大豆皂苷对D—半乳糖胺和内毒素所致小鼠急性肝损伤保护作用

1、大豆皂昔对d半乳糖胺和内毒素所致小鼠急性肝损伤保护作用摘要目的：研究大豆皂昔对d-半乳糖胺（galn） 及内毒素（lps）联合诱发的急性肝损伤的保护作用。方法: 将实验小鼠按体重随机分为5组，即正常组、模型组、阳性 对照水飞蓟素组（0.10 mmol kg-1）及大豆皂昔高、低剂 量组（0.24, 0. 12 mmolkg-l）o每日给药1次，连续7 d0 实验末期，除正常组外，其余组小鼠腹腔注射galn和lps 建立急性肝损伤模型，苏木素-伊红（he）染色法观察肝组 织病理学变化，elisa法检测血清肿瘤坏死因子-a（tnf-a ）,比色法检测血清谷丙转氨酶（alt）、谷草转氨 酶（ast）

2、以及肝脏过氧化氢酶（cat）、谷胱甘肽过氧化物 酶（gpx）、谷胱甘肽-s-转移酶（gst）活性及还原型谷胱甘 肽（gsh）、丙二醛（mda）和一氧化氮（no）含量和caspase-3, caspase-8活化水平。结果：大豆皂昔明显降低galn和lps 联合诱导的急性肝损伤小鼠血清alt, ast活性，减轻肝组 织病理损伤，降低血清tnf-a水平，降低肝n0和mda水平, 升高肝组织cat, gpx, gst活性和gsh水平，降低肝组织 caspase-3和caspase-8活化水平。结论：大豆皂昔对galn 和lps联合诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用，其机制可 能与其抗氧化活性和抗肝细胞

3、凋亡作用有关。关键词大豆皂昔；肝损伤；抗氧化；凋亡流行病学调查证实，常食大豆有助于预防癌症和心血管 疾病的发生，而这些均与大豆中的异黄酮和皂昔等活性物质 密切相关。大豆皂昔是存在于大豆中的一类五环三菇的糖 昔，主要分为a类、b类、e类和ddmp皂昔1。具有抗氧 化、抗癌、防治心血管疾病及免疫增强等多种药理作用 2-3 o研究还表明，大豆皂昔对酒精性肝损伤以及半刀豆 球蛋白a所致免疫性肝损伤具有保护作用4-5 o本实验通 过建立d-半乳糖胺（galn）及内毒素（lps）联合诱导的小 鼠急性肝损伤模型，观察大豆皂昔对小鼠急性肝损伤的保护 作用，为大豆皂昔的开发利用提供科学依据。1材料1. 1动物昆

4、明小鼠，雄性，体重1822 g,由延边大 学实验动物中心提供。1.2药物和试剂大豆皂昔（纯度280%）购于华北制药 股份有限公司；galn及lps购于sigma公司；水飞蓟素购于 沈阳东陵药业股份有限公司；谷丙转氨酶（alt）、谷草转氨 酶（ast）、过氧化氢酶（cat）、谷胱甘肽过氧化物酶（gpx）、 谷胱甘肽-s-转移酶（gst）、还原型谷胱甘肽（gsh）、丙二 醛（mda）、一氧化氮（n0）及蛋白试剂盒购于南京建成科技 有限公司；tnf-a elisa试剂盒购于武汉博士德公司。1. 3仪器3-30k型离心机（德国sigma公司）；s22pc 型分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；rt

5、-2100型酶 标仪（深圳雷杜公司）；zmn-7803型组织包埋机（常州市华 利电子有限责任公司）；rm2126型切片机（上海探卡仪器有 限公司）；ba200型生物显微镜（中国麦克奥迪实业集团有限 公司）。2方法2. 1动物分组及处理将50只小鼠按体重随机分为5 组，即正常组、模型组、水飞蓟素组（0.10 nnnolkg-l）、 大豆皂昔高、低剂量组（0.24, 0. 12 mmol kg-l）0每日灌 胃给药1次，连续7d,正常组及模型组小鼠则以等体积生 理盐水灌胃。末次给药1 h后，除正常组腹腔注射无菌生理 盐水外，其余各组小鼠腹腔注射给予2. 26 mmol kg-1 galn 和10

