丙泊酚对豚鼠胃窦平滑肌细胞L型钙离子通道的作用

1、丙泊酚对豚鼠胃窦平滑肌细胞L 型钙离子通道的作用目的：研究丙泊酚对豚鼠胃窦平滑肌细胞膜L- 型钙离子通道电流 (ICa2+) 的影响 , 探讨丙泊酚对胃肠动力的影响。方法：采用传统全细胞膜片钳技术, 记录正常豚鼠胃窦平滑肌细胞膜L- 型 ICa2+, 换 Ba2+做载流子后 , 记录 Ba2+电流 (IBa2+) 。对照组采用丙泊酚的溶媒成分10%脂肪乳 , 用 Ba2+-PSS稀释成与 78g/ml丙泊酚同等浓度后灌流细胞, 观察 IBa2+变化 , 然后洗脱 , 记录电流图。丙泊酚组分为低浓度 (2 g/m1) 和高浓度 (78 g/m1) 组。待正常IBa2+稳定后用低浓度丙泊酚溶液灌流

2、细胞, 观察电流随时间的变化,然后洗脱 , 观察跨膜电流是否恢复。 同样 , 在用高浓度丙泊酚溶液灌流细胞时观察记录跨膜 IBa2+的变化 , 然后洗脱 , 观察 IBa2+是否恢复。每组均应完整记录三例以上。 结果：首先用 Ca2+-PSS灌流细胞 , 细胞膜电位钳制在 -80mV,脉冲电压从 -60mV开始 , 去极化刺激到 +60mV,阶跃电压 10mV,持续时间 400ms,引出 Ca2+电流 (ICa2+) 。ICa2+在 -30 mV-20mV 出现 , 在 0 mV达到最大值 , 电流峰值为 (-63.62 ±19.46)pA, 反转电位在 +40mV左右出现。然后用B

3、a2+加载 , 记录 Ba2+电流(IBa2+),IBa2+与 ICa2+特点相同 , 也是在 -30 mV-20mV出现 , 在 0 mV达到最大值 ,电流峰值增大到 (-286.63 ±51.57)pA, 反转电位在 +40mV左右出现。持续用 Ba2+-PSS灌流细胞 , 待 IBa2+稳定后用与 78g/ml 丙泊酚等容积的10%脂肪乳灌流细胞 , 观察到 IBa2+没有显著变化。 持续用 Ba2+-PSS灌流细胞 , 膜电位钳制在 -80mV,每间隔 10s 给予细胞一次 0mV电压的单刺激 , 持续时间 400ms,引发出 IBa2+, 待电流稳定后用2g/ml 丙泊酚溶

4、液灌流细胞 , 药物灌流开始后IBa2+先轻微增大 , 持续约 30s, 然后 IBa2+逐渐减小。药物灌流开始后 170s 左右 IBa2+趋于稳定 , 稳定时 IBa2+减小到电流最大值的 (66.32 ±4.41)%。待变化稳定后用 Ba2+-PSS洗脱药物 , 电流大小立即开始恢复 ,恢复电流为加药前电流最大值的(91.83 ±1.24)%(n=4) 。用 78g/ml 丙泊酚溶液灌流细胞 , 给细胞施加同样的单刺激 ,IBa2+ 随时间逐渐减小 , 灌流开始后约 190s 稳定 , 稳定时 IBa2+减小到电流最大值的 (75.63 ±3.51)%。然后用 Ba2+-PSS洗脱药物 , 电流仍然能大部分恢复 , 恢复电流为加药前电流值的 (94.58 ±3.19)%(n=3) 。结论：全细胞膜片钳实验表明, 亚催眠剂量的丙泊酚抑制豚鼠胃窦平滑肌