大鼠运动性肾脏缺血再灌注损伤和肉苁蓉配伍维生素C保护作用

1、大鼠运动性肾脏缺血再灌注损伤和肉灰蓉配伍维生素c保护作用摘要：目的：研究肉茨蓉配伍维生素c对大鼠运动 性肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法：将6周龄雄 性wistar大鼠96只为对象随机分为6组：对照组（c组， 12只）、一般训练组（m组，12只）、过度训练组（0m组， 24只）、肉灰蓉+过度训练组（com组，16只）、维生素c+过 度训练组（vcom组，16只）、肉灰蓉+维生素c+过度训练组 （cvcom组，16只），进行56 d的力竭游泳训练。com组、cvcom组采用专业灌胃器灌冃（ig）,每天一次，剂量为6.01g - kg-1, ig 体积为 5 ml - kg-1； vcom

2、组、cvcom 组采用腹 腔注射（ip）,剂量为100 mg kg-1,每天一次，注射体积 为0. 5 ml,其他各组ig等量生理盐水。末次训练后24 h, 进行血清尿素氮、血清肌肝等生化指标检测。结果：1） 8周 的过度训练导致大鼠运动性肾缺血“再灌注”，肾组织超微 结构被严重破坏、组织病理学发生明显改变，肾功能受到严 重损坏。2）血尿素氮和血清肌酉干上升。0m组（p key words： herba cistanches； vitamin c； exercise-induced ischemia-reperfusion随着现代中医药理论的发展、现代药理学理论及现代生物技术的更新，更多的单剂

3、或配伍组方应用于体育实践。中 药以其多靶点、多途径作用且几乎不含违禁成分的特点日益 显示出其独特的优势，在提高运动员身体机能及缓解疲劳方 面取得了一定的成就。机体在稳定状态下，肾血流量可以通 过自身调节机制来维持相对恒定。在剧烈运动时，肾血流在 神经和体液因素的影响下发生改变。由于各器官血流量重新 分配，使活动器官特别是肌肉的血流量增多，肾血流量急剧 下降，并伴随运动过程的持续和强度递增表现的更加明显 1。肾脏的这种不完全缺血状态形成了 '运动性肾缺血”。 运动停止后，肾血供应恢复形成运动性肾缺血后的“再灌 注” 2。缺血再灌注损伤过程中，自由基的产生异常增多 起着重要作用。研究表明，

4、肉茨蓉具有提高过氧化物岐化酶 活性、降低脂质过氧化物的药理作用，可以清除体内过量生 成的自由基对机体细胞的损伤3；维生素c作为体内重要 的抗氧化剂，也可以有效地清除自由基4。本文研究肉及 蓉配伍维生素c对大鼠缺血再灌注肾脏的影响，并探讨二者 在缺血再灌注损伤中的作用及其机制，旨在为其临床应用提 供理论依据。1材料1. 1动物清洁级雄性wistar大鼠100只，42 d龄，平均体重 (201. 8 + 14. 1) g,北京大学医学部实验动物科学部提供， 许可证号scxk (京)2006-0008o在整个试验过程中，实验 室内温度保持在（22±2） °c,相对湿度55%75%

5、,光照时 间随自然变化。所有试验大鼠均以基础饲料（北京大学医学 部实验动物科学部提供）和蒸馆水常规饲养，自由饮食。实 验时间为63 d,正式训练时间为56 do1. 2 实验用药肉茨蓉（cistanche deserticola y. c. ma）, 产自内蒙，北京同仁堂药店购得，批号：120224536并经天 津中瑞药业有限公司高占友高级工程师鉴定。将干燥带鳞叶 的肉灰蓉粉碎成粗粉，用10, 6, 6倍量60%乙醇水浴提取 3次，每次2 h,合并提取液冷藏24 h,过滤，滤液减压回 收乙醇，浓缩成浸膏（相当于2. 0g生药/g浸膏），备用3。 维生素c注射液（批号20120406）,北京双鹤

6、药业提供。1.3 试剂血清肌（serum creatinine, scr）采用 jaffe 苦味酸法测定，血尿素氮（blood urea nitrogen, bun） 采用二乙酰-月亏法测定，丙二醛（malondialdehyde, mda） 采用比色法测定;超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, sod）,采用黄嚓吟氧化酶法测定，均采用南京建成生物工程 研究所提供试剂盒，试剂盒编号20120511,并严格按照使用 说明操作。1.4仪器bs224s型电子分析天平（德国赛多利斯）、光 学显微镜（日本olympus公司）、alcyon300全自动生化分析 仪（美国雅培）、756

