F280 320 380荧光软件使用手册

1、第二部分F-280/320/380型荧光分光光度计软件使用手册- 94 -目 录1功能介绍11.1主要功能11.1.1波长扫描11.1.2时间扫描11.1.3 光度值法11.1.4 三维扫描11.2 谱图处理功能21.2.1 数据读出21.2.2 自检峰谷值21.2.3 放大功能21.2.4 求导功能21.2.5 谱图计算21.2.6 谱图平滑21.2.7 谱图面积计算22 软件安装32.1 安装荧光分析软件所需的最低配置32.2 安装荧光分析软件32.3 从PC移除荧光分析软件62.4 运行荧光分光光度计62.4.1 开机62.4.2 关机73 软件介绍93.1 主界面93.2 主菜单和工具

2、条104 操作144.1波长扫描144.1.1创建一个分析方法144.1.2 测量样品214.1.3 谱图处理224.1.4 其他功能314.2 时间扫描344.2.1 创建一个分析方法344.2.2 测量样品394.2.3 谱图处理424.2.4 其他功能444.3 光度测定454.3.1 创建一个分析方法454.3.2 测量样品544.3.3谱图处理634.3.4 其他功能654.4 三维扫描664.4.1 创建一个分析方法664.4.2测量样品704.4.3谱图处理724.4.4其它功能745 其它功能755.1 仪器控制755.2 文件操作755.2.1 保存文件755.2.2 打开文

3、件785.2.3 复制/粘贴图谱785.2.4打印796 技术支持807 附录817.1测量光谱修正数据817.1.1激发侧响应参数测量817.1.2发射侧仪器响应的测量（200-600nm）847.1.3发射光侧长波长范围内的仪器响应的测量867.2 积分方法917.3比率化验917.4 标准曲线的测定系数93天津港东科技发展股份有限公司1 功能介绍这部分介绍了荧光分析软件的功能。本说明书适用于F-280、F-320、F-380荧光分光光度计，以F-380荧光分光光度计为主介绍了仪器的各项使用方法，如果您购买的产品不是F-380荧光分光光度计，可能不具有其中某些功能。1.1 主要功能1.1.

4、1 波长扫描1. 能在规定的波长内进行发光强度扫描。2. 波长扫描测量最多能重复20次，并且可设定重复周期，重复间隔在0-180分钟自由设置。1.1.2 时间扫描1. 可在规定的时间间隔内进行磷光、荧光和发光测量，并可测量磷光寿命。2. 可执行动力学法计算。1.1.3 光度值法1. 使用波长法进行定量，可测量高达20个标准样品，通过标准浓度的每个点来绘制多边形标准曲线，回归标准曲线的制备可使用一次、二次、三次方的曲线或折线，同时可获得其相关系数R及R2。2. 可通过手动输入已知标准数据从而绘制标准曲线。3. 测量数据和标准曲线可同时显示在屏幕窗口上，因此当获得标准曲线时，能执行样品测量并计算样

5、品浓度。4. 在准备好标准曲线的情况下，能执行单波长、双波长或三波长计算。5. 可以计算被测的数据的平均值和标准偏差（SD）。1.1.4 三维扫描1. 可设置数据采集的间隔波长。2. 三维图谱、激发、发射的二维图谱能同时显示并跟踪波长及峰值。3. 可打印平面视图/立体视图。1.2 谱图处理功能1.2.1 数据读出将鼠标移动到需要的波长处，单击左键，该处波长所对应的数据（波长和能量值）将会显示在视图右上角的位置，并会有一黑色竖线出现在该波长处，点击方向键（左右键）竖线将会逐点移动，同时右上角的数据也会随着更改。1.2.2 自检峰谷值当扫描结束时，选择显示峰或谷值时，这些峰谷值将会自动显示在谱图右

6、侧的列表中，绝对峰高可自定义设置，默认值是10。1.2.3 放大功能点击放大功能后，单击鼠标左键不释放，拖动鼠标，将会有虚线显示，虚线所选中的范围将会被放大显示。1.2.4 求导功能对选中的谱图进行求导操作，此操作可以将不太明显的现象显示出来。1.2.5 谱图计算对相同点数的任意两个谱图可进行加、减、乘、除运算，计算后的数据将会以新的谱图显示在右侧窗口上。1.2.6 谱图平滑可对谱图进行平滑处理，此处理可以减少噪声的影响。平滑方式有五点三次平滑、七点五次平滑和Savitzky-Golay平滑三种方式，平滑次数2-4可选。1.2.7 谱图面积计算对当前谱图的部分区域进行面积计算，该区域的起始位置

7、可自行设定。2 软件安装这部分内容将会介绍怎样安装荧光分析软件。2.1 安装荧光分析软件所需的最低配置1. 台式计算机或者笔记本计算机一台。2. 具有CD-ROM 光驱。3. USB 接口。4. 1GB的RAM (1GB 或更多)。5. 2GB 以上的可用硬盘空间。6. Windows 2000 或Windows XP。2.2 安装荧光分析软件1. 将安装盘放入光驱。2. 如果没有弹出自动安装窗口，请打开CD-ROM 目录。3. 双击Setup.exe 进行安装，弹出安装窗口如图 2-1（软件版本号可能不同），点击下一步。图2-14. 选择安装路径(图 2-2)，点击下一步。图2-25. 设置

