微生物的新陈代谢

1、哥鱼Y斗捏大学微文物学徜件拈永勤Mnlv«rally of *cl«nc«，T*cKnoloay 3.3库/JBlu品辨3. 1微生物的营养营养(nutrition)：生物体获得和利用营养物质的过程*In 3.ZI微生物的营养美曳3.1.2微生物的营养要素3Z3澈生物的培养基3.1.4营养物质的运输3.L1微生物的营养类型 1.自养菌（自养型autotroph）：能完全以简单的无机物为营养物质合成复杂的有机物，供自身生长发育需要；并通过无机物氧化或光合作用来获取能量。如硝化细菌、红螺细I2 .异养菌（异养型heteroptroph）：不能利用简单的无机物，而必须利

2、用有机物才能满足其生长发育的需要，并通过有机物的氧化获取能量。包括寄生菌（saprophyte）和腐生菌（parasite）两类。3 .L2微生物的营养要素戏营养的作用：微生物的营养物质应满足机体生车 长、繁殖和完成各种生理活动的需要，表3.1.1细菌、酵母菌和霉菌的元素组成元素细菌酵母菌等菌兀素细菌酵母菌莓菌碳50-5345-5040-63钠0.5-1.00.01-0.010.02-0.05氢77钙0.01-1.50.1-0.30.1-1.4氮12-157.5-117-10镁0.1-0.50.1-0.50.1-0.5磷2.0-3.00.8-2.60.4-4.5氯化物0.5硫0.2-1.00.

3、01-0.240.1-0.5铁0.02-0.20.01-0.50.1-0.2钾1.0-4.51.0-4.00.2-2.5营养的作用1.形成结构一参与细胞组织提供能量一机体进行各种生理活动所需要的能量调节作用一构成酶等活性成分和物质运输系统3.1.2微生物的营养要素碳源、氮源、无机盐、生长因子、水分质r必需营养物质:营 -福In >非必需营养物质：可被细胞利用，但缺乏却不影响生长3.1.2.1 碳源(Carbon source )碳源：凡能提供微生物营养所需的碳元素的营养源碳占细胞干重的50%作用:1 .合成菌体的含碳物质及其骨架2 .为微生物代谢提供能量微生物的碳源1类型元素水平化合物水

4、平培养基原料水平C H- O- N X复杂蛋白质，核酸等牛肉膏、蛋白豚、花 生饼粉等有机碳CHON多数氨基酸，简单蛋白质 等一般氨基酸、明胶等CHO糖，有机酸、醇、脂类等葡萄糖、蔗糖、各种 淀粉、糖蜜、脂肪酸 及有机酸等CH煌类天然气、石油及其不 同偏分、石蜡油等*无机碳coco2co2-F:oxNaHCO3> CaCC>3等NaHCO3> CaCC>3、白 垩等礴AI点 3122 氮源(Nitrogen source )t 氮源：凡是提供微生物生长繁殖所需氮元素的营养源 ffil: 1.用于合成细胞中的含氮物质如蛋白质、核酸及酶等对微 生物的生长发育极其重要 2.极少

5、数自养微生物用作能源约占细胞干重的 10 %氮微生物:能利用分子态氮合成自己需要的氨基酸和蛋白质。如根瘤菌、自生根瘤菌氨基酸自养型生物：不需要氨基酸为氮源，而能将非氨基酸类的简单氮源（如尿素、镀盐、 硝酸盐和氮气）自行合成所需要的一切氨基 酸。一般，所有绿色植物和某些微生物属此 类。氨基酸异养型生物：凡需要从外界吸收现成氨基酸作氮源的微生物。一般，所有动物和大量 异养型微生物属此类。i 3.L2.2 氮源(Nitrogen source )女微生物利用何种氮源取决于自身酶类的还原能力对R-NH2的利用脱氨，直接利用 转氨基W oH®6c-CH2CH2CCOOH丰；A大6WW 3对 a

