β-Actin和GAPDH简介

1、伕Actinp-Actin 简介Act in即肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。同时Acti n在细胞分泌、吞噬、pActi n移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的， 包括 askeletal muscle actin , acardiac muscle act in , asmooth muscle act in，禾口 ysmooth muscle actin;其余两种广泛分布于各种组织中，包括pactin( -rpn-muscle)和ynon-m

2、uscleactin。不同的actin之间同源性大于 90%，但在 N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal 常被用作actin的抗原。p-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要 蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能，分布广泛。pActin用途pActin是PCR常用的内参，pActin抗体是 Western Blot很好的内参指数。内参即是内 部参照(Internal Control ),对于哺乳动物细胞 表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。 它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。常用 的蛋白

3、质 内参有细胞骨 架蛋白 beta-actin 或 beta-tubuli n 和 GAPDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)等。因此p-Actin 抗体、pTubulin 抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。pActin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。Beta-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。伕actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。在用

4、作Western的参照时，Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。应用学科应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；氨基酸、多肽与蛋白质（二级学科）定 义2:真核细胞中含量丰富， 构成肌动蛋白丝的一种蛋白质。以单体和多聚体两种形式存在。应用学科：细胞生物学（一级学科）；细胞化学（二级学科）GAPDH一 概述GAPDH 或 G3PDH 是甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文缩写。该酶是糖酵解反应中的一个酶，

5、由4个30 40kDa的亚基 组成，分子量146kDa。该酶基因为看家（housekeeping ）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质 表达量一般是 恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提total RNA , poly（A）+ RNA , Western blot等实验操作的标准化的内参 。GAPDH结构图常用的内参有 ，ACTB （ 3-actin、3-肌动蛋白）、GAPDH或18S等。目的是在于避免RNA定量误差、加样 误差以及各 PCR反应体系中扩增效率不均一、各孔间的温差等所造成的误差、这些都是看家基因，在

6、各个组织中的表达量相对稳定，其中18S同整个基因谱有关（负责装配），它在总RNA中占的比例最高。转染了 GAPDH siRNA.jpg转染了 GAPDH siRNA的Hela细胞转染了 GAPDH相关siRNA的HeLa细胞在转染后 48小时后不断增殖。 红：被标记 的siRNA ;蓝：被染色的细胞核；绿色：GAPDH 蛋白；（这些si RNA锐博生物均可提供）阴性对照（scrambled siRNA ）的导入（左）对 GAPDH 蛋白的表达没有影响，不过 若转入一个以 GAPDH （右）为靶标的siRNA，则会导致 GAPDH蛋白表达水平的急剧下降。二GAPDF作为内参 GAPDH （甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与 糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa 的亚基组成，分子量 146kDa ,检测条带大约在36kDa 。 GAPDH 基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作 Western blot 蛋白质标准化的内 参。因为GAPDH 作为看家基因在同 种细胞