8、安装文件夹名称（图 2-3），点击下一步。图2-36. 选择附加任务（图2-4），点击下一步。图2-47. 准备安装（图 2-5），点击安装。图2-58. 点击完成按钮完成安装（图 2-6）图2-6现在，荧光分析软件已经安装在你的电脑中了。2.3 从PC移除荧光分析软件开始控制面板添加和删除程序选择荧光分析软件删除。2.4 运行荧光分光光度计2.4.1 开机1. 打开装有荧光分析软件的计算机。2. 将荧光分光光度计用随机配带的USB数据线连接到电脑的USB接口。3. 将荧光光度计开关按向“ON”，打开荧光分光光度计电源。*首次安装可能会屏幕在左下角弹出“无法识别的硬件”的提示，单击打开，更新U

9、SB驱动程序即可，驱动程序在光盘USB2.0的文件夹内。4. 30秒钟后打开荧光分析软件。有两种方法，分别为：· “开始”“程序”“荧光分光光度计”· 通常，点击桌面快捷方式以打开荧光分析软件。出现图2-7界面，为软件联机初始化过程。图2-75. 软件联机过程中请勿关闭软件或强行关闭荧光分光光度计电源按钮，以免引起异常现象。6. 注意：此时若初始化失败，联机未成功。则需关闭软件重新打开。2.4.2 关机1. 如果在联机状态下，先关闭联机窗口，将提示“是否确定终止联机？”如图2-8。图2-82. 点击“是（Y）”，弹出“是否关灯？”窗口，如图2-9。 图2-93. 点击“是（

10、Y）”，关闭软件。点击“否（N）”也将关闭软件。4. 关灯后冷却5分钟，再关闭荧光分光光度计主机电源。为了保护光源，请在关灯5分钟后再关闭主机电源，而不要立即关闭主机电源。5. 注意：扫描过程中无法关闭软件。3 软件介绍这章主要介绍荧光分光光度计的界面。3.1 主界面运行荧光分析软件后，主框架如下图所示（图3-1）。菜单栏工具栏状态条工作区域图3-1荧光分析软件界面主要包括以下三部分：1. 菜单栏和工具条(1) 菜单栏菜单栏中列出了“文件”、“编辑”等，每个菜单中包含命令。(2) 工具条荧光分析软件提供三种工具条。分别为：l 标准工具条，位于菜单栏下方l 测量工具条如下图，扫描窗口中出现窗口右

11、侧。l 谱图处理工具条如下图，扫描完毕后的谱图处理界面窗口右侧中出现。2. 工作区域工作区域中将显示测量窗口及谱图处理窗口。3. 状态栏状态栏位于工作区域下方，它显示了仪器的连接或工作状态。 3.2 主菜单和工具条在主工具条上，利用键盘或鼠标选择需要的功能项。几乎菜单里所有的功能在工具条上都有对应的按钮（即快捷方式），扫描界面和谱图处理界面下的菜单栏略有不同。表3-1扫描界面菜单菜单子菜单按钮功能文件打开打开一个存储的数据退出退出软件查看标准工具栏标准工作状态，不选择此项则打开、存储、复制、另存为、打印、联机等功能的快捷方式将不被显示仪器工具栏显示按钮测量工具栏工作区域右侧的扫描工具栏显示状态

12、栏工作区域下方的状态显示工具波长设置快速设置激发，发射波长配置弹出配置窗口扫描开始扫描停止扫描停止测量打开斩波设置快门为“开”关闭斩波设置快门为“关”波长修正手动校正波长参比监控校正光源信号跳变测量光谱校正数据采集光谱校正参数，详见附录7-1测量光谱修正数据。导入发射标准数据导入标准光源参数（500-900nm）关闭氙灯关闭氙灯窗口平铺当前窗口平铺显示层叠当前窗口层叠显示帮助关于荧光分析软件显示荧光有关的一些信息表3-2 谱图处理界面菜单菜单子菜单按钮功能说明文件打开打开一个存储的数据关闭关闭当前谱图保存保存当前谱图另存为将当前谱图另存为加载谱图打印打印当前谱图打印预览查看并设置打印预览打印设

13、置打印机及纸张设置编辑复制复制当前谱图粘贴将剪贴板中的内容粘贴到当前谱图谱图属性设置参数查看谱图信息查看/修改谱图信息满刻度显示满刻度显示多谱图选择选中的谱图将被显示初始状态返回谱图打开时的状态查找追踪峰位置网格网格显示新谱图打开到当前界面K因子/峰值表仅在时间扫描后出现数据检峰设置检测峰高阀值平滑对选中谱图进行平滑处理求导对选中谱图进行求导处理谱图计算两个谱图相加、减、乘、除计算面积计算对指定区域谱图面积进行计算寿命计算磷光寿命计算，仅在时间扫描中出现谱图重置恢复求导/平滑前的状态预览打印预览其他特殊功能重置恢复到谱图的最初状态 信噪比计算时间扫描结束才可以计算信噪比放大仅在三维扫描结束后出