6、 一酮戊二酸o+nh3+ 2H NADPH谷氨酸3122 氮源(Nitrogen source)类型元素水平NCHOX化合物水平复杂蛋白质、核酸等有机氮NCHONH尿素、一般氨 白质等nh3.镂盐等受、简单蛋培养基原料水平牛肉膏、酵母膏、饼粕 粉、蚕蛹粉、等 尿蠢蛋白陈、明胶、 三米浆等无机氮NO硝酸盐等(NH4)2SO4KNO3 等空气号饼掷粉包括：黄豆饼吩比生饼粉/棉籽饼粉等喘、迟效嬴血和速效氮流一二署常合并使用有机氮源的成分较复杂，是良好的营养物质£3.L2.3无机盐（矿质元素）无机盐包括：钾、钠、钙、镁、铁、硫、磷、锌、镒等多 种元素 作用：1 .构成细胞的组成成分2 .调节

7、细胞渗透压、酸碱平衡和氧化还原电位3 .激活或维持酶的活性4 .某些元素如硫、铁等可以供作自养微生物的能源 合成培养基中常用：MgSO4、K2HpOq CaCl2等3.L2.3无机盐（矿质元素）r大量元素：Fe Mg Ca S P K 一芽抱杆菌形 ,一成芽抱时在酶或辅酶中发挥作用微量元素：Cu Zn Co Mn Mo无机盐及其生理功能元素化合物形式生理功能磷KH2Po4, K2HPO4核酸、核蛋白、磷脂、辅酶及ATP的成分 作为缓冲系统调节pH硫(NH4)2SO4, MgSO4含硫氨基酸、维生素的成分，谷胱廿肽可 调节氧化还原电位镁MgSO4己糖磷酸化酶、异柠檬酸脱氢酶、核酸聚 合酶等的活性

8、中心组分，叶绿素成分钙CaCl2, Ca(N03)2酶的辅助因子，维持酶的稳定性，芽泡及 某些抱子所需，建立细菌感受态所需钠NaCl细胞运输系统所需，维持渗透压，酶的稳 定性钾KH2Po4, K2HPO4酶的辅助因子，维持渗透压，嗜盐细菌核 糖体的稳定因子铁FeSO4细胞色素及某些酶的组分，铁细菌的能源 物质3.1.2.4生长因子是指某些微生物生长所必需，需要量很小，而 自身又不能合成的一类有机物质。 一般包括：维生素、喋吟和嚏咤碱三种类型具体种类和数量，随微生物种类而异3.1.2.5 水水是细菌细胞重要组成成分，在代谢中占有重要地位 占细胞重量的7090% 作用:1.良好的溶媒作为机体内一切

9、生理生化反应的介质2 .微生物通过水对物质进行吸收、渗透、分泌、3 .水能有效地散发代谢过程中释放的热量，达到调节细胞温度的作用4 .直接参与生理生化反应礴AI水分活度:水分活度：是指相同温度、压力下，溶液中水 的蒸汽压和纯水的蒸汽压之比P溶液 w= P水纯水的a w = 1，0.91几类微生物生长的水分活度细菌酵母霉菌蕈状芽抱杆菌0.99枯草芽泡杆菌0.95大肠杆菌0.92八叠球菌0.92金黄色葡萄球菌0.87耐盐细菌0.75啤酒酵母0.94刺状毛霉0.93产肮酵母0.94高渗酵母0.65青霉0.8O9 黄曲霉0.9曲霉0.84耐旱真菌0.60.880.80I Return3.L3微生物的培

10、养基右IU 培养基(culture medium )：通常指人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质。3.L3.1培养基的配制原则及方法3.1.3.2培养基的种类31.3.1培养基的配制原则及方法:1!察氏培养基酵母菌一麦芽汁培养基1.满足微生物的营养需要细菌营养肉汤培养基或肉汤蛋白豚培养基（蛋白豚、牛肉膏、NaCk水、琼脂，pH7.6-7.8） 放线菌.高氏一号培养基（可溶性淀粉、KNO3> K2HPO4、MgSO4> FeSO4> 水、琼脂，pH7.2-7.4：（蔗糖、NaNO3. K2Hpe）4、MgSO4> KCk FeS（）4琼脂、水、pH自然）

