黑果腺肋花楸提取物的急性毒性和致突变性研究

1、黑果腺肋花楸提取 物的急性毒性和 致突变性研究贵超培.草炸抱,张陆娟.王彦武，何励，傅伟忠（西壮族自治区疾病值防控制中心.广西南宁 5300281study on acute toxicity and mutagenicity of aronia melanocarpa extract in micehuang qin huiyan. zhang lujuan.wang yanwu. he u. fu weixhong(giiangi otilrr for disraw l*nrvrfiti<»n and (nnlrcil.nanning 530028, guangxi. ch

2、ina)【摘要】目的：检测黑果快舫花袱提取物的急性以性和潜在的致突变件 方法：小m按20内部w绐予黑果ar的花楸提取物溶液. 其急性经口养性；采j j细茴。突处；小kutwhuk微核孔厂暗形试裁临其致突知 结果：住给予20爽的黑果腺助花楸提取加原花有本的浓度为s58 mqkq后.小只未出现中存体征和死亡；在加&不加&混合液的条件卜l 8. 40. 200. i <x)0. 5 000 ug/ils个浓度组的4种俩株的i研址突变浦落欢与自发厄i夏突变演落数相近mr伍均小于2; 2.5、5、10 gag 3个浓度组的微核隼和桁子略形率。阴性对照组的接异均无统计学住义(3.05

3、)结论：在本实轮条件下.未发现黑果吸助花秋提 取物对实技动物村急性经口毒性和致突变作川【关键词】热果腺肋花楸；授取物；急性卷性；致突变性中图分类号：k994.4文楸标志码：a文章第号:1abstract objective： to <lrtrrminc acute toxicity an<l rnutagrnirity of aronia mclanocar/m extract. methods： tht? aronia melanoca/)a extract solution wan given omlly to mice with a <!ose nf 20 g/kg t

4、o determine iu acute oral toxicity, in addition v mutagenicity was assessed by a bacterial rvversc nuitaticm asay, micronucleus test an<l sperm sha|>e abnormality test. results： the oral inaxiinmn tolemte<l dose (mtd) w aronia mclanocarj»a extract in mice wa» morv than 20 g/kg. no

5、 incrram* in the numl>rr of rvvrrtant c-olonir* xvas found in the baclerial reverse mutation asay with or wilhchit mixture in 8. 40. 200. 1 000. 5 00() p.g/ platr of aronia mclanocariht extract. tlir micronuclrus rulr» ami sperm cihimirmalily rale* in 2.5, 5, 10 g/kg dose were not significan

6、tly different from the negative control. conclusion： this aronia melanocarpa extract showed no acute oral toxicity and nor mutagenicity in mice.key words aronia melanocarpa: extract; acute toxicily: mutagenicity收福日期：20xx-<»«-23：修订日期：202x-11-10金工程：广bbs究与技1wfl nog 1598025-241作者管息：黄超培.e-ma

7、il: gpibcp&l63.r（）m黑果腺肋花（aronia melanocarpa）是一种需赧科 灌木,因具有较高的经济和生态价值.二十多年前从 国外陆续引进我国种植,其果实含有丰富的营养和生 物活性成分，具有较强的抗氧化.消炎,抗菌等功 效g,已被用于食品、保健品、化装品等产品具 有很好的应用前或近年来对黑果腺肋花愀果提取 物的成分及活性物的成效作用研究比拟多.而对它的 毒性方面那么少见报道.本文依据食品平安性毒理学评 价程序和方法对其进行急性推性及致突变性研究，为 对黑果腺助花楸提取物的平安性进行评价及后期的相关产品研究开发提供实验依据。1材料与方法1.1受试物黑果腺助花楸果提

8、取物溶液，其主要成效成分为 原花音素（含扯为2.79%）.拟用于功能性保健食品.由 山西某科技公司生产。1.2实验动物及饲养环境spf级健庶成年昆明种小礼由广西医科大学实 验动物中心繁勉，实捻动物生产许凹证号scxk（桂）20xx-0002,质妆合格证号45000300000854、4500030 0000864动物饲料由广东省医学实验动物中心生产， 生产许可证号scxki蚪）20xx-ooo2,质址合格证编号 44200300016584动物房为屏障系统使用许可证号 syxk（桂）20xx-0002,动物实乳室温度为22 25无 相对湿度为55啜70% =1.3试验菌株鼠伤寒沙门氏苗组钮酸缺