14、现返回扫描界面从谱图处理界面切换到扫描界面视图切换平面/立体图仅在三维扫描结束出现4 操作这章介绍了荧光分光光度计使用方法。4.1 波长扫描4.1.1创建一个分析方法这一节介绍了波长扫描的条件设定和操作方法。在测量之前要设定分析条件。有两种方法进行分析条件设置。l 从“工具”菜单中，选择“配置”命令l 点击按钮，一个对话框将显示，如图4-1所示：图4-11. 通用(1) 扫描类型：波长扫描、时间扫描、光度测定和三维扫描共四种类型，在这里，选择波长扫描。 (2) 操作员： 输入操作员名称。(3) 注释：输入对测量条件的解释或注释。2. 仪器当点击仪器标签时，一个窗口将显现，如图4-2所示： 图4

15、-2(1) 扫描模式：选择下列扫描模式中的一种。l 激发： 指定发射波长，激发单色器将在设置的激发波长范围内进行扫描。 l 发射：指定激发波长，发射单色器将在设置的发射波长范围内进行扫描。 l 同步：当扫描模式为“同步”时，同时输入激发波长和发射波长，激发单色仪和发射单色仪同步在设定的波长范围内进行扫描。(2) 数据模式：选择下列数据模式中的一种。l 荧光强度 l 磷光强度（F-320型和F-280型不具有此项功能）：选择磷光强度时，斩波将打开。斩波开启时，光源的光根据一定频率照射样品，因为磷光的寿命要远远长于荧光，因此当激发光被瞬时切断后，荧光随之消失，但磷光仍然存在，此时仪器测量到的为样品

16、的磷光强度。l 发光强度 选择发光强度时，请关闭斩波（F-380型）或者将激发光用不透光物质遮挡（F-320型和F-280型），以屏蔽氙灯光源发出的光，从而测量化学反应引起的发光强度。(3) 斩波频率（F-320型和F-280型不具有此项）：仅当数据模式为“磷光强度”时需要设置斩波频率，可设置40，20，10Hz。(4) 发射波长：扫描激发光谱时，需输入发射波长，此时发射单色器将波长固定在这一位置，同时激发单色器将在一定波长范围内进行扫描。(5) 激发起始波长：扫描激发光谱时，波长扫描的开始波长，在测量波长范围内，输入较短波长测的波长。(6) 激发终止波长：扫描激发光谱时，波长扫描用的结束波长

17、，在测量波长范围内，输入较长波长侧的波长。(7) 激发波长：扫描发射光谱时，需输入激发波长，此时激发单色器将波长固定在这一位置，同时发射单色器将在一定的波长范围内进行扫描。(8) 发射起始波长：扫描发射光谱时，波长扫描的开始波长，在测量波长范围内，输入较短波长测的波长。(9) 发射终止波长：扫描发射光谱时，波长扫描的终止波长，在测量波长范围内，输入较长波长测的波长。(10) 扫描速度：设定波长扫描速度（单位：nm/min）。一般情况下，速度越快信号噪声越大，请选择合适的扫描速度。因型号不同，扫描速度会有所不同，具体如下：F-380型： 30000、12000、2400、1200、240、60、

18、30nm/min；F-320型： 21000、12000、2400、1200、240、60、30nm/min；F-280型：3000、2400、1200、240、60、30nm/min。(11) 延迟：在扫描开始之后，测量遵照这里所设定的延迟时间而开始测量，即从点击开始扫描到仪器实际进行测量等待的时间。输入范围：09999秒。(12) 激发狭峰：为激发光侧选择狭峰宽度，单位：nm。可选择狭缝带宽：F-380型/F-320型：1.0、2.5、5.0、10.0、20.0nm；F-280型：2.0、5.0、10.0、20.0nm。(13) 发射狭峰：为发射光侧选择狭峰宽度，单位：nm。可选择狭缝带宽

19、：F-380型/F-320型：1.0、2.5、5.0、10.0、20.0nm；F-280型：2.0、5.0、10.0、20.0nm。(14) 增益：通常情况下增益选择1档，当测量信号较弱时，可选择2-4档增益，用于放大测量信号。(15) PMT电压：用于控制光电倍增管电压，可选择下列一个值： l 250V l 400V l 700V l 950V (16) PMT电压0-1000V当勾选此选项时，PMT测量电压可在0-1000V内微调，变化间隔为1V。 (17) 灵敏度：从列表中选择灵敏度（即响应时间，单位为s）。可选择0.0004、0.01、0.05、0.1、0.5、2.0、8.0、auto

20、。对于auto选择，其响应时间根据扫描速度自动设定，通常选择auto。(18) 光谱校正：通过使用已存储的仪器参数，来校正光度计的波长参数，从而确定样品的内在光谱，光谱校正只能在一定范围内进行（激发200-600nm，发射200-600nm/500-900nm），这是因为已存储的仪器参数只是在这个范围内合适的，如果测量超出校正的范围，则会出现相应提示。如在此处勾选光谱校正，需预先采集校正参数，即使用“测量光谱修正数据”功能。如未测量光谱修正数据而勾选“光谱校正”项，则会出现如图4-3所示提示图4-3(19) 快门控制（F-320型和F-280型不具有此项功能）：当勾选快门控制时，扫描中自动控制