11、2.营养物的浓度及配比应恰当碳氮比（C/N）：培养基中元素碳与氮的比值-还原糖/粗蛋白罪细菌：5/1飒Y 霉菌：10/1In 碳氮比要适当，过小，生长过于旺盛；过大,则生长过慢，不利于提高产量13.物理化学条件适宜於本PHI最适生长pH、代谢产物改变pH方法：磷酸盐缓冲液6小7.6（KH2Po»K2Hp（%缓冲液PH为647.2）、碳酸钙水分活度渗透压氧化还原电位 4 .根据培养的目的目的：培养菌体、积累代谢产物、实验 室培养、大规模培养3 生产用培养基：以粗代精，以废代好瑜Tn >城如 5 .要求无菌状态： EDTA防沉淀消泡剂*In 332培养基的种类I因考虑的角度不同，可

12、将培养基分成以下类:布根据对培养基成分的了解程度In >成：r天然培养基|合成培养基 1半合成培养基3.1.3.2培养基的种类液体培养基*根据培养基物理状态半固体培养基In 固体培养基3.1.3.2培养基的种类（种子培养基*根据培养基的目的4发酵培养基繁殖培养基In I保藏培养基礴AI根据培养基的特殊用途福In >3.132培养基的种类增殖和保存培养基基本培养基加富培养基选择培养基鉴别培养基测定生理生化的培养基家.合成培养基（syntheticmedium）：使用成分完全了解的化学药品配制而成的培养基优点:成分已知、精确、重复性好价格较贵、微生物生长较慢用途:用于实验室进行微生物生

13、理、遗传育种及高产菌种性能的研究。.天然培养基(Natural medium)：凡是利用生物的组织、器官及其抽取物或制品配成的培养基优点：配制方便、经济，营养丰富 缺点：化学成分不清或不稳定出常见天然培养基：麦芽汁、鱼粉、数皮、玉米粉、叫 花生饼粉、玉米浆、马铃薯粉等布实验室常用：牛肉膏、蛋白豚、酵母膏6).半合成培养基(Semide,ned medium )：O由部分天然材料和部分已知的纯化学药品组成的培养基;优点：配制方便、成本低、微生物生长良好点发酵生产和实验室中应用的大多属此类Tn >成：.液体培养基(Liquidmedium)： 各营养成分按一定比例配制成的水溶液或液体状态的培

14、 养基。也叫培养液 特点：营养素均匀分布，可通过搅拌或振荡增加通气量也用途: y 工业上绝大部分发酵都采用液体培养基 实验室中获取大量菌体5 -微生物的生理代谢研究AI点 .半 固体培养基(Semi-solid medium )： I2 培养基在容器放倒时不致流下、但在剧烈定震荡后则能破散的状态。琼脂加入量0.20.7% 用途：观察微生物的运动特征分类鉴定 噬菌体效价测定 保存菌种固体培养基(Solid medium)：指液体培养基中加入一定量的凝固剂而成的固体状态的培养基.或固体营养物(如款皮、米糠、土豆块等)与水和盐 等混合构成的疏松状培养基一固体培养基固体培养基的用途:菌种分离、鉴定、菌

15、落计数、检测杂菌、选种、育种、菌种保藏、抗生素等生物活性物质效价测定、获取真菌抱子等工业发酵 固体培养基中常用的凝固剂：琼脂、明胶、硅胶 琼脂的特点：熔点96C,凝固点40 C,多聚半乳糖硫酸酯加热100C即可融化，冷却至45C以下即可凝固理想的凝固剂所应具备的条件:不被微生物液化、分解或利用 在微生物生长的温度范围内保持固体状态，凝固点温度对微生物无害*In 不会因消毒、灭菌而破坏配制方便、价格低、透明性好基本(或基础)培养基(Minimal medium, MM)：又称最低限度培养基，指能满足某菌种的野生型菌株最低营 养要求的合成培养基 完全培养基(Complete medium, CM)

