齐鲁细胞DC-CIK细胞治疗手册-0628

1、一、DC-CIK简介树突状细胞（Dendritic Cells，DC）源自骨髓中的前体细胞，是已知机体内抗原呈递能力最强的细胞，比普通抗原呈递细胞强1000倍。它在负载肿瘤抗原后，能刺激T淋巴细胞分化为具有抗肿瘤活性的细胞毒性T淋巴细胞，对肿瘤细胞实施特异性杀伤。CIK（Cytokine Induced Killer cells，CIK）是从患者自体外周血中分离单个核细胞，经过体外激活扩增培养，得到的一种在生理条件下能够杀伤肿瘤细胞的细胞群。它以CD3+CD56+的非MHC限制性杀伤细胞为主，可有效辅助恶性肿瘤的治疗。DC-CIK细胞免疫治疗是利用树突状细胞（DC）及细胞因子诱导的杀伤细胞（C

2、IK）在体外共同培养大量扩增后将活化的免疫细胞回输入患者体内可直接杀伤肿瘤细胞，同时辅助或刺激人体自身免疫系统，完善或增强病人免疫机能，达到抑制或杀灭肿瘤细胞的目的。二、作用机制1.DC细胞的作用机制（1）诱导细胞免疫。DC摄取抗原后，将其加工处理为肽-MHC分子复合物表达于细胞表面，进而与T细胞表面的T细胞受体（TCR）结合，同时与DC表面高表达的CD80、CD86等共刺激分子协同作用下，共同激活T细胞，启动CD8+细胞毒性T细胞（CTL）介导的免疫应答。（2）增强体液免疫。DC通过促进抗原特异性CD4+辅助性T细胞(Th)的产生，促进抗体生成；另一方面，DC直接作用于B细胞，促进免疫球蛋白

3、的分泌。DC通过I型干扰素的分泌，直接诱导初始和记忆B细胞分化为浆细胞，产生大量免疫球蛋白IgM。（3）分泌多种细胞因子或趋化因子。DC分泌的IL-12可诱导Th0细胞向Th1细胞分化，启动细胞性免疫应答，抑制IL-12的产生则促进IL-10的分泌及Th2细胞极化。IL-15以膜结合方式存在于DC表面，显著刺激次级淋巴器官中自然杀伤细胞的增殖。DC还可分泌一种特异性趋化因子，选择性趋化初始型T细胞，增强对免疫应答的诱导作用。（4）DC通过与某些肿瘤细胞相互接触，直接抑制肿瘤细胞的生长。（5）肿瘤抗原致敏的DC可释放一种具有抗原呈递能力的囊泡小体，该小体内含有大量MHC-I、II类分子。2.DC

4、-CIK细胞的作用机制DC细胞被称为寻找肿瘤细胞的雷达，能够在体内随着血液全身各处主动搜索、识别肿瘤细胞，并把信息传递给免疫活性细胞，促使其激活和大量增殖。CIK细胞被称为杀伤肿瘤细胞的精确导弹，该细胞对肿瘤细胞的精确识别杀伤能力很强，尤其对手术后或放化疗后的患者治疗效果显著，能清除残留的微小的转移病灶，防止肿瘤细胞的扩散和复发，并能提高机体免疫力。将DC与CIK联合应用可以起到"1+1>2"的治疗效果。DC-CIK细胞发挥抗肿瘤作用的机制如下：（1）释放细胞内的穿孔素、颗粒酶等活性物质至肿瘤细胞内，溶解肿瘤细胞。（2）通过Fas-FasL途径诱导肿瘤细胞凋亡。三、D

5、C-CIK的优点DC在负载肿瘤抗原后与CIK共培养，可以激活CIK细胞群中的CD8+ CTL细胞，从而使最终获得的DC-CIK细胞既具有CD3+CD56+细胞的非MHC限制性杀瘤活性，又具有CD8+ CTL细胞的特异性杀瘤活性，因此，DC-CIK具有更强的杀瘤活性。它具有以下优点：1.兼具特异性与非特异性杀瘤活性，杀瘤谱广，杀瘤活性强；2.对多重耐药性肿瘤也具有杀伤性；3.采用无血清培养基或添加自体血浆培养细胞，避免异源病毒感染。DC-CIK与CIK的杀瘤活性比较（J. Orthopaedic Research, 2005）四、DC-CIK细胞的适用症和禁忌症1. CIK细胞的适用症a） 各种