21、快门的关和开。快门的作用相当于光闸，快门打开时，光源的光照射到样品上；快门关闭时，则光源的光被挡住。对于一些易受光变质的样品，建议可以勾选此项，在测量时，仅在扫描开始时打开快门，扫描结束则立即关闭快门，这样可以大大缩短样品暴露在光源照射下的时间。(20) 重复测量：设定重复测量的数目，输入范围是1至20。扫描完毕后，重复扫描的图谱将全部显示。(21) 时间间隔： 设定重复间隔，输入范围是0.0至180.0分钟。 3. 显示当选择显示标签时，一个窗口将出现，如图4-4所示。图4-4(1) 自定义坐标轴l Y-轴最大值：在监控窗口上为Y轴输入一个最大的值。l Y-轴最小值：在监控窗口上为Y轴输入一

22、个最小的值。(2) 在数据获取之后打开数据处理窗口：在样品测量之后，选择数据是处理还是不处理，当选择处理时，在测量结束时，自动打开数据处理窗口。在这个窗口内可以进行数据处理，如检峰、谱图计算等是可进行的。(3) 数据采集完毕后打印报告：选择样品测量之后是打印还是不打印，当选择打印时，测量之后，将自动打印，在报告标签下的设定项目将被打印。当这一项不被选择时，数据处理能够执行，通过文件打开来读取文件。4. 打印当选择打印标签时，一个窗口将显现，如图4-5所示。设置打印内容，字体等，点击确定。图4-5(1) 打印设置：l 包括数据l 包括方法l 包括谱图l 包括数据列表，选中时同时可选：数据间隔（单

23、位nm）：数据将以两个波长点之间的固定间隔打印数据起点（单位nm）数据终点（单位nm）l 包括峰值列表，选中时同时可选：峰波长和峰值起始和终止波长谷波长和谷值峰面积 (2) 打印字体： 点击“选择字体”，出现以下界面（图4-6），设置打印字体型号及大小。图4-64.1.2 测量样品 选择好测量方法后，进入波长测量界面，测量方法设置和扫描菜单显示在界面右侧，如图4-7：图4-71. 有两种方法开始测量：(1) 点击菜单里的“工具”“扫描”进行测量。(2) 点击按钮，它在测量工具条上。2. 为了中途暂停测量，点击工具条上的按钮。3. 设置快门“开”或“关”可通过进行切换，扫描停止时或开始前才可以开

24、和关快门的操作，扫描中间是无法操作的（F-320型和F-280型不具有此功能）。4. 扫描完毕（或中断扫描）后，图谱处理窗口或打印窗口（根据设置更改）将会自动弹出。峰值表将显示峰数、峰的起始位置、峰位置、峰的终止位置、峰高值、谷位置、谷值、半峰宽等信息。如图4-8所示：图4-84.1.3 谱图处理1. 谱图设置。点击弹出对话框，如图4-9，可设置谱图的信息（坐标轴、字体、线条、信息、扫描内容、打印内容）。图4-9(1) 设置点击“设置”标签，如图4-9，设置是否显示查找模式、网格、显示内容等。l 设置查找模式。l 显示网格。l 显示内容，选择谱图中需要显示的内容，如峰数、峰波长、峰波长和峰值、

25、谷数、谷波长、谷波长和谷值、峰、谷的波长和值等。(2) 坐标轴点击“坐标轴”标签，如图4-10所示。图4-10l X轴(nm)：设置当前图谱的X轴范围：201.0900.00nm之内l Y-轴(data)：设置当前图谱的Y轴范围：-1200000.01200000.0之内。l 坐标轴间隔：可选择自动或固定间隔。选择固定间隔方式时可输入间隔数值。l X轴：X轴可以波长或波数的方式显示。(3) 字体点击“字体”标签，如图4-11所示：图4-11查看当前图谱中显示的字体样式，如需重新设置字体则点击“选择字体”标签，出现对话框如图4-12所示，选择需要显示的字体样式。图4-12(4) 线条 点击“线条

26、”标签，如图4-13所示：图4-13l 谱图列表：选择当前需要设置的谱图。l 线条颜色：选择当前谱图的线条颜色。l 线条宽度：选择当前谱图显示的线条宽度。(5) 信息点击“信息”标签，如图4-14，查看或设置谱图信息。图4-14l 谱图列表：选择当前设置的谱图。l 更改名称：输入谱图名称。l 谱图注释：输入谱图注释。l 仪器：当前仪器的名称。(6) 扫描点击“扫描”标签，如图4-15所示，查看扫描设置。图4-15(7) 打印点击“打印”标签，如图4-16所示，从列表中选择需要设置的谱图，其余参数设置同4.1.1“创建一个分析方法”4“打印”设置。图4-16(8) 可视谱图选择“可视图谱”标签，