16、：在基本培养 基中加入富含氨基酸、维生素、碱基等生长因子的营养物 质(如蛋白豚、酵母膏等)即可满足各种营养缺陷型微生物的生长需求，这种培养基称为一补充培养基(Supplement medium, SM)：在基本培养 基中有针对性地加入一种或几种营养成分，以满足相应营 养缺陷型生长，这种一加富（或营养）培养基:是指在普通培养基中加入血、血清、动植物组织液或其它营养物的一类营养丰富的培养基，专供 营养要求较高或有特殊营养需求的细菌生长。.富集培养基（选择性培养基）根据某类或某种微生 物的特殊营养需求，或 对某些物理、化学条件 的抗性而设计的培养基用途：用于分离培养某 类微生物Crystal vio

17、let and bile salts inhibit gram-positive bacteria. Lactose and the pH indicator neutral red (red when acidic), identify lactose fermenters as red colonies and nonfermenters as light pink. Most intestinal pathogens are nonfei nienters and hence do not produce acid.礴AI(11)伊红-美兰乳糖培养基鉴别培养基：在基础培养基中加入特殊底物

18、和指示 剂，用于测定微生物生长过程中的特殊代谢产物以达亚硫酸盐甘氨酸琼脂培养基一金黄色葡萄球菌）EMB大肠杆菌EMB产气肠杆菌 铜绿甲单胞菌PSP培养基FIGURE 6.8 Bacterial colonies on several differential media, (a) Stupln/lococcus aumis on tcllurite-glycine media. (b) Escherichia coh on EMB. (c) Eutciobacter aeroencs on EMB. (d) The pigment produced by Pseudomonas aerugin

19、osa on PSP agar fluoresces under ultraviolet light.3d质"简单扩散促进扩散主动运输I基团移位简单扩散离子不带电荷的H*、NJ、IC、C，大的极性分子H8； , Ca? , Mg? ,葡萄糖，蔗糖不带电荷的 小的极性分子 脉.甘油， H2O,CO2疏水性分子苯，O2,N*人工膜>ao-oc£utb 4 scevM -o>*b，>c> ,Toc-O 77促进扩散真核生物糖分的运输主动运输W细胞内j膜1细胞外二T5/ 7物无与载体嘉/ /的亲和力看?么 T细胞内膜细胞外 物质与载体 / / 的亲和力/1

20、感，基团移位礴AIHPr丙酮酸PHPr四种运输方式比较简单扩散促进扩散主动运输基团移位运输方向高f低高f低低f高低f高i载体蛋白 £+:消耗能量C.+:化学修饰 - - - +;运送速度 9 C慢快快快希时内外浓月t内外相等内外相等内部高得多内部高得多3.2微生物的生长生长：微生物在适宜的条件下，不断吸收营养物质，有序地增加生物细胞中的全部组分，从而使细胞的重量和体 积不断增大，这一过程就是生长繁殖：微生物细胞分裂造成个体数量的增加，这一过程就是繁殖虽然生长和繁殖是不同的概念，国因为微生物个体细胞的生长时间较短，很快进入繁殖阶段，生长和繁殖是很难分的，另外，由于测量的局限，常 以细胞

21、数目增加来作为单细胞微生物生长的指标，这 时所指的生长实际上是群体的生长。礴AI321微生物生长所应具备的条件 322微生物的生长测定323微生物的群体生长规律324微生物生长与产物形成的关系321微生物生长所应具备的条件:营养物质、温度、气体、酸碱度321微生物生长所应具备的条件温度常温度：和最适生长温度：某菌分裂代时最短或生长速率最高时的速率微生物生长温度微生物类别生长温度细菌：嗜温菌：20-45C-嗜冷菌：-7.5-20C嗜热菌：45-90真菌放线菌0-37 20-65 最适生长温度37 15 22-30 28-32 321微生物生长所应具备的条件.气体定 321微生物生长所应具备的条件