6、pgkg-1 lps （用无菌生理盐水配制）。造模期间禁 食，不禁水。2.2血清转氨酶及tnf-a水平的检测 造模1. 5 h后， 分离血清，检测小鼠血清tnf-a。造模8 h后，分离血清， 检测小鼠血清alt, ast活性，并按公式计算药物对tnf-a 及转氨酶活性的抑制率。抑制率二（模型组-治疗组）/（模型组-正常组）x100%2.3肝组织病理学检查造模8 h后处死动物，取小鼠 肝左叶，固定于10%福尔马林溶液中，常规石蜡包埋、切片、 he染色，在光镜下观察肝组织病理学变化。2.4肝组织氧化应激、抗氧化活力及凋亡相关指标的检 测4 °c裂解肝细胞，离心取上清。按照各测试盒操作方法

7、 测定 cat, gpx, gst, gsh, mda, no 水平以及肝细胞 caspase-3 和caspase-8活性的相对活化程度。2.5统计学处理 数据以±s表示，组间均数比较采用 spss 11.5统计软件，进行单因素方差分析和turkey? s多 因素t检验。3结果3. 1大豆皂昔对急性肝损伤小鼠血清alt和ast活性的 影响与正常组比较，模型组小鼠血清alt和ast活性明显 升高(p 3.3大豆皂昔对急性肝损伤小鼠血清tnf-a 以及肝no水平的影响与正常组比较，模型组小鼠血清 tnf-a和肝no水平明显升高(p 7邓秀兰，钟相根, 张晓晶，等.痰热清注射液对小鼠免疫

8、性肝损伤的防护作用 j.中国中药杂志，2011,36 (5)： 636.8 郭宏兴，刘亮明，张吉翔，等.大鼠内毒素性急性肝损伤后肝细胞凋亡与炎性因子的表达j.中华传染病杂 志，2008,26 (7)： 415.9 周燕，翟羽佳，何蓉蓉，等.荆条子乙醇提取物对小鼠免疫性肝炎及急性炎症的影响j.中国中药杂志， 2011,36 (17)： 2404.10 宋军，赵军宁，王晓东，等.芍甘多昔对四氯化碳亚急性肝损伤大鼠肝细胞线粒体保护作用j中国中药 杂志，2011,36 (7)： 931.11 liu d, li c, chen y, et al. nuclear import of proinflam

9、matory transcription factors is required for massive liver apoptosis induced by bacterial lipopolysaccharide j. j biol chem, 2004, 279： 48434.12 朴龙，杨振凯，杨阳，等.草灰蓉环烯瞇菇对内毒素诱导d-半乳糖胺致敏小鼠肝细胞凋亡的影响j.前沿 科学，2011,5 (2)： 11.protective effect of soyasaponins on acute liver injury induced byd-galactosamine and lip

10、opolysaccharide in micexu hui-xianl, zhao wen-xi2, quan ji-shu2, yin xue-zhel*(1. affiliated hospital of yanbian university, yanji 133000, china； 2. medical college of yanbian university， yanji 133002, china)abstract objective :to investigate theprotective effect of soyasaponins on acute liver injur

11、y induced by d-galactosamine ( galn ) and lipopolysaccharide (lps) in mice method： the mice were randomly divided into five groups: the normalcontrol, the model group, the silymarin (positive control) group, and soyasaponins high and low-dose groups. they were administered with drugs once every day

12、for 7 days at the end of the experiment, galn and lps were injected intraperitoneally to all of the groups except for the normal group to establish the acute liver injury mode 1. the pathological changes were detected with hematoxylin & eosin (he) staining, tumor necrosis factor- a (tnf- a ) was

13、 detected by elisa method, and the alanine aminotransferase (alt), aspartate aminotransferase (ast), catalase (cat), glutathione peroxidase ( gpx ) ,gluta/thiones-transferase (gst), reduced glutathione (gsh), malondialdehyde (mda), nitric oxide (no), and the activation of caspase3 and caspase-8 were

14、 detected by the colorimetric method result： soyasaponins could reduce the activities of serum alt and ast, the acute hepatic injury induced by galn/lps , serum tnf- a level, hepatic no and mda contents, and the caspase-3 and caspase-8 activations of liver tissues , and increase the hepatic cat, gpx, gst and gsh levels conclusion： soyasaponins shows the protective effect on a