生化实验（小课时）

1、一、蛋白质电泳实验复习题1电泳技术涉及其主要仪器或设备有哪些？2. 电泳试验中，点样量的多少对分离结果可能会产生怎样的影响？3. 电极缓冲液及载体（醋酸纤维膜或凝胶）的ph值与缓冲能力对蛋白质分 离是否会产生影响？简单讨论。4. 商用的醋酸纤维薄膜（2x6cm）在点样之前应该进行怎样的前处理？5. 醋酸纤维膜电泳分离人血清蛋白过程中所用的电极缓冲液是什么？该缓 冲液的ph值是多大？如果该缓冲液的ph如果是12.0或者是4.0,可能会对人 血清蛋白质电泳结果产生怎样的影响？6. 醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，电压正常范围是多大？电压 过大会造成什么样的结果？7.醋酸纤维薄膜电泳分离人血清

2、实验方法中，染色液成分是什么？氨基黑8. 醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，透明液成分是什么？冰醋酸：无水乙醇25： 759. 如果样品液中含有三种蛋白质a、b、c,它们的等电点和分子量分别是 mra： 36kd, pia： 5.2； mrb： 60kd, pib： 6.5； mrc： 28kd, plc： 4.7。在 ph&6, 静电场80v条件下，经过40min钟电泳，染色脱色后，从阳极到阴极的排列顺 序如何？10. 简述醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白基本原理。二、维生素c的测定1. 指出本实验采用的定量测定维生素c的方法有何优缺点？2. 2, 6-d的作用是什么？3. 用2%

3、草酸提取样品的目的是什么？4. 本实验中设计的空白试验的目的？三、纸层析分离氨基酸1为什么苯丙氨酸的rf值大于赖氨酸2为什么肺氨酸和前三酮加热后是黄色斑点3说明纸层析和离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性 质？列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。4什么是分配系数？5. 氨基酸纸层析系统（层析液）的成分及比例？6 .氨基酸纸层析喷苗三酮显色时应注意些什么？四、双缩月尿法测定蛋白质的含量1. 双缩麻法定量测生物材料屮蛋白质是否适合所有样品？不是；样品中蛋白质含量在0.5-5mg/ml才能用双缩腺法测定。如新鲜的植物叶片植物 块茎蛋白含量低。2. 试验中加入四氯化碳的作用？3. 普通

4、离心机使用时应注意什么？対称平衡。放离心管于离心机之前，应该首先将两个离心管配平，然后放在対角线上。缓慢加速。开机时要首先检查速度应该调到最小开机后应该将速度慢慢往上调。4. 722型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？a=klc吸光度（a）浓度（c） k吸光系数l比色杯=lcm ）单色光通过均匀的溶液吸光度与浓度成正比。分光光度计应该先预热20mino定波长。用参比液进行t调0,盖上盖子t调100-然 后将选择档放在a上，将a值调0. 000（如果是-0.000 ,可按a0旋钮即100）-然后拉动 拉杆，使样品杯置于光路中，测定其吸光度值°操作空档间样品池的盖应打开，否则光电

5、管 疲劳，仪器不能正常运行。连续操作不能超过2h,到时关闭电源0.5h后再启动。5、比色测定时为什么要设计空白管？参比液，消除试剂误差。6、紫外吸收法测定样品蛋白含量时，若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？校正:计算待测蛋白质溶液的od280/od260比值后，查（紫外分光光度法测定蛋白质含 量校正数据表）校正因子“f”值，根据经验公式-蛋白质浓度（mg/ml）=fx1/dxod280x d计算该溶液的蛋白质浓度；d溶液的稀释倍数，d比色杯的厚度（cm）五、酶活力的测定1、制作标准曲线及测定样品时，比色前对试管内溶液有何要求？摇匀，单色光通过均 匀的溶液吸光度与浓度成正比。2、淀粉酶的最适ph

6、,最适温度，底物及抑制剂各是什么？麦芽淀粉酶的最适ph5.6、最适温度40°c、最适底物淀粉、抑制剂dns （2mol/lnaoh配制的）3、如何正确绘制和使用标准曲线？标准曲线应在坐标纸上绘制，横坐标轴距坐标纸底边1.52cm,标示出刻度和样品浓度 的单位；纵坐标轴距坐标纸左边1.52cm,标示刻度和光密度值；曲线为过原点的直线，测 定点均匀分布在直线的两侧；标准曲线只能在测试条件完全相同的情况下，用于确定样品中 的物质含量。对于重复的测定，应取吸光度的平均值查标准曲线；测定数据不应记在标准曲 线上。4、将淀粉酶原液置70°c水浴中保温的作用是什么？要测定0淀粉酶活性需把

7、淀粉酶原 液置于什么条件？5、酶的活力一般如何表示？初速度，单位时间内底物的减少量或产物的增 加量。6、还原性糖显色反应的反应条件是什么？碱性，煮沸。附加内容：非考试范圉六、核酸测定1. 制备的dna在什么溶液中较稳定？2. 为了保证植物dna的完整性，在吸取样品、抽提过程中应注意什么？3. 木实验所用的ctab、氯仿、异戊醇各自的作用是什么？4提取dna的纯度、浓度和完整性检测方法有哪些，分别怎么检测。5、dna提取液中ctab的作用？十六烷基三甲基澳化钱。是一种阳离子去污剂，可溶 解细胞膜。6、如何使用简单的实验方法检测dna纯度？7、提取dna耍掌握的基本思路及原则？752型紫外可见分光光度计的操作1. 打开电源，机器自检.按上下键定波长。2. 自第2个比色池开始，依次装参比液、样液。盖上盖。3. 按 mode 到 t,调 0%,显示 zero,调 100%,显示 blank 直到 100%。4. 按 mode 到 a,调 0%,显示 zero,5. 拉动拉杆，使样品杯置于光路中，测定其吸光度值tcl-20mi冷冻离