9、陷型ta97a、ta98、 tai00. ta102四种菌株.购于关国mol/iox公司 1.4实骑方法刘急性经口毒性试验 采用鼠大耐受量试验法. 选取体质fit为18-22 g的昆明种成年小鼠20只.雌. 维性各10只，试验前禁食16 h,不限饮水“采用最大 给药fit法，按0.02 m【处给小鼠潮胃黑果腺肋花愀果 提取物溶液1次，浓度为20 原花百素的浓度为 558 mg/kg）.灌宵后观察记录小鼠的中毒表现,观 察14 d,以半数致死剂扯（median lethal dose. ldq评 价受试物的急性毒性强弱'细菌回复突变试验采用经鉴定符合要求的副 伤塞沙门氏菌组氛酸缺陷sjt

10、ag ta98、ta100、 ta102四种试胎i省株，设8、40 . 200. 1 000 . 5 000 御皿5个浓度组,同时设自发回变对照、溶剂对照和 阳性诱变剂对照自发i可变对照不加受试物.其余条 件相同：采用平板掺入法.将试捻凿株站菌液0.1 血、受试溶液0.1 mb,代谢活化组再参加10% &混 合液0.5 ml,依次参加保温的顶层培养基试管内，混 匀后倒入底层堵养基平板上，迅速灼匀铀升。每个浓 度组的镖种菌株做3个平行11il.在37无恒派培养48 h.计数每皿的回变雇落数"计算各浓度组平均回变 的落数与自发回变凿落数的比值（mutoion ratio. mr）

11、.以存在浓度-反响关系者为阳性结果 攻复试验1次。骨此细胞微核试脸 设2.5、5、10 g/kg 3个浓 度组,网时设阴性（溶剂）对照和环磷醛胺 （cyclq）hosphami（lc» ctx）阳性对照.每组 10 只 25-30 g的昆明种成年小此flfi雄性各5只。按0.02 mug 给小鼠岫受试物2次（间隔24 h）.于末次给受试物 后6 h处死小鼠，取胸骨骨髓制片，甲醇固定， cisy染色，在油傥下观察每只小m的1 000个嗜多 染红细胞（rce）,计数含微核的细胞数，计算微核细胞 率 同时计数200个爆多染红细胞.计算唁多染红细 胞与成熟红细胞的比仙pce/nce）。精子畸

12、形试验剂航及对照组设计同1.4.3 项.每组10只25-35 x的昆明种成年雄性小鼠，每天 灌胃绐受试物1次.连续5 .1,于末次给受试物后第 30天处死动物，解剖取出两例附糜，置生理盐水中轻 轻将其撕裂、摇晃，过滤取精子制片.伊红染色，在 高倍镜下观察每只小鼠的1 000个完粮精子,计算佑 子畸形率。1.5统计学方法实验动物的体质i.l 落数、微核细胞率、pcej nce及精广畸形率等指标的统计结果以表示 骨 冠细胞微核试松各组间的微核细胞率的均数比拟采用 poisson分布的近似正态法进行统计分析.析子畸形试 验各组间的桁子畸形率的均数比拟采用v检捻进行统 计分析n2结果2.1急性经口市性

13、试哈给予黑果腺肋花楸提取物溶液14 d内,未发现小 鼠有中毒体征和死亡.小融的逃食和饮水未见异常. 小凯的体质狼增长未受到明显影响.见表1。观察期 结束解剖小鼠.肉眼观察心脏、肺脏、肝脏、骨脏、 啤脏、胰腺、紧丸、卵巢及胃肠等主要器官组织未见 异常由此可见，诙受试物对小鼠的急性经口莓性 ldm大于 20 g/kg：表1 ib朱妹助花做搓段物对小m的总性毒性试瞪结果（穴10）ttm浓度tftm/g第7天 豚财弟】4天体死亡 动物数/只2020.4" .226.9±i332.0±130202o.o±i.o25.4±l.229.8±1302

14、.2细菌回复突变试验细前恒】复突变试验的结果见表2.在参加或不加 人&代谢活化系统.黑果踪助花械提垠物各浓度组和 阴性对照的4种试验菌株的回变菌落数与自发回变菌 落数相接近，mr （ft均小于2,旦不存在浓度反响关*2浆果复突支试吟结果ta97a t.n8 ta 100 ta 10231m-s冬-s-s»st冬黑家®u山让射梃取物5 000叩皿0.960.950.930.771.231.00l.瞒0.921 000 ."ill0.750.971.050.851.070.931.000.9s200 叩100.890.861.100.911.061.10l.l