7、mc型紫外-可见分光光度计（上海精密 仪器厂）及gl-20g高速冷冻离心机（上海安亭）。2方法2. 1动物分组实验大鼠适应性饲养4 d后，以20 min/d的运动量对 其进行为期3d的筛选，淘汰个别不适应游泳训练者，将剩 余大鼠以数字随机分组法分6组：对照组（c组）12只，一 般训练组（m组）12只，过度训练组（0m组）24只，肉茨 蓉+过度训练组（com组）16只，维生素c+过度训练组（vcom 组）16只，肉茨蓉+维生素c+过度训练组（cvcom组）16 只进行56 d的游泳训练。训练期间，com组、cvcom组采用 专业灌胃器灌胃（ig）,每天一次，剂量为6. 01 g/kg, ig 体

8、积为5 ml/kg； vcom组、cvcom组采用腹腔注射（ip）,剂 量为100 mg/kg ,每天一次，注射体积为0. 5 ml （通过预 实验获得最佳剂量），其他各组ig等量生理盐水。2.2实验方法2. 2. 1训练及测试方案c组常规饲养，不加任何干预，平时不运动。m组进行 中等强度游泳训练，正式游泳训练8周。每周训练6 d,每 天训练1次，第一次下水游20 min,此后逐渐增加，至第1 周末时每天游60 min,第2周末时加至每天游90 min,第3 周末时加至每天游120 min,此后5周均保持此运动量。其 他各组前3周训练安排同m组，第4周起开始安排高强度训 练。大鼠进行负重游泳，

9、每次训练至力竭。力竭标准以大鼠 下沉后10 s不露出水面为度。第13周负0.5%体重，第4 周负1%体重，第5周负2%体重，每天训练1次。第6周每 天上、下午各训练1次，第78周，每天上、下午、夜间 各训练1次，均负5%体重。至第8周末，c、m组大鼠，均 正常生长，无意外死亡发生。其他各组大鼠因尾部负重，疲 劳衰竭不能恢复及训练意外死亡等原因，死亡率较高。0m组、 com组、vcom组、cvcom组分别剩余14、13、11、13只。各 组分别取10只用于实验取材，其他随机剔除。2. 2. 2指标测定各组大鼠于末次游泳训练24 h后，乙瞇适度麻醉，从 颈总动脉处取血加入柠檬酸钠溶液抗凝，37*水

10、浴中30 min 后，4工3 000 rpm离心10 min,分离制备血清，置-2ctc 冰箱中保存待查。迅速取双肾，剔除筋膜，置于预冷的生理 盐水中洗净血污，肉眼观察肾脏大小、色泽、质地。分离左 肾，取肾上极组织0.5 g,用1.5 ml生理盐水在c下以12 000 rpm研磨制成10%肾组织匀浆；10%甲醛固定肾组织标本, 石蜡包埋，制成4 um厚切片，he染色，观察组织病理学变 化。2. 2.3肾脏病理变化评价参照pallers标准5,在400倍光镜下随机选5个视 野，每个视野选10个肾小管评分。1）肾小管明显扩张，细 胞扁平为1分；2）刷状缘损伤为1分，脱落为2分；3）细胞膜大泡1分，

11、细胞浆空泡1分；4）间质水肿1分；5）肾 小管腔内有脱落的坏死细胞未形成管型或碎片为1分，形成 管型或碎片为2分。肾小管评分由两名技术员双盲计算，取 其平均值。2. 3数据统计所有数据均用spss 12.0统计软件包进行处理，数据以平均数土标准差（土s）表不， 计量资料采用one-way anova, 不齐时采用dunnett' s t3法。 于其他组（p 综上所述，资料进行正态性检验；多组 方差齐时采用lsd法，方差p0. 05）,静止对照组明显低 大负荷游泳训练造成了大鼠肾脏缺血再灌注的损伤，肉茨蓉和维生素c均对肾脏缺血再 灌注损伤具有明显保护作用，可能是通过增强超氧化物歧化 酶活

12、性，清除自由基，减轻脂质过氧化作用，进而改善肾脏 功能。就疗效而言，二者配伍使用优于二者单独应用，而肉 茨蓉又优于维生素c,但也可能和二者在应用中的剂量大小 有关，其剂量和疗效之间的关系，还有待进一步研究。参考文献：1bare1arwf. review of medicalphysiologym california： lange medical publication, 1995： 577-580.2 heifets m,al.exercise trainingdisease in rats withdavis t a ,tegtmeyer e , et ameliorates progre

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