27、如图4-17，选择要显示的图谱名称。在当前谱图窗口中有多条谱线的情况下，未选择的谱图将不被显示。、图4-172. 打印预览点击按钮进行打印预览，窗口如图4-18，点击“下一页、前一页、两页（一页）、放大、缩小”等设置打印预览方式，打印将按照设置的视图进行。点击“关闭”以关闭打印预览窗口。图4-183. 设置峰高。点击后弹出对话框，如图4-19，根据设置的峰高可进行峰值检索。高于此峰值的数据才被显示，低于此阀值的峰将不被检测。图4-19注意：这里的峰高指的是从基线到波峰的距离，而不是波峰对应的坐标y值。4. 谱图平滑。用来对谱图进行平滑处理，点击后弹出新窗口，如图4-20，可选择五点三次、七点五

28、次或Savitzky-Colay方式平滑，平滑次数最多可选择4次。平滑操作可以减少噪声带来的干扰，处理后的图形将会覆盖原始数据。图4-205. 谱图求导。用来对谱图进行求导操作，点击后弹出对话框，如图4-21，可选择求导次数和平滑次数，此操作可以使一些正常显示不太明显的现象更加明显，处理后的数据将覆盖原始数据。图4-216. 谱图计算。用来对谱图进行加、减、乘、除运算，点击后弹出新的窗口。(1) 可对单张谱图进行运算。在当前谱图中点击按钮，当前谱图将显示在计算窗口中，如图4-22，输入参数1，点击“计算”，可使一张图谱与参数相乘计算。计算结果显示在显示框右方。图4-22(2) 可对两张谱图进行

29、运算。在谱图列表中再选择一张谱图，则需要计算的两张谱图均显示在计算窗口。勾选“选择”框，选择要进行的运算方式，点击计算，对当前打开的两张图谱与各自的参数相乘后在两张图谱之间进行加、减、乘、除运算，如图4-23图4-23(3) 点击“另存为”按钮，可将计算后的图谱保存。(4) 点击“确定”或“取消”退出谱图计算窗口。7. 面积计算。(1) 用来计算在当前显示的谱图中所选中的区域的面积。点击后弹出新窗口，如图4-24，可以设置计算的开始波长位置或终止位置进行计算，计算结果将显示在列表中，计算方法及S1、S2、S3所代表的面积见附录2-积分方法。图4-24(2) 如需打印，点击“打印”按钮。(3)

30、点击“关闭”退出面积计算窗口。8. 谱图重置。恢复数据处理前的状态（未进行平滑、求导时的状态）。4.1.4 其他功能1. 点击菜单“工具”“波长修正”可在测量之前对波长进行人工修正，可输入负值或正值。激发或发射波长修正的总值不得超过±10nm，如图4-25a所示，表示激发波长向x轴正方向移动2nm，发射波长向x轴负方向移动3nm，点击“确定”后，再次点击波长修正命令，则如图4-25b所示，被修正的值提示在对话框下方，激发或发射波长修正的总值不得超过±10nm，如此时再次进行修正操作，则激发波长最多能修正8nm，发射波长最多能修正-7nm，输入的数值超出范围时，将按照最大范围

31、进行修正。一般情况下，修正值在仪器出厂前标示在光源室盖内侧。 图4-252. 用来恢复只有第一条谱线时的状态（显示范围）。3. 满刻度显示（将所有谱图全部显示）。4. 查找模式。在此模式下，图谱出现指示线，在谱图上点击鼠标，则指示线随光标移动，同时图谱左上角将出现指示线对应波长及峰值的坐标值。5. 显示网格。点击此按钮则谱图窗口中显示网格如图4-26所示。图4-266. 当视图里有多条谱线时可用，用来设置谱图是否显示（注意当当前窗口只有一条谱线时此按钮为灰色不可用）。点击出现图4-27对话框，选中的谱图才在谱图界面显示，不选中的将不显示。图4-277. 如当前窗口有多条谱线，则可通过峰值标的标

32、题栏选择谱图。如图4-28。选择谱图图4-288. 用来更改名称和备注信息。点击出现以下窗口。可以更改当前谱图的名称或加入注释。图4-299. 用来返回扫描界面。在谱图处理窗口点击此按钮则转跳到谱图扫描窗口。4.2 时间扫描这一节详细介绍了时间扫描的条件设定和操作方法。4.2.1 创建一个分析方法 在测量之前要设定分析条件。有两种方法进行分析条件设定。l 从“工具”菜单中，选择“配置”命令。l 点击按钮，一个对话框将显示，如图4-30：图4-301. 通用(1) 扫描类型：在这里，选择时间扫描。 (2) 操作员： 输入操作员名称。(3) 注释：对测量条件的解释或注释。2. 仪器当点击仪器标签时

33、，一个窗口将显现，如图4-31所示：图4-31(1) 数据模式：选择下列数据模式的一种，发光模式用于测量生物发光/化学发光的发光度。l 荧光强度 l 发光强度 l 磷光强度（F-280型和F-320型不具备此项功能） 选择磷光强度时，斩波将打开，但是光源保持打开状态，此时测量的是样品持续受激后磷光强度随时间的变化。l 磷光寿命（F-280型和F-320型不具备此项功能） 当选择磷光寿命时，点击开始扫描，则激发磷光后光源立即自动关闭，准确测量样品一次受激后磷光发射的寿命。l 磷光寿命（短）（F-280型和F-320型不具备此项功能）如果磷光寿命小于20ms时，应当选择“磷光短寿命”测量方式，在这