6、免疫原性较强的肿瘤，如：肺癌、肝癌、结直肠癌、肾癌、恶性黑色素瘤等； b） 原发灶去除后（手术、放疗等），免疫力低下，恢复慢，预防肿瘤复发。如胃癌术后、肺癌术后、肝癌术后等； c） 肿瘤广泛转移，无法进行手术者，可与化疗配合使用； d） 对放化疗不敏感或者无法耐受的肿瘤患者； e） 常规治疗后（手术及放化疗）需要提高身体免疫力者； f） 肿瘤临床康复后的肿瘤复发预防。患者必须同时符合下列条件a） 生活自理，卡氏体力状况评分标准60分以上；b） 预期生存期3个月的患者；c） 实验室检查必须符合下列条件：（淋巴细胞+单核细胞）绝对值2.0*109/L，血小板50*109/L，血红蛋白70g/L；d

7、） 病人有自知能力，能签署知情或志愿同意书；e） 患者依从性较好，能配合针对毒副反应的治疗；2. DC-CIK细胞的禁忌症a) 脏器移植者不适用；b) T细胞淋巴瘤、T细胞白血病；c) 严重的自身免疫性疾病者；d) 不可控制的感染性疾病；e) 对细胞培养过程中所用生物制剂过敏者；f) 怀孕或哺乳期妇女；g) 器官功能衰竭者,具体器官标准如下：i. 心脏：IV级以上ii. 肝脏：达到国内肝功能分级C级以上iii. 肾脏：肾功能衰竭及尿毒症iv. 肺：出现严重的呼吸衰竭症状，累及到其他脏器，如肝、肾功能v. 脑：脑转移并伴意识障碍者五、DC-CIK细胞的治疗方案1.配合手术使用 术前采集培养，术后

8、第7天回输，提高免疫力，机体恢复快，防止复发和转移。2.配合化疗使用 化疗前采集培养，细胞培养期间进行一次低剂量化疗，化疗疗程结束后第3-7天回输（可根据化疗药物的半衰期调整，一般化疗药物半衰期过后回输，免疫细胞回输完后，间隔至少7天再进行下个疗程的化疗），提高机体免疫力，降低药物毒副作用，进一步抑制或杀伤癌细胞。3.配合放疗使用 放疗前采血，放疗疗程间歇期回输（例如，周五放疗后给细胞，周一开始放疗），或采血后冻存种子细胞，待放疗疗程结束后回输免疫细胞（放疗结束后当天即可回输免疫细胞，免疫细胞回输完后，间隔至少7天再进行下个疗程的放疗），提高机体免疫力，提高化疗敏感性，降低放疗毒副作用，进一步

9、抑制或杀伤癌细胞。 4.与靶向药物联合使用 提前采集，靶向药物使用后的第2天回输，利用ADCC效应杀伤肿瘤细胞。5.单独使用 采集培养，14天左右回输，首次使用最好连续回输两个周期。6.综合治疗手术、放化疗、微创治疗、靶向药物治疗、免疫细胞治疗等治疗手段的联合治疗，首先手术，然后采用放化疗、微创治疗、靶向治疗等手段降低肿瘤负荷，肿瘤负荷降低后回输免疫细胞杀伤残留肿瘤细胞，起到防止复发和转移的作用。六、采血及注意事项6.1. 采血前工作6.1.1. 患者填写知情同意书由医生据患者病情提出细胞治疗并填写患者信息表，患者签署知情同意书。6.1.2. 患者提供化验结果a） 血常规（患者未经其他治疗时，

10、7天内有效），此结果必须提供；b） 感染筛查（患者未经其他治疗时，30天内有效），此结果必须提供；c） 肿瘤标志物（患者未经其他治疗时，30天内有效），此结果建议提供；以进行治疗评价；d） CT或X光片、B超（患者未经其他治疗时，30天内有效），此结果建议提供，以进行治疗评价；e） 病毒拷贝数检测（患者未经其他治疗时，7天内有效），对慢性病毒感染患者，此结果建议提供，以进行治疗评价；f） 血生化全项（患者未经其他治疗时，7天内有效），此结果建议提供；以进行治疗评价。6.1.3. 医生提供其它治疗安排a） 目前无其它治疗；b） 手术时间安排；c） 化疗时间安排；d） 放疗时间安排；e） 靶向治疗

