白血病淋巴瘤免疫分型实用教案

1、1流式细胞术的基本概念流式细胞术的基本概念=流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选=研究对象为生物颗粒(kl)，如各种细胞、微生物及人工合成微球等=研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量第1页/共34页第一页，共35页。2散射光信号散射光信号(xnho)和荧光信号和荧光信号(xnho)=前向角散射光（FSC, Forward Scatter）=入射激光的前向散射光信号=细胞相对大小及其表面积=侧向角散射光（SSC, Side Scatter）=入射激光90角的

2、散射光信号=细胞粒度及细胞内相对复杂性=荧光(ynggung)素与特异抗体结合，荧光(ynggung)抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光(ynggung)信号越强。第2页/共34页第二页，共35页。3CD45/SS示意图示意图第3页/共34页第三页，共35页。4抗原(kngyun)(kngyun)分布 表面,胞浆,核内 是共同检测还是(hi shi)分别检测?CD3, CD4, CD8, tetramer cytokinesDNACD3,4,8, tetramer+CytokinesCD3,4,8, tetramer+DNACytokines+DNACD3,4,8, tetramer+Cyto

3、kines+DNA第4页/共34页第四页，共35页。5设门08-03307第5页/共34页第五页，共35页。6设门全部(qunb) 细胞门内(mn ni)细胞08-03307第6页/共34页第六页，共35页。7第7页/共34页第七页，共35页。8血液(xuy)肿瘤分类进程第8页/共34页第八页，共35页。9白血病免疫分型的理论白血病免疫分型的理论(lln)基础基础 白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶段的分化抗原。虽然(surn)是恶性肿瘤细胞，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴瘤

4、细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴瘤细胞的存在。 第9页/共34页第九页，共35页。10细胞类型(lixng)鉴定Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280第10页/共34页第十页，共35页。11CD45/SS示意图示意图正常骨髓细胞 血液(xuy)肿瘤细胞老化粒细胞 、噬酸细胞 早幼成熟粒细胞 M3、CML单核细胞 M4、M5 LGL淋巴细胞 CLL、ALL、CLD正常前体细胞 M0、M1

5、、M2、 嗜碱性粒细胞 M4、M5、ALL成熟红细胞、血小板 M6、M7、MM细胞碎片 Pre-B-ALL 非血液(xuy)来源细胞第11页/共34页第十一页，共35页。12B淋巴细胞分化与抗原(kngyun)表达关系图Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第12页/共34页第十二页，共35页。13T淋巴细胞分化与抗原(kngyun)表达关系图Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第13页/共34页第十三页，共35页。14粒细胞分化与抗原(kngyun)表达关系图Wo

6、od and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第14页/共34页第十四页，共35页。15单核细胞分化与抗原(kngyun)表达关系图Wood and Borowitz (2006) Henrys Laboratory Medicine第15页/共34页第十五页，共35页。16非肿瘤(zhngli)T淋巴细胞表型第16页/共34页第十六页，共35页。17非肿瘤(zhngli)B淋巴细胞表型第17页/共34页第十七页，共35页。18非肿瘤(zhngli)粒细胞、单核细胞表型第18页/共34页第十八页，共35页。19非肿瘤(zhngli)粒细胞、单

7、核细胞表型第19页/共34页第十九页，共35页。20白血病免疫白血病免疫(miny)分型分型 根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。 根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前(zo qin)B，前B，普通B第20页/共34页第二十页，共35页。21初治急白分型Acute Leukemia Blasts Present 20%Myeloid LineageCD13+ and/orCD117+ and/orCD33+CD7+ and/orCD2+CD19+T-LineageB-LineageMyeloid, no or mini

8、mal maturationCD34+/-CD117+/-HLADR+CD56+CD15-/+CD11b-, CD14-PromyeloidCD15+/-CD117+/-CD34-HLADR-CD11b-, CD14-CD14+CD4+/-HLADR+CD15+CD11b+Myelomonocytic & Monocytic红系和巨核系的鉴定需要另外增加(zngji)二线抗体。如:CD71、GPA、CD41、CD61第21页/共34页第二十一页，共35页。22第22页/共34页第二十二页，共35页。23AML-M4第23页/共34页第二十三页，共35页。24第24页/共34页第二十四页

9、，共35页。25初治急淋分型Acute Leukemia Blasts Present 20%CD7+ and/or CD2+CD19+T-LineageB-LineageCommonThymocyteMatureThymocyteCD2+CD5+Dual CD4+/CD8+sCD3-CD2+CD5+CD4+ or CD8+sCD3+CD2-/+CD5-/+sCD3-CD4-CD8-TdT+CD10-clg-sig-Pre-BCD10+cig+TdT+sig-Bsig+CD10+/-clg+/-TdT-CommonTdT+CD10+clg-sig-EarlyThymocyteEarly B-P

10、recursor第25页/共34页第二十五页，共35页。26B-ALL第26页/共34页第二十六页，共35页。27第27页/共34页第二十七页，共35页。28 白血病免疫(miny)分型的价值n确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和 ALL的分化阶段。n鉴定AML的特征(tzhng)。n对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞类型。n诊断一些少见类型的白血病。如：M6、M7、M0等。第28页/共34页第二十八页，共35页。29多发性骨髓瘤（多发性骨髓瘤（MM） 多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病。正 常 浆 细 胞 为 C D 3 8 + / C D 4 5 d i m / - ， 使 用

11、 CD38/CD45双标记检测外周血和骨髓标本，可以准确划定浆细胞群。通常使用CD38和CD45，结合轻链检查，对多发性骨髓瘤细胞进行分析。另外，正常浆细胞的表面标记为CD19+/CD56-，而多发性骨髓瘤细胞通常为CD19-/CD56+。CD138目前认为是浆细胞最特异(ty)的指标。这样，使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参数分析，并计算异常浆细胞含量，对于多发性骨髓瘤的诊断和治疗评估具有重要意义。 第29页/共34页第二十九页，共35页。30MM第30页/共34页第三十页，共35页。31流式免疫流式免疫(miny)表型诊断血液肿瘤的劣势表型诊断血液肿瘤的劣势1、纤维化、硬化的骨髓可能

12、(knng)没有足够的细胞分析。2、细胞太多聚集或成团也可能(knng)没有足够的分析细胞。3、硬化的组织也很难得到足够的分析细胞。4、组织结构关系、形态关系丢失。5、比例太低的单克隆B细胞很难检测到。第31页/共34页第三十一页，共35页。32流式免疫表型诊断血液肿瘤流式免疫表型诊断血液肿瘤(zhngli)的劣势的劣势6、没有异常免疫表型的T细胞淋巴瘤也可能很难检测。7、异常的T细胞免疫表型不一定提示T细胞肿瘤，也可能是感染(gnrn)引起的单核细胞增多症、反应性皮肤病、炎症性疾病。8、取材不好或样品保存不当，可能导致假阴性的结果。9、HL的肿瘤细胞水平低，所以免疫表型检测或诊断HL不可靠。10、治疗或复发可能引起肿瘤细胞表面抗原改变。第32页/共34页第三十二页，共35页。33谢谢谢谢(xi xie)!第33页/共34页第三十三页，共35页。34感谢您的观看(gunkn)！第34页/共34页第三十四页，共35页。NoImage内容(nirng)总结1。散射光信号和荧光信号。表面,胞浆,核内。是共同检测还是分