15、l1.0240御m0.921.041.170.981.27i.oel.ll0.958岫0.960.930jj21.021.050.920.991.00阴性对fflifli0.910.96100.911.14o.«21.02o.hsmnwhffl*18.67 12.4221.12 17363.232.99阳性“娜物及水度：ta97"§、ta984s,. ta100*sj|j(10 wl)i ta始&采川耍毛宓约6 m/n)t ta/.&. ta102&采will)； tai0o-s.采用袂刘钠(1.5 im/ltti; taio24-s.xm

16、j1. 8二孙华虑ffiwo np/ulk系，而各ml性对照物均可诱发测试曲株的回复突变菌 数明显增高，mr值2.99-133.64,说明该受试物未呈 现诱发测试菌株的问夏突变效应,重复试验的结果 一双2.3骨船细胞微核试验骨偷细胞微核试驶的结果见表3,黑果腺肋花袱 提取物各剂址组的微核率及pce7nce值与阴性对照组 接近，差异无统计学意义(p>0.05),各剂址组的pce/ nceffi均不少于阴性对照组的20w ,而ctx用性对照 组的微核率那么显著高t阴性对照ffl(p<0.01).提示未 见该受试物对小鼠的fhb细胞有损伤和抑制作肌表3提取所对小i*督核发生率的影响(k1

17、cd黑梁版的花楸提取物pcivnceio奶kixi(riis |a占1x10,131.3±0.51.120±0.0492.5火ixicr13l-3t0.5i.ii2±0.050明性对照坦ixlo*13l.3±0.7liib1o.o42crx 40 nigixlo125625.6±2.9-0.978*0.035:务tfl的就.wftbupil的试检染无3将性左弃.故淅雄堆性叫的数据合并渤了统计与网性对ami比拟,*1)0.2.4精子畸形试哈精子畸形试验的结果见表4.黑果服肋花楸提取 物各削fit组的牺子畸形率与阴性对照组接近.差异无 统计学意义(

18、3.05),而ctx阳性对照组的精子畸形 率那么显假设高于阴性对照组俨<0.01),提示未见该受试 物对雄性小鼠的崎子产生畸变作用。袤4焦果萨新花橄提取物对小就精子»形发生率的彩峨(0=10)也m受栓精于数，个» 形 m-ffta个形*燃果股m住楸提取物10 kaf1x10*1761.76 如 85火ixi(r17925小区1x10*164i.m±0.20切性对!ffl如ixi(r176cfx 40 inkpixlo*507s.o7±o.37“与明性甘kha比拟.-p<0.01.3讨论黑果踪助花揪被引进我国种植的时间不长.迄今 未见有中毒报道

19、，现有文献尚无黑果腺肋花楸果实、 果汁和提取物的任何有害和崎性作用的数据，但是 黑果腺肋花楸提取物基用化学溶剂乙毋(7欢浓度)进行 提取，再经过滤、浓缩和枯燥获得的,除了含原花背 素外.还含有多筋、黄湖等多种成分.在迎行生产和 推向市场之前i为了平安起见.对其进行推理学平安 性评价是必要的:本研究检测黑果腺肋花楸捉取物的急性毒性，并 联合体外细茜【可复突变试.怆与喃乳动物体内骨对细胞 微核试骚和楮子畸形试毂，分别检测基因水平、体细 胞染色体及生殖细胞基因的损伤作用.对其潜在的致 突变性进行检测试捡结果.在给予黑果服肋花楸提 取物后.小鼠未出现中毒体征和死亡.急性经口推 性l腿大于20 g/kg

20、(原花育索的浓度为558 mg/kg),按 照我国的食品急性毒性(ld姑分级标准评价,该提取物 的急性经口毒性烦于无毒级；在体外细苗问岌突变试 蛎参加和不参加&代谢活化系统两种条件下，黑果 眼助花楸提取物8、40 . 200. 1 000 . 5 000 jig/dil 5 个浓度组的4种试典阕株的回变菌落数与自发回变的 菌落数相接近,mr值均小于2,实验结果为阴性;在 岫乳动物体内，黑果腺肋花楸提取物2.5、5、10 g/kg 3个浓度组的微核率、pce/nce值和赣畤形 率.与阴性对照组比拟均无显著性差异,说明未对小 m的骨髓细胞有损伤和抑制作用.也未对慌性小鼠的 精子产生畸变作用。从以上结果来看.未发现黑果腺 助花楸提取物有急性毒性和致突变性作用,初步认为 黑果腺助花楸提取物具存一定的平安性，w以开展后 续的毒理学试收以便对其进行更全面的平安性评价 但是，本研究只进行了体外细沏可复突变试脸和选用 了一种啮齿类动物进行体内试捡.未选用非嘀齿类动 物进行试驶.同时仅用成年