22、一温度生长温度的三基点：最低生长温度、最高生长温度和 最适生长温度这三个指标构成。表341微生物各生理过程的不同最适温度菌名生长温度（）发酵温度（）累计产物温度 （）嗜热链球菌374737乳酸链球菌3440产细胞2530产乳酸30灰色链球菌3728北京棒杆菌3233-35丙酮丁醇梭菌3733产黄青霉302520根据微生物与氧的关系可把微生物分成:好氧菌（aerobe）和厌氧菌（anaerobe）两类.专性好氧菌：必须在有氧的条件下才能生长，有完整的呼吸链。在正常大气压下进行好氧呼吸产能：在有氧或无氧的条件下均能生长，但前微生物与在有氧的条件下生长情况更好氧的关系微好氧菌：只能在较低的氧分压下（

23、0010.03Pa或I 3%-10%V/V）生长的微生物耐氧菌：在分子氧存在下进行厌氧生活只能以发酵I厌氧菌:产能，但分子氧无毒害（专性）厌氧菌：只能生长在无氧或基本无氧条件下，氧剧毒太.342氧气厌氧菌的氧毒害机制:金与细胞内缺乏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧 化氢酶有关，以消除胞 内的超氧阴离子自由基。好氧菌兼性厌氧菌 微好氧菌 耐氧菌 厌氧菌图341五类对氧关系不同的微生物在半 固体琼脂柱上的生长状态3.4.3 pH pH三基点：最高、最适、最低、不同种类微生物有其最适生长PH嗜碱微生物（硝化细菌）、耐碱微生物（链霉菌）；嗜酸微*In 生物硫杆菌属）、耐酸微生物（乳酸杆菌，醋酸杆菌）二、

24、同一微生物在其不同的生长阶段和不同生理、生化过程有不同的最适pH表342几种抗生素产生菌的生长与发酵的最适pH抗生素产生菌生长最适PH合成抗生素最适PH灰色链霉菌6.3-6.96.7-7.3红霉素链霉菌6.6-7.06.8-7.3产黄青霉6.5-7.26.2-6.8金霉素链霉菌6.1-6.65.9-6.3龟裂链霉菌6.0-6.65.8-6.1灰黄青霉6.4-7.06.2-6.53.4.3 pH三、胞内pH偏中性，胞外pH随其代谢产物的pH而变化 L胞内：DNA、ATP、叶绿素对酸性敏感；RNA、磷脂对碱性敏感 2.胞外:糖类发酵、氧化有机物I脂肪水解有机呼培养基内 中性成分脱竣(NH4)2SO

25、4 .镂离子选择吸收. h2SO4无机:I NaNO3 N。逊择吸收a NaOHA胺类四、微生物培养过程中，调节pH的方法:治标、治本(调节C/N比)322微生物的生长测定微生物的生长测定方法显微镜计数法测定细胞数全细胞计数法染色涂片 计数器测定 比例计数电子计数器计数法I比浊法I活细胞计数法平板计数法膜滤器法/细胞重量法一一干重法、湿重法菌丝长度测量法测定细胞量Y细胞堆积体积测量法细胞总氮量或总碳量与生长有关的代谢功能的测定咨数器测定法盖玻片有凹槽并刻有小格方格中有11个细胞方格数为16盖玻片每毫升样品的含菌量=1 1 X25 X10 X1000样品加此处mm=2.75 X106每个大方格面