34、种情况下，时间单位和测量时间被自动地设定为ms和20ms。(2) 斩波频率（F-280型和F-320型不具备此项）：仅当数据模式为“磷光强度”时需要设置斩波频率，可设置40，20，10Hz。(3) 激发波长：输入激发光波长。(4) 发射波长：输入发射光波长。(5) 时间：设定时间单位 l s l ms(6) 扫描：设定扫描时间，单位为ms时范围：1009999ms；单位为s时范围：109000ms。(7) 延迟：在按压测量按钮之后，测量在延迟一段时间后才开始，这个延迟时间在这儿设定，它用来稳定温度等。在重复测量中，这个时间是直到第一次测量开始的时间，对于第二次测量和顺序测量，延迟时间是无效的。

35、 输入范围：09999s。(8) 激发狭缝： 选择激发光侧的狭缝宽度，单位：nm。(9) 发射狭缝：选择发射光侧的狭缝宽度，单位：nm。(10) 增益：用于放大测量信号，当测量信号较弱时使用此功能。(11) PMT电压：用于控制光电倍增管检测器电压的功能，选择下列一个值： l 250V l 400V l 700V l 950V (12) PMT电压0-1000V当选择此选项时，PMT电压可在0-1000V内微调。(13) 灵敏度：从列表中选择灵敏度。对于自动选择，其响应时间根据扫描速度自动设定，通常是选择自动。(14) 快门控制（F-280型和F-320型不具备此项功能）： 当勾选快门控制时，

36、扫描中自动控制快门的关和开。快门的作用相当于光闸，快门打开时，则光源的光可以照射到样品池；快门关闭时，则光源的光被挡住。对于一些易受光变质的样品，可以勾选此项，在测量时，仅在扫描开始时使快门打开，扫描结束则立即关闭快门，这样可以大大缩短样品暴露在光源照射下的时间。(15) 重复测量：设定重复测量的数目，输入范围是1至20。(16) 周期时间：设定重复测量的间隔，输入范围是0.0至180.0分钟。3. 显示当选择显示标签时，一个窗口将出现，如图4-32所示。图4-32(1) 自定义坐标轴：l Y-轴最大值：在监控窗口上为Y轴输入一个最大的值。l Y-轴最小值：在监控窗口上为Y轴输入一个最小的值。

37、(2) 在数据获取之后，打开数据处理窗口：在样品测量之后，选择数据是处理还是不处理，当选择处理时，在测量结束时，自动打开数据处理。在这个窗口内可以进行数据处理，如峰检测等。(3) 数据获取后的打印报告： 选择样品测量之后是打印还是不打印。详见4.1.1-3-(3)。4. 打印当选择打印标签时，一个窗口将显现，如图4-33所示。设置打印内容，字体等，点击确定。具体设置同4.1.1-4。图4-334.2.2 测量样品设定好测量方法后，进入时间扫描界面，如图4-34：图4-341. 有两种方法开始测量：(1) 点击菜单里的“工具”“扫描”进行测量。(2) 点击按钮，它在测量工具条上。2. 为了中途停

38、止测量，点击工具条上的按钮。3. 设置快门“开”或“关”可通过进行切换。4. 扫描完毕（或中断扫描）后，图谱处理窗口或打印窗口（根据设置更改）将会自动弹出。可在菜单“查看”中选择图谱显示方式为峰值表方式或K因子方式：(1) 峰值表方式如图4-35所示：图4-35(2) K因子显示方式可显示比率计算结果（斜率，活性，R，R2等，其具体应用见附录3-理解比率化验），如图4-36。图4-36选中数值表可使其激活，此时起始、终止、K-因子可输入，输入相应数值，点击“更新”，则按照设置的起始时间进行重新计算，如图4-37所示：图4-374.2.3 谱图处理1. 设置项，可设置谱图的信息（坐标轴、字体、线

39、条、信息、扫描内容、打印内容）。具体参数设置参照4.1.3谱图处理1 “谱图设置”。 2. 打印预览设置，参照4.1.3谱图处理2“打印预览”。3. 设置峰高，根据设置的峰高可进行峰值检索，参照4.1.3谱图处理3“设置峰高”。4. 按钮用来对谱图进行平滑处理，可以减少噪声带来的干扰，处理后的图形将会覆盖原始数据，参照4.1.3谱图处理“谱图平滑”。5. 按钮用来对谱图进行求导操作，可以使一些正常显示不太明显的现象更加明显，处理后的数据将覆盖原始数据，参照4.1.3谱图处理5“谱图求导”。6. 用来对谱图进行加、减、乘、除运算，点击后弹出新的窗口，计算时可以输入一个系数与单张谱图相乘，也选择两

