膀胱癌中乙酰肝素酶的表达和临床意义

1、膀胱癌中乙酰肝素酶的表达和临床意义作者：赖潭，涂响安，吕自力，郑克立 丘少鹏，邓春 华【摘要】目的探讨国人膀胱癌乙酰肝素酶的表达水平及其与膀胱 癌发生、发展、转移和复发的关系。方法应用免疫组化envision二 步法研究58例膀胱癌患者中乙酰肝素酶蛋白的表达水平，10例正常 膀胱黏膜为对照组。结果 乙酰肝素酶在膀胱癌中阳性表达22例 (37. 9%),其表达率与肿瘤的病理分级、临床分期、复发和淋巴结转 移有相关性(p< 0. 05)。结论乙酰肝素酶蛋白的异常表达可作为膀 胱癌患者发生和发展的预后参数。【关键词】膀胱肿瘤；乙酰肝素酶；免疫组化expression and clini

2、cal significance of heparanase in chinese with bladder carcinomaabstract: objective to study the expression of heparanase in chinese with bladder carcinoma and the relationship wi th i ts development, progression, metastasis and recrudesence.methods immunohistochemica1 technique was used to detect t

3、he expression of heparanase in 58 cases of bladder carcinoma results the positive protein expression of heparanase was 37. 9% (22/58) the heperanase protein expression was correlated with the pathological type, clinical stage, recrudesence and lymph node metastasis (p⁢ 0.05). conclusion hepar

4、anase protein overexpression might serve as a marker for the prognosis of chinese bladder carcinoma.key words:bladder neoplasm;heparanase;immunohistochemical technique细胞外基质和基底膜是肿瘤细胞侵袭及转移的屏障。糖氨聚糖是 此屏障的主要成分之一，它的主要成分为硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfateproteoglycan, hspg)。乙酰肝素酶(heparanase,hpa)正是一种裂解糖氨聚糖中hs链的内切糖甘酶

5、，在细胞侵袭中起着极其重要的作用。最近，随着hpa基因得以克隆，相继获得一些有 意义的实验结果，hpa在侵袭性细胞穿越血管壁，实现浸润、扩散、 转移过程中的关键作用受到广泛关注。我们应用免疫组化envision二步法研究58例膀胱癌患者和10例正常膀胱黏膜乙酰肝素酶蛋白的表达水平，探讨膀胱癌中乙酰肝素酶的表达水平及其与膀 胱癌发生、发展、转移和复发的关系。1资料与方法1.1临床资料 收集中山大学第一附属医院泌尿外科1998-2003年 手术切除膀胱癌标本58例，男性47例，女性11例。年龄21-81岁， 平均58.6岁。who病理分级：g1 17例，g2 25例，g3 16例。uicc 临床分

6、期：t1 32例，t2 14例，t3 12例。复发20例，未复发38 例。淋巴结转移阳性15例，阴性43例。10例正常膀胱组织作为对 照。1.2方法1.2.1试剂 鼠抗人乙酰化肝素酶单克隆抗体购自武汉博士德公 司，envision二抗为dako公司产品，二氨基联苯胺(dab)试剂盒购 自福州迈新公司。全部标本均用10%(体积分数)中性甲醛固定，常规 组织脱水、石蜡包埋，4yni厚组织切片，并进行he染色，用于组织 定位。1.2.2免疫组织化学染色 采用免疫组织化学染色envision二步 法，实验步骤按试剂盒说明进行。乙酰肝素酶一抗工作浓度为1 ： 50,采用微波煮沸15min修复抗原，抗原修

7、复液为o.olmol/l柠檬酸缓冲 液(ph 6.0)。一抗4°c孵育过夜，pbs洗3次，envision二抗室温孵 育40min, pbs洗3次后dab显色3-5min,自来水终止显色，充分水 洗后苏木精复染，常规脱水、透明、中性树胶封片。以已知阳性切片 做阳性对照，阴性对照以pbs替代第一抗体。1.2.3结果判断乙酰肝素酶阳性信号为细胞浆内呈现棕黄色颗 粒，阳性细胞数< 10%为;阳性细胞数10%-50%为(+);阳性细 胞数>50% 为()。1.2.4统计学分析采用spss 13. 0统计分析软件，x2检验，以 p<0. 05为有统计学