26、积为1 mm图321采用血球计数板测定细胞个数的程序 A* , M哥鱼Y斗捏大学微文物学徜件拈永勤Mnlv9rally of Scl«nc«，T«»cKr»oloayPefroff-Hauser counting chamber电子计数器计数法只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌端原理：在一定范围内，悬液中单细胞的数量与光密度成正 戏比。忑 、工rn 八rfc、i?a-u r/、/- r r> s*In 特点： 1.适合悬液的单细胞数量测定，菌液浓度不得 低于107个/ml 2.简便快速 3.微生物细胞外的物质不得对选用的波长范围 有吸收

27、右平板计数法:有涂布法和混匀浇注法两种方法礴AI L涂布法：将发酵液稀释后，涂布在固体培养基表面，经培养后计数子 2.混匀浇注法：将一定量的菌悬液与培养基在培 ,养皿中混匀，凝固，经培养后计数然猿二I:.50, 000个细菌/ml9ml水9ml水1： 101 ： 1001 .涂布法/一菌落明显，分布于表面，但无法涂布均60.1 ml1 ml ofdilution加0.1ml菌液Solid agar：MJL«-；r .!, 10ml1:10,000 dilution ofbacterial culture inbroth1 ml of dilution added to melted

28、agar 2 .混匀浇注法诲g球燃密西国匕菌落分布均匀，但菌落较小彻底混合倒平皿57菌落形成单位(CFU/ml)：做三个平行样，培养后计数 (3 0.3 0 0 CFU)8 3个菌落81个菌落特点:L适合于单细胞微生物计数 2.活菌计数 3.培养基条件适宜3.222测定活细胞数的方法In 膜滤法适用于菌浓度较低的水或空气3.2.2.3测定细胞量的方法（间接£法）些根据细胞组分含量进行估算，也可根据培养基的消I 耗或代谢产物的变化等进行估算：干重测定法:一般细胞干重为细胞湿重的10%-20%¥ 特点：£1 .用于单细胞和多细胞微生物的生长测定埃2.除细胞以外的固体颗

29、粒会干扰测定省3.2.2.3测定细胞量的方法（间接?法）41菌丝长度测定法:方法：将真菌接种于固体培养基上，位于平皿的中央，定时测定菌落的直径或面积特点： 1 .适合丝状真菌的生长测定 2 .测定不够全面 .细胞堆积体积测定法:在一定条件下离心，根据堆积体积计算含困里/ 32.2.3测定细胞量的方法（间接法）戏翠测定细胞总氮量或总碳量5 -与生长有关的代谢功能的测定323微生物的群体生长规律323.1分批培养（间歇培养） 32.3.2连续培养323分批培养（间歇培养）分批培养微生物在化学成分一定的培养基中进行培养In 细菌的生长曲线生长曲线?繁殖曲线?细菌是单细胞微生物/细菌的繁殖也就是群体的

30、生长，所以繁殖曲线又称生长曲线有关细菌数和细吊细胞浓度：个/ml 细菌密度：干重/ml 分裂率v ： /h邛倍增率口 ： /h ：代时g： h安倍增时td： h量的术语(pl58)微生物的生长规律研究方法个体生长一电镜观察细胞的超微切片想实验方淬探讨5群体生长一同步培养技术一同步培养物富同步培养物：由细胞周期中处于同一阶段的细胞构成的培养物同步化方法»时间一选择法膜洗脱法区带离心法、诱导法温度诱导法营养诱导法特点：同步生长只能维持几代礴AI®照半期图324细菌的生长曲线2-延迟期；3、4一对数生长期；5稳定期；6一衰亡期>ao-oc£8b 4 tuc

31、1;-u* o>*w，>-ano，ve£o 显题於太厚题展却也如“戏年啕w匕nQ一 E、5a禄玄象警用点加速期阻滞期0090807060508-8生长曲线A - B.延迟期；C.对数生长期m_工稳定期;F,衰亡期;I ,活菌数，I总萧数（光密度）3.2.3微生物的群体生长规律眩L延迟期(lag phase):微生物被接种到培养基后的一段适应期 厚嚏特点：个1.此期细胞数目几乎不增加送2.菌体内含物质量显著增加，合成代谢机能活跃，RNA含量增高 外科对不良条件(如抗生素、盐、热、紫外线和X光等)反应敏感超影响延迟期长短的因素:着种的群体生长年龄。对数生长期的菌种接种于培养基