11、时间安排；f） 抗病毒治疗时间安排。6.1.4. 采血时间的确认医生结合实验室检查结果和临床安排确认采血时间并通知业务人员（最好根据手术、放化疗的疗程同时制定好回输计划及采血时间）。6.1.5.患者缴费主管医生收到患者缴费相应单据后安排人员进行采血操作。6.1.6. 采血量确认 尽量在患者淋巴细胞+单核细胞绝对值大于2.0*109/L时采集外周血，如果低于该值，可以使用IL-2或G-CSF动员，一周后再采集外周血。如果患者体质较差，可以选择直系亲属外周血或脐带血作为免疫细胞的来源。 计算公式：采血量（mL）= ×1096.1.7. 病人采血前注意事项a） 患者清晨抽血前可以进食，但勿

12、食用油腻食物；b） 抽血前12小时不能输液；c） 放化疗前或化疗后淋巴细胞计数正常后取血，已冻存细胞的情况除外；d） 连续两个疗程治疗时，取血和回输细胞在时间上会有交叉，取血必须在细胞回输之前。6.2. 采血用具的准备6.2.1. 细胞制备中心提供材料：一次性使用真空采血针组件（Blood Collection Set）；肝素抗凝管；采血袋。6.2.2. 临床科室自备材料：棉签、碘伏、胶带和止血带。6.2.3. 采血见附件中采血操作规程。七、细胞回输及注意事项7.1.回输日期的通知和确认7.1.1. 业务员在采血后一周内以E-MAIL形式通知主管医生下周回输安排，并以电话、短信形式提醒医生查看

13、E-MAIL。7.1.2. 确定本次回输不受其他治疗因素，尤其是患者感染、发烧、放疗、化疗、转院、出院等的影响。如果因为患者自身或其他原因，需要改变回输时间，一般只能上下浮动1-2天。7.1.3. 细胞制备中心如发现因细胞增长原因，培养时间需要延长，将及时告知主管医生。7.2. DC-CIK细胞的包装盒质量检验单7.2.1. 标准回输袋100mL细胞悬液，细胞回输袋外标注有患者姓名、细胞编号、患者所在医院、产品出库时间：即当天日期的标签。7.2.2. 接收产品者还应同时获得产品验收单，包括：a） 细胞质量报告单（包括微生物检测、内毒素检测和产品细胞数量，并有报告人和审核人姓名，同时加盖质检章）

14、；b） 细胞回输签收单。7.3. DC-CIK细胞的运输7.3.1. 细胞储存于细胞运输箱，箱内放冰袋，保持箱内温度在10-20度，通过专人运输或快递的方式送至医生指定地点。7.3.2. 由主管医生或护士a） 签收产品和产品质量报告；b） 在细胞回输签收单上签名。7.4. DC-CIK细胞回输7.4.1. 所需物品：a） 生理盐水、治疗盘及相关物品（由医院提供）；b） 输血器、7号或更大号套针管（由公司提供）。7.4.2. 操作人员：医院相关医务人员7.4.3. 回输前首先核对细胞袋标签姓名与患者姓名是否一致7.4.4. 回输方法：a） 连接100mL生理盐水与输血器，将输血器原装所带大号针头

15、换成套管针并排气；b） 将针头与病人血管连接固定，观察生理盐水点滴情况；c） 预处理：一般不需任何预处理，但若患者为过敏体质或其它情况需根据医嘱加入相应处理，比如回输前提前15分钟肌肉注射非那根25mg；d） 如果生理盐水点滴通顺，换上细胞转输袋，调节速度为30-40滴/分；e） 一般病人观察10分钟后如没有特殊反应，将滴速改为60-80滴/分，直至输完；若患者有心血管方面疾病应按医嘱控制滴速。回输过程中可叮嘱家属或护士每隔5-10分钟轻轻挤压转输袋底部，使沉淀细胞重新悬浮；f） 细胞回输完毕后将输血器连接上剩余的生理盐水，冲洗输血器内剩余的细胞；g） 管内细胞冲洗干净后回输完成。八、其他注意事项8.1.知情同意书书面证明患者本人或家属已了解DC-CIK细胞治疗的情况并同意接受治疗，由医院保留。8.2.回输方案的制定单独使用DC-CIK细胞时，一般在采血后14天左右开始第一次回输，具体回输计划在采血后7天内告知