生长因子bl (tgf-p1)的水平，探讨tgf-b 1与食管鳞癌发生发展之间的关系。方法 收集2009年9月2011年10月沈阳医学院奉天医院胸外科39例食管鳞癌组织标木及癌旁正常组织标木,用逆转录聚合酶链反应的方法对标本进行检测，比较食管鳞癌组织及癌旁正常组织tgf-b1 信使rnactgf- b 1 mrna)的表达水平。结果食管鳞癌组织中tgf- 3 1 mrna 水平(0.76±0.09)显著高于癌旁正常组织(0.23±005)；而随着病理分期iiii期tgf

2、-0 1 mrna水平逐渐增高(i期：0. 52±0. 06； ii期： 0. 73±0. 03； iii期：092±0.05)。有淋巴结转移组的tgf- p 1 mrna水平(0.91±0. 06)显著高于无淋巴结转移组(0.55±0.08)。随着肿瘤细胞 局部浸润深度增加，tgf- p 1 mrna水平逐渐增高(t1： 0. 53±0. 03； t2： 0.69±0. 05； t3： 0.93土0.03)。结论tgfb1水平的增高与食管鳞癌的 发生发展关系密切。关键词转化生长因子b1；逆转录聚合酶链反应；食管鳞癌；病理特

3、征中图分类号r735. 1 文献标识码a 文章编号1673-7210 (2013)06 (b) -0025-03转化生长因子 b (transforming growth factor, tgf- p )是一类多 功能的多肽类细胞生长因子，儿乎体内的每个细胞都产生tgf-0并存在其 受体，参与调节细胞的生长、分化、形态发生及凋亡1。目前在人类中, 发现冇tgf-bl、tgf-0 2、tgf- 3 3三个亚型，tgf- 3 1作为tgf-b超家 族的一个重要成员，已被证实在细胞的生长与分化、细胞外基质（ecm） 的合成与沉淀、血管的生成及细胞凋亡中起重要作用。在肿瘤的发生发展 过程中，tgf-0

4、 1能诱导c-sis的表达，但抑制c-myc的表达，tgf- p 1 具有双相调节作用：在肿瘤早期，抑制肿瘤细胞的生长；在肿瘤的中晚期, 它成为肿瘤牛长的刺激因子。多年來，tgf-b仍是肿瘤领域研究的热点之 一，研究发现tgf-p 1作为一类具有多种生物学活性的细胞因子，参与了 肿瘤的发生、进展和转移的各个环节并起到重要作用2。tgf-b 1在食管 鳞癌的研究中尚不多见，本研究对tgf-b 1在食管鳞癌组织中的表达与食 管鳞癌的临床分期、淋巴转移、肿瘤浸润深度的关系进行相关探讨，从而 进一步明确tgf-b 1在食管鳞癌的发牛发展过程具有重要作用。1对象与方法1. 1研究对象收集2009年9月2

5、011年10月沈阳医学院奉夭医院胸外科食管鳞癌 标本共39例，其中包括癌组织上、下58 cm的正常组织，手术切除后 30 min内置于液氮屮保存。所冇病例术前均未发现冇远处转移，未行放疗、 化疗，术后均有病理证实。39例病例中男25例，女14例；250岁者26 例，50岁者13例，年龄3871岁，平均56.4岁；术后病理均为食管鳞 癌；tnm分期i期6例，ii期21例，iii期12例;其中23例有淋巴结转移。分期标准依照食管鳞癌ajcc指南中的食管鳞癌tnm分期标准划分。组织分化程度：高分化9例，中分化13例，低分化17例。1.2方法 1. 2. 1 rna的提取 食管鳞癌组织与癌旁正常组织分

6、别取100 mg,加入1 mb trizol,组织匀浆器将组织匀浆，室温保持5 min使组织充分裂 解，加入0. 2 ml氯仿充分振荡15 s,室温保持3 min, 12 000 r/min, 4°c 离心15 min,轻取最上层无色水相，加入0. 5 ml异丙醇室温保持10 min, 12 000 r/min, 4°c离心 lomin,弃上清，加入 75%乙醇 1 ml, 12 000 r/min, 4°c离心10 min,弃上清，室温干燥510 min,将沉淀溶于适量depc水 中，测0d260/0d280及rna浓度，分装，-80°c冰箱中保存。1

