大蒜根尖多倍体诱发及细胞学鉴定(付强)

1、柠檬黄诱导大蒜根尖细胞微核实验柠檬黄诱导大蒜根尖细胞微核实验付强 200900232023山东大学 09 级临床医学八年制同组者：张宇鹏摘要：柠檬黄是常用的食品添加剂之一。本次实验通过利用柠檬黄对大蒜根尖进行诱导，并测定微核产生率来了解柠檬黄对人体的影响，同时了解微核检测的方法和意义。关键词：大蒜根尖柠檬黄诱导微核experiment on inducing microkernel ofgarlic root tips cells by lemon yellowfu kiang (clinical medicine class of eight years, shandonguniversit

2、y) group member: zhang yupengabstract: lemon yellow is a often used kind of food additive. inthis experiment, we induce garlic tips cells using lemon yellow, andmensurate the rate of micro kernels in order to know the influence oflemon yellow to human body. meanwhile, we can realize the methods andi

3、mportance of microkernel mensurating.keywords: garlic root tips; lemon yellow; inducement; microkernel柠檬黄(分子式见下图)是广泛应用于工业和食品产业的着色剂。因其毒性较低，世界卫生组织给予了它一个较为宽容的每日最大摄入量。在本次实验中，我们利用柠檬黄对大蒜根尖进行处理，并统计根尖细胞微核产生率，来估计其对人体可能产生的影响。1.实验材料与方法1.1 实验材料与用品大蒜；柠檬黄(固体)；卡诺固定液;1mol/l hcl;70%乙醇；蒸馏水；显微镜一台；改良苯酚品红；双面刀片；盖玻片；载玻片；解

4、剖针；吸水纸。1.2 实验步骤1.2.1 确定柠檬黄溶解度取 10g 清水，不断向其中加入柠檬黄至饱和，通过分析天平称量出加入的柠檬黄的质量。最终测定加入 0.1600g 时开始出现少许不溶物。确定该品种柠檬黄溶解度为 1.6g。1.2.2 取材及处理将饱满大蒜蒜瓣去皮，插在清水中 25恒温培养箱中培养。待根尖长至0.5-1cm 左右时将蒜瓣取出。配置浓度为 1.6g/l。1.2.2 固定将根部切下放入卡诺固定液中固定 24 小时，之后转入 70%乙醇中备用。1.2.3 解离采用酸解法对根尖进行解离。将固定好的根部取出，清水洗涤后放入预热好的，盛有 1mol/l hcl 的小管中，再将管放入

5、60水浴锅中恒温处理 5-10min。恒温处理结束后水洗 3 次。1.2.4 染色将根部在解剖镜下观察，切取根尖细胞形态较为方正，两个明亮区域中间较暗的分生组织区，用改良苯酚品红染色 15min。1.2.5 压片染色完成后盖上盖玻片，用滤纸吸净多余的染液。将片子平放在实验台上，用一个双面刀片插到盖玻片和载玻片之间的一角，左手紧压盖玻片防止滑动，右手持解剖针柄轻轻敲打盖玻片使其分散完全。将刀片轻轻撤出，再用针柄轻敲，最后用拇指用力垂直按一下盖玻片使细胞分散压平。1.2.6 镜检需要找到清晰、染色和分散较好的中期分裂相进行观察。正常大蒜 2n=16，需分别找到二倍体和多倍体进行计数。先用低倍镜观察

6、，找到分散较好的染色体后转用高倍镜观察。2.实验结果及分析显微镜下观察到的结果如下图:二倍体大蒜根尖(2n=16)(因分散效果稍差标号可能错误)四倍体大蒜根尖(2n=32)(未能数出 32 条，可能在分散过程中遗失，或因分散效果不好存在重叠难以看清)3.讨论及注意事项3.1 解离时间和温度应严格控制。解离时间过短则解离不够，压片不易分散；解离时间过长，解离过度容易导致材料过软而使后面操作难以进行。3.2 解离也可采用酶解法。用 10-20g/l 的果胶酶，或与 10-50g/l 的纤维素酶混合使用。3.3 切取分生区时应注意，根冠可能在前面步骤中已丢失，故前面不必切取过多。细胞开始拉长的区域即为伸长区，可略保留一些。注意保留的细胞不可过多，否则导致细胞过密难易观察。3.4 除显微镜下直接鉴定多倍体外，还可通过观察气孔的大小和花粉粒的体积进行间接鉴定。3.5 秋水仙素诱导植物多倍体的方法还有种子浸渍、点滴法、毛细管法、羊毛脂法、复合处理、离体组织水平上诱导单个细胞等方法。参考文献:1张素之，李纪荣. 秋水仙素诱导大蒜四倍体的研究j.核农学报,2010,