40、张谱图输入各自的系数进行简单相乘后再进行加、减、乘、除运算计算后的谱图显示在右侧，计算完毕后可对谱图进行保存处理。参照4.1.3谱图处理6“谱图计算”。7. 用来计算在当前显示的谱图中所选中的区域的面积，参照4.1.3谱图处理7“面积计算”。8. 计算磷光寿命。点击此按钮出现如图4-38所示对话框。图4-38(1) 输入输入数据起始值T1（终止值T2为默认），则时间段t = T2-T1被计算并显示。(2) 如需要打印则点击“打印”按钮。(3) 点击“关闭”以关闭计算窗口。(4) 计算结果单独显示出来（注意：只有测量的数值为衰减趋势时才可计算磷光寿命，否则会提示“不能计算”提示），9. 恢复数据

41、处理前的状态（未进行平滑、求导时的状态）。4.2.4 其他功能 1. 用来恢复初始状态时的谱图（未进行满刻度显示）。2. 满刻度显示（将所有谱图全部显示）。3. 查找模式。4. 显示网格。5. 当视图里有多条谱线时显示明亮，用来设置谱图是否显示。6. 用来更改名称和备注信息。7. 用来计算信噪比（包括p-p和RMS两种计算方式）。(1) p-p计算方法： = .a(2) RMS计算方法：.b式a中的m表示以10s为间隔，设置扫描时间内所得到的时间段数。如以扫描120s为例，则m=12。、分别为每段间隔内采集得到能量最大值和最小值。式a、b中的n均表示设置扫描时间内扫描采集的所有数据点数。为每个

42、数据点对应的能量值。注意：只有当时间扫描的荧光强度呈单调变化趋势时才可计算信噪比，否则将出现以下错误提示。图4-398. 用来返回扫描界面。4.3 光度测定这一节详细介绍了用测量标准样品拟合出来的标准曲线来测量计算样品浓度的方法。4.3.1 创建一个分析方法在测量之前要设定分析条件。有两种方法建立分析方法。l 从“工具”菜单中，选择“配置”命令。l 点击按钮，一个对话框将显示，如图4-40：图4-401. 通用(1) 扫描类型：在这里，选择光度测定。(2) 操作员：输入一个操作员的名称。(3) 注释：对测量条件的解释或注释。2. 定量当选择定量法标签时，一个窗口将显示，如图4-41所示：图4-

43、41(1) 定量法：本仪器创建标准曲线的方法为波长。(2) 标准类型：l “无”：不使用标准曲线时选这个模式，为波长定点测试，最多可选择并设定6个测量波长，测量完毕后不显示谱图，只显示在各波长下的荧光/磷光/化学发光强度。l 1次方曲线：这是最常用的标准曲线，标准曲线的公式如下：x=A1y+A0 在这里，x是样品浓度，y是样品的数据。如图4-42：图4-42 1次方曲线l 2次方曲线：使用二次方程来创建标准曲线，如图4-42。标准曲线的公式如下：x = A2y2+A1y+A0 在这里，x是样品浓度，y是样品的数据。图4-43 2次方曲线l 3次方曲线：使用三次方程来创建标准曲线，如图4-44。

44、标准曲线的公式如下：x = A3y3+A2y2+A1y+A0 在这里，x是样品浓度，y是样品的数据。图4-44 三次方曲线l 折线：标准曲线的创立是通过连接各线性样品的测量值或输入值。如图4-45。当与浓度值相对应的光度值是单调递增或单调递减时，创建这种标准曲线是合适的，可以观察荧光/磷光/化学发光随浓度的变化趋势。图4-45 折线法(3) 手工校准：选中此项时，通过输入因素建立标准曲线，因数（A0,A1,A2,A3）会随所选择的标准类型的变化而变化。可手动输入因素值建立标准曲线（一次方，二次方或三次方），此时标准曲线为已知，测量时将直接测量样品并利用此处建立的标准曲线计算样品浓度。(4) 强

45、制过零：为了使拟合曲线强制过零，可选择此项。(5) 测量波长数：当“标准类型”是“无”时，高达6个波长可被选择。在选择其他校准类型时，最多3个波长可被选择。计算方法如图4-46：l 单波长计算这是一个最通用的方法 ，如图4-46a所示，一个波长被指定，其浓度从那时的数据I1来确定。a b c图4-46l 双波长计算 图4-46b所示，假设I1和I2是在两个不同波长下的吸光度值，其浓度可通过下列等式得到的I来计算，I = I1-I2。l 三波长计算 图4-46c所示，假设I1、I2、I3是在三个不同波长下的数据值，可通过下列等式得到I值来计算其浓度值。其中，必须遵循WL1<WL2<W

46、L3或WL1>WL2>WL3。3. 仪器当点击仪器标签时，一个窗口将显现，如图4-47所示，图4-47(1) 数据模式： 选择下列数据模式中的一种。发光型用于测量生物发光和化学发光，仅样品侧的信号可获取，而无须执行比率光度值法。l 荧光强度 l 发光强度 l 磷光强度（F-280型和F-320型不具有此项功能） (2) 斩波频率（F-280型和F-320型不具有此项）：仅当数据模式为“磷光强度”时需要设置斩波频率，可设置40，20，10Hz。(3) 波长：为创建一个标准曲线选择波长类型。l 激发光波长固定 l 发射光波长固定 l 同时固定(4) 测量波长数： 选择标准类型为无时，测