7、. 2. 2反转录及pcr扩增 反转录体系如下：5 xprimescript buffer2 共4 p l, primescript rt enzyme mix i 1 u l, rt primer mixl,总 mrna 10 l,加 rnase free d h20 至 20 u lo 反转录条件:37°c15 min, 85°c5 s, 4°c ,反转录产物于-20°c保存。试剂：rnasefreedh2017. 5 ul,10xpcr buffer 2. 5 p l, dntp 1. 5 u l, tgf-p 1上游引物0.5 ul,tgf-b

8、1下游引物0.5 pl, taq e 0. 5 u l反转录pcr产物2 ul,总体积25 ulo pcr反应条件为：95°c变性2 min, 94°c 1 min, 55°c 1 min, 72 °c 90s,循环 30 个周期，最后于 72°c 延伸 10 min。tgf-bl 上游引物:5'-gccctggacaccaactatgct-3'； tgf-b 1 下游引物：5'-aggctccaaatgtaggggcagg-3',扩增片段长度为 161 bp；内参 p-actin上游引物： 5'-gtg

9、ggccggtgtaggcacca-3'；下游引物： 5'-ggttggcctagggttcagg-3',扩增片段长度为 246 bp。1.2.3琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物取10 ulpcr产物进行2%琼脂 糖凝胶电泳，凝胶经uvp凝胶成像分析系统进行扫描分析。tgf- 3 1 mrna 相对表达水平计算公式如下：某样品tgf- p 1 mrna相对表达水平二样品 tgf- 0 1扫描值/样甜b -actin扫描值。1.3统计学方法采用统计软件spss 15.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数 土标准差（x土s）表示，采用t检验。计数资料以率表示，采用x 2检验

10、。 以p 2结果2. 1食管鳞癌组织及癌旁正常组织tgf- 0 1 mrna的表达水平在39例食管鳞癌标木中，各期食管鳞癌组织中tgf-bl mrna水平均 显著高于癌旁正常组织（p < 0.01）o见表1。2.2不同分期食管鳞癌组织中tgb-0 1 mrna的表达水平随着病理分期iiii期的增加，tgf-b 1 mrna表达水平逐渐增高（p <0. 05）,见表 2。2. 3不同病理特征的食管鳞癌患者tgf-b 1 mrna的表达水平比较不同年龄及不同组织分化程度的食管鳞癌组织中的tgf-bl mrna水 平无显著差异（p > 0. 05）o有淋巴结转移组的tgf- p 1

11、 mrna水平显著高 于无淋巴结转移组（p < 0.01）o在肿瘤细胞局部浸润深度中，t2组食管 鳞癌组织屮的tgf- 3 1 mrna水平显著高于t1组（p < 0.01）,同时t3组 食管鳞癌组织中的tgf-b 1 mrna水平显著高于t2组（p 0.01）。在国 际抗癌联盟中的食管鳞癌标准划分中t1代表肿瘤浸润固有层或黏膜下层; t2代表肿瘤浸润肌层；t3代表肿瘤浸润外膜。见表2。3讨论tgf-0是由两个结构相同或相近的、分子量为12 500的亚单位借二 硫键连接的双体。每个亚基由112个氨基酸组成，这112氨基酸残基是由 含400氨基酸残基的前体份子(per-pro-tgf

12、- b )从竣基端裂解而来。tgf- b在人体内存在三种亚型，分别为tgf-b 1、tgf-b 2、tgf-b 3,其中tgf- b1是人体内的主要存在形式。tgf-p的受体亦有3种亚型：tbri、t brii、tpriil tgf-3通过磷酸化smads启动细胞信号传导，发挥重要 作用3。tgf-p受体-细胞内信号因子-基因表达-细胞生长抑制、分化或 调亡，这一通路中的任何一个环节异常都将导致细胞异常增殖4-5 o一些研究显示，tgf-b与肿瘤发生发展有着密切的关系，并且对肿瘤 细胞的生长具有抑制和促进双重生物学效应6。首先，tgf-b对早期肿 瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。tgf- 0信