32、，其空;接种龄：即3子代生长的延迟期较短接种量：接种量大，延迟期较短，工业上常用的接种量为1： io一培养基成分：发酵培养基的成分应尽量接近种子培养基2.对数生长期(Log phaseJExponential growth phase):是指在生长曲线中，紧接着延迟期的一个细胞以儿何级数速度分裂的一段时期。特点: 生长速率常数最大飒细胞进行平衡生长，菌体内各种成分最为均匀川In 酶系活跃，代谢旺盛影响因素:菌种营养成分在较低浓度范围内，影响菌体生长速率和菌限制性营养物质（因子）：营养物浓度端培养温度噪悔I体产量的营养物质称为限制性蒙翻康 仅最大收获量受影响 m向时间图325营养物浓度对生长速度

33、和菌体产量的影响323微生物的群体生长规律 3.稳定期(stationary phase):又称恒定期或最高生长期 在对数期的末期，繁殖率与死亡率逐渐趋于平衡活菌数基本保持稳定的阶段 特征： 菌体数处于动态平衡肪粒等，大多数产芽抱的细菌开始产芽抱学细胞分裂速度下降，细胞内开始积累内含物如肝糖、脂 X5 4代谢活动继续，并保持相当水平，此时期为最佳收获时 期，有的合成次级代谢产物如抗生素影响因素:菌种、培养条件等礴AI常 4 衰亡期(decline phase or death phase)：将稳定期的菌体继续培养，细胞的死亡速率将进一步上升并超过繁殖速率，体系中活菌数明显下降前特征：娜整个群体

34、出现负生长J 细胞内颗粒更明显，出现多形态、畸形或衰退形，芽抱4开始释放 花菌体死亡并伴随自溶，有的继续产生抗生素等次级代谢产物衰亡期时间较长，取决于菌种、培养条件等.丝状真菌的生长曲线: 一般没有典型的对数生长 期。C生长停滞期三个阶段迅速生长期衰亡期图326丝状真菌的生长曲线1-对应线性纵坐标（左）2-对应对数纵坐标（右）/ 3.2.3.2 连续培养(Continuous culture)是指不断补充新鲜培养基，排除含细胞及代谢产物的发酵液,以尽可能消除营养物质的不足及代谢产物的抑制作用。小时图8-12培养物对数生长期的维持图8-13恒化器1.盛无菌培养基的容器流速调节器:3 ,培养管,4

35、 .流出管；5.流出物T这夜格条相比今枇楮秦芯工业尘产上的优势高效，简化了许多单元操作，减少了非生产时间，提高了设备利用率 自控，便于利用各种仪表进行自动控制产品质量较稳定节省人力、物力3.2.4微生物生长与产物形成的关系微生物发酵形成产物的过程与微生物细胞生长的过程并不总是一致的（稳定期）（稳定期的后期或衰亡期）r抗生素生长激素/ 生物碱1维生素 色素毒素等氨基酸如：1 核甘酸J乙醇等礴AI3.3微生物的培养微生物培养：就是提供一个适宜特定微生物生长 的物理化学环境，使其大量地繁殖。微生物发酵：让所需的微生物大量繁殖并进而产 生大量目标代谢产物的过程称为微生物发酵培养和发酵两个概念通常是通用

36、的，但它们与生 物氧化中的发酵概念是截然不同的O3.3.1固体培养3.3. 2液体培养3.3. 3淬续培养3. 3. 4补加料培养3.3.1 固体培养(Solid-state culture):固体培养：就是利用固体培养基进行微生物的繁殖。尔用途：微生物鉴定；计数；纯化；保藏等Tn >城如331 固体培养(Solid-state culture) 3.3.L1实验室常见的固体培养:方法：斜面、穿刺、培养皿平板斜面接种培养:图331斜面接种和穿刺接种培养法斯利方叫原路拔出(b)穿刺接种培养:驷垂直式穿刺接种法礴Copyright © The McGraw-HII Companie