47、量波长数最多为6，选择其他标准类型时测量波长数最多为3。(5) 激发狭缝：为激发光侧选择狭缝宽度，单位：nm。(6) 发射狭缝：为发射光侧选择狭缝宽度，单位：nm。(7) 增益：通常情况增益为1，信号较弱时，选择2-4档可将测量信号放大。(8) PMT电压： 用于控制光电倍增管检测器电压的功能，选择下列一个值l 250V l 400V l 700V l 950V(9) PMT电压0-1000V当选择此项时，PMT测量电压可在0-1000V之间微调。(10) 曝光时间：在规定的时间内获得平均的数据值，从而获得稳定的数据。输入范围：0.1至10.0s。(11) 延迟：在按压测量按钮之后，延迟一段时

48、间，测量才开始，它用于稳定温度等，在重复测量中，这个时间是直到第一测量开始的时间，延迟时间对于第二次和顺序测量是无效的。输入范围：0至9999s。4. 标准（注意选择手动校正时不出现此标签）点击标准标签，样品表窗口被打开，如图4-48所示，直接输入样品数点击“更新”建立样品表或点击“插入”以增加样品数。图4-48(1) 样品表：样品表为样品测量或为标准曲线的制备给出一列标准，这个表包含下列各项。l 序号：这是给每个样品的序号。l 样品名称：输入样品名。l 注释：给每个样品进行注释。l 浓度：进入样品浓度。(2) 更新： 通过点击这个按钮，按照插入样品数设定，此前输入的样品名，注释等都被清除。(

49、3) 插入： 当初始屏幕被打开时，插入按钮就被激活，点击这个按钮，以便在样品表的末尾插入数据。(4) 删除： 点击样品号前的“”标志选中要删除的样品，再点击删除按钮，这个样品就被删除。5. 显示当选择显示标签时，一个窗口将出现，如图4-49所示。图4-49(1) 自定义坐标轴l Y-轴最大值在监控窗口上为Y轴输入一个最大的值。l Y-轴最小值：在监控窗口上为Y轴输入一个最小的值。(2) 在数据获取之后，打开数据处理窗口：在样品测量之后，选择数据是处理还是不处理，当选择处理时，在测量结束时，自动打开数据处理窗口。在这个窗口内可以进行数据处理，如峰检测等。(3) 数据获取后的打印报告： 选择样品测

50、量之后是打印还是不打印，当选择打印时，测量之后，将自动打印，在报告标签下的设定项目将被打印。当这一项不被选择时，数据处理能够执行，通过文件打开来读取文件。6. 打印当选择打印标签时，一个窗口将显现，如图4-50所示。设置打印内容，字体等，点击确定，具体设置参见4.1.1-4。图4-504.3.2 测量样品1. 标准类型为“无”的时候测量方法设定完毕，进入光度值测量界面，如图4-51：图4-51(1) 将样品放到指定的样品槽，点击菜单里的“工具”“扫描”（或点击测量按钮）。测量方式为“无”的时候不建立标准曲线。只进行样品测量，因此此时无标准曲线显示。(2) 点击按钮进行样品测量。测量完毕后，得到

51、的数据将自动显示在视图中，如图4-52所示： 图4-52(3) 点击结束本次测量。进入谱图处理界面，测量结果显示在工作区，如图4-53：图4-53(4) 如需要扫描背景，请点击。(5) 如需设置快门 “开”或“关”可通过进行切换（F-280型和F-320型无此项功能）。2. 标准类型为“手动校正”的时候 测量方法设定完毕，进入光度值扫描界面，界面分为两部分，如图4-54：曲线信息区样品信息区图4-54(1) 将样品放到指定的样品槽，点击菜单里的“工具”“扫描”（或点击测量按钮），此时默认标准曲线已知（系数为手动输入，参见4.3.1.定量标签的设置），手动输入的曲线系数显示在曲线信息区。(2)

52、点击按钮进行测量，直接进行样品测量并计算浓度，测量完毕后，得到的数据（激发/发射波长、校正值、浓度）将自动显示在视图左侧样品信息区，如图4-55所示： 样品信息区曲线信息区图4-55(3) 如需要扫描背景，请点击。(4) 如需设置快门 “开”或“关”可通过进行切换。(5) 测量完成，点击结束本次测量。如图4-56：。 图4-563. 标准类型为其他四项的时候测量方法设定完毕，进入光度值扫描界面，此时浓度工作区分为四个区域，如图4-57所示曲线信息区曲线显示区样品信息区标准样品信息区图4-57(1) 将样品放到指定的样品槽，点击点击菜单里的“工具”“扫描”按钮或测量按钮，出现如图4-58的提示：图4-58(2) 选择需要进行的测量方式，点击确定，出现图4-59的提示，确认样品放入样品槽后点击确定。图4-59(3) 第一个标准样品的数据采集完毕后，