13、号的肿瘤抑制作用源自其诱 导多个基因表达的能力，这些基因参与抑制细胞增殖、诱导凋亡、激活自 噬、通过基质成纤维细胞抑制生长因子的信号、抑制炎症，以及抑制血管 生成。这些作用维持了正常组织内的动态平衡，防止肿瘤形成的早期阶段: tgf-b可在转录及转录后水平抑制原癌基因c-myc的表达，使细胞生长 停滞于g1期或延长g1期7-9；tgf-i3通过抑癌基因p53通路对肿瘤 的早期形成具有明显的阻抑作用10；tgf-p对周期蛋白依赖性激酶 (cyclin dependent kinases, cdk)及周期蛋白发挥抑制作用。cdk和周 期蛋白是完成细胞生长周期所必需的11。综上所述，tgf-p可能是

14、肿瘤 早期发生的一个重要的保护性标志物12-13。但是本实验中所得到的食 管鳞癌组织标本多來源于中晚期肿瘤，故上述情况本实验中并未涉及。同时，由于tgf-p对肿瘤发生发展的作用很复杂，因此一些研究也揭 示了 tgf-b对一些恶性肿瘤的发展起到促进作用。massague等11研究 显示tgf- b能抑制t和b淋巴细胞增殖分化，抑制nk细胞和单核细胞的 杀伤活性，抑制免疫球蛋白合成，拮抗儿-2、tnf等免疫调节因子的作用, 使肿瘤细胞逃避机体“免疫监视”；tgf-b还可以增加瘤细胞与细胞外基 质相互作用，促进肿瘤细胞的浸润；诱导表达vegf,对促进肿瘤血管生成 方面有重要作用，从而促进肿瘤细胞的转

15、移。研究证实在乳腺癌中，高水 平的tgf-p 1可以促进英浸润与转移14。本研究结果显示，各期食管鳞 癌的tgf-bl mrna水平显著高于癌旁正常组织；也有文献报道，tgf- p 在前列腺癌15,大肠癌16,乳腺癌14等恶性肿瘤中过度表达;并且 本研究中还发现，随着肿瘤浸润深度的增加，tgf- p 1 mrna水平也随着增 高；同时，有淋巴结转移的食管鳞癌组织中tgf-bl mrna水平也显著高 于无淋巴结转移的食管鳞癌组织；而不同年龄及不同分化程度的食管鳞癌 组织屮的tgf-bl mrna水平无显著差异。这一结果显示，在食管鳞癌组 织中，肿瘤细胞的浸润与转移和tgf- b 1 mrna有关

16、。tgf- p 1与肿瘤的侵 袭转移相关性在大肠癌己经得到证实17。综合国内外研究与本实验结 果，食管鳞癌的发生发展与tgf- 0 1的表达有关，即tgf- 0的增高是促使 食管鳞癌发生的一个重要因素18；同时tgf-b与食管鳞癌的浸润和转移 也密切相关。目前国内外对tgf-b已有相关研究，但是涉及tgf-p 1在食管鳞癌组 织中的表达与病理分级、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴转移的关系的研 究相对较少19。本研究分别针对不同病理分级、临床分期、肿瘤浸润深 度、淋巴转移的食管鳞癌标木tgf- p 1 mrna水平进行检测，得出结论: tgf-b 1在食管鳞癌的发生、进展与转移过程中有发挥重要的作

17、用。但是, tgf-b1在肿瘤发展过程中的作用及机制尚没有完全明确，对于不同类型 的肿瘤甚至不同的瘤细胞株而言，tgf-3 1可能发挥不同甚至相反的生物 学效应，有待进一步研究。而随着肿瘤免疫学和生物基因工程的发展，随 着人们对转tgf-b 1不断认识，这将为人们有效防治肿瘤提供一条新的途 径。参考文献1 blobc gc, schicmann wp, lodish hf. role of transforminggrowth factor in human diseasej n engl j med, 2000,342 (18)：1350-1358.2 齐同谦.转化生长因子0与肿瘤关系研究进

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