37、s. Inc. Perrrisson required for reproduction or display.Starting point(7) Final set of streaks made(6) Lcop is sterilized(1) Loop is sterilized(4) Lcop is sterilized(2) Loop IS inoculatedAgar containing nutrients(8)isoiaieo colonies develop after incubation(3) First set of streaks mace(5) Second set

38、 of streaks made3.3.1固体培养平板划线培养法:. (b)平板划线培养结果:在划线的起点菌落相互重叠，在划线的末端逐渐出现单菌落。aW图5 5.3平板划线法微生物的纯培养方法:*In （二）倾注平板法（三）稀释摇管法适用于厌氧菌（四）液体稀释法（五）单细胞分离法（六）富集培养法粘质沙雷菌叁3.3.1固体培养一对于厌氧菌的固体培养方法 琳I:1.常用一般方法：斜面培养法，其原理是焦性没食子酸和碳I酸钠粉末在水分子的存在下缓慢吸收氧气，放出二氧化X 碳，造成无氧环境。玻璃棒图333 一种厌氧菌的斜面培养方法橡胶塞-厌氧培养物-棉塞;吸氧反应QEfB.亚甲兰指示剂液体石蜡或凡士林琼

39、脂深层培养硫乙醇酸盐培养基试管封闭法猛3.3.1固体培养 2.一些专用的培养装置Himgate滚管技术图3.3.4Hungate滚管技术 中的厌氧试管的剖面图沫折前铝帽丁基橡胶塞折后铝帽塞入的橡胶塞无氧气相固体培养基厌氧菌单菌落3.3.1固体培养厌氧培养皿：如图335所示Bray 皿Spray 皿焦性没盒子酸图335三种厌氧培养皿厌氧罐螺旋夹钳催化剂粒带环形垫圈的盖厂/厌氧度指示剂（美兰）倒置的培养内含碳酸氢钠 和硼氢化钠图236厌氧罐的一般构造到真空系统真空罐中接种 过的培养基图556厌氧罐的一般构造一机械抽空换气式厌氧罐蹴制哥岛可技大学Molvralty of，TcKnoloay撤文物博谯

40、件拈永勤33L2生产中常见的固体培养好氧真菌的固体培养:小麦戴皮，维持水分含量40；0%,细菌和酵母菌无法>ao«oc£ulh 4 9uce>UM -o>sb，>-u在此条件下生长，因此， 生产实践中固体培养主要 用于真菌曲法培养:将接种后的固体基质薄薄地滩铺在容器的表面I冬1238迎风曲梢结构模式图特点：便于获得充分的氧12345678相fel气；及时释放热量1.天窗；2,曲室；3.风道；4.曲槽；3.曲料6 .篦架；7 .鼓风机；8 .电动机*332液体培养液体培养：将微生物接种到液体培养基中进行培养In 332实验室常见液体培养: 试管液体培养：通气效果较差，仅适用于培养兼性好氧菌以及进行各种微生物的生理生化实验 浅层液体培养：三角烧瓶中装入浅层培养液，适用于兼性耗氧菌 摇瓶培养：将装有液体培养基的三角烧瓶放在摇瓶 机上，以一定速度震荡培养。该法广泛用于微生物的生理生化实验、发酵和菌种筛选，也可用于种子培养。台式发酵罐:3.3.2.2生产中常见的液体培养:该法生产效率高，适合于自动化、机械化，是当前微生物发酵工业的主要生产方式 1.静置培养:如浅盘培养，适于厌氧菌如：酒精、乳酸等的发酵2.通气培养:如发酵罐深层培养适于好氧菌，如抗生素、氨基酸、核酸等的发酵窥镜排气管f 取样管