8、意义。2结果乙酰肝素酶蛋白在膀胱癌患者阳性表达率为37.9%(22/58),其阳 性颗粒定位于癌细胞浆内(图1)。gl、g2和g3期肿瘤中其阳性表达 分别为 2 例(11.8%). 9 例(36%)和 11 例(68. 8%); tl、t2 和 t3 期肿 瘤中其阳性表达分别为6例(18. 8%). 9例(64. 3%)和7例(58. 3%); 复发和未复发者肿瘤中其阳性表达分别为3例(15%)和19例(50%);淋巴结转移阳性和阴性者肿瘤中其阳性表达分别为10例(66. 7%)和 12例(27.9%);乙酰肝素酶蛋白阳性表达率与肿瘤的病理分级、临床 分期、复发和淋巴结转移有相关性(p&

9、;lt;0. 05,表l)o 10例正常膀 胱组织均为阴性表达。3讨论恶性肿瘤的主要特点是浸润和扩散，该过程主要包括细胞与细胞 及细胞与细胞外基质黏附降低，肿瘤细胞穿过细胞外基质，甚至穿过 基底膜到达血管、淋巴管或周围组织。在这个过程中，黏附因子起重 要的作用。膀胱癌是泌尿生殖系最常见的恶性肿瘤，容易复发扩散和 转移。膀胱癌的扩散和转移是一较为复杂的过程，涉及多基因、多阶 段的作用，是众多学者研究的热点，目前普遍认为细胞与细胞及细胞 与基质间黏附性降低以及诱导血管形成是肿瘤浸润和转移的关键环 节。乙酰肝素酶又称内源性硫酸乙酰化肝素分解糖昔酶，在炎症状态 下，乙酰肝素酶通过降解细胞表面与基质相互

10、作用的硫酸乙酰化肝素 链，有助于炎症细胞通过基底膜，移行到炎症部位，同时，乙酰化肝 素酶还参与新生血管的形成。肿瘤细胞穿透基底膜及细胞外基质 以及新生血管形成是肿瘤扩散和转移的基本过程，乙酰肝素酶是否也 参与该过程的调节，值得进一步研究。gohji等3应用免疫组化和原位杂交的方法研究67例膀胱癌乙 酰肝素酶蛋白和基因表达，乙酰肝素酶蛋白在浸润性膀胱癌中的表达 率(68%)明显高于浅表性膀胱癌(19%),在低分化癌(79%)和淋巴结转 移阳性癌（80%）中的表达率亦分别明显高于高分化癌（29%）和淋巴结 转移阴性癌（39%）;乙酰肝素酶mrna的表达也与临床分期和淋巴结转 移呈正相关。进一步研究

11、发现乙酰肝素酶表达高的膀胱癌组织其微血 管计数明显高于乙酰肝素酶表达低的膀胱癌组织4。本组对膀胱癌 的研究显示，尽管乙酰肝素酶阳性表达率比文献报道低，但仍与肿瘤 的病理分级、临床分期、复发和淋巴结转移有相关性，故认为乙酰肝 素酶蛋白的异常表达有可能成为膀胱癌发生和发展的预后参数。【参考文献】1 vlodavsky i, friedmann y, elkin m，et al. mamma 1ian heparanase: gene cloning, expression and function in tumor progression and metastasis j. nat med, 1999, 5 (7): 793802.2 gingis velitski s, zetser a, kaplan v, et al heparanase uptake is mediated by cell membrane heparan sulfate proteoglycans j. j biol chem, 2004, 279 (42): 4408444092.3 gohji k, okamoto m, kitazawa si, et al heparanase protein and gene expression in bladder can