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文档简介

1、王媛媛yywangdgmai堂提问每人2-3个问题；权重：30%总结报告PPT，5人一组，10分钟；权重：30%实验报告权重：40%要求：规范的论文格式：中、英文标题和摘要；前言；资料与方法；结果；讨论；参考文献。PPT：照片、视频展现个性，潮！Day 0: 预备实验资料Day 1: GFP表达质粒的提取；Top 10感受态细胞的制备；GFP表达质粒转化Top 10。Day 2: GFP表达菌株扩展培育；GFP的诱导表达。Day 3: 表达菌株的搜集、破碎；硫酸铵沉淀所用浓度确实定；硫酸铵沉淀GFP；疏水层析。Day 4: 离子交换层析；透析；凝胶过滤层析。Day 5

2、: SDS-PAGE；染色；脱色，察看结果。记得带照相机 ！鸣谢：生命学院生物科学104班邹兵 周嘉 赵琅李运彰 汪源原核：E.coli真核：Yeast Insect mammalsVector: pET series, pGEX series, gateway series,pMAL, pTWIN I, pETDuet, et. al.BL21(DE3), BL21(DE3, pLysS), Origami, Rosetta, Rosetta-gamiTop10, HB101, C41/C43能否用BL21(DE3)表达pGLO？能否用Top10表达pET32a？OD600=0.6-0.8，参与诱导剂；OD600=1.2-1.4，收获菌体；诱导剂用量 IPTG: 0.2mM; 0.5mM; 1mM诱导温度 20；25/28 ；37 如何留样能在一张SDS-PAGE胶图中(10-12 wells)表达诱导的效果、(NH4)2SO4

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