土壤中分解尿素的细菌的分离

1、1土壤中分解尿素的细土壤中分解尿素的细菌的分离与计数菌的分离与计数重点：从土壤中分离分重点：从土壤中分离分级纤维素的微生物级纤维素的微生物2二：研究思路：二：研究思路：（一）、筛选菌株（一）、筛选菌株、aq细菌能忍受细菌能忍受93OC左右的高温，是美左右的高温，是美国微生物学家托马斯国微生物学家托马斯.布鲁克于布鲁克于1966年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明这说明寻找目的菌株时，要根据他虽生存环境的寻找目的菌株时，要根据他虽生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。要求，到相应的环境中去寻找。2、实验室中微生物筛选的原理：、实验室中微生物筛选的

2、原理：人为提供目的人为提供目的菌株的生长的条件（包括营养、温度、菌株的生长的条件（包括营养、温度、PH等），等），同时抑制或阻止其他微生物的生长同时抑制或阻止其他微生物的生长。选择培养基：在微生物学中，选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类微将允许特定种类微生物生长，同时抑制其他种类微生物生长的培养生物生长，同时抑制其他种类微生物生长的培养基，基，称作选择培养基称作选择培养基 作用：主要应用于作用：主要应用于菌种分离菌种分离 3分析本课题使用的培养基分析本课题使用的培养基： KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4.7H2O 葡萄糖葡萄糖 尿素尿素 琼脂琼脂 碳源：碳源：葡萄糖葡萄糖 ; 氮

3、源：氮源：尿素尿素；无机盐：无机盐：KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4.7H2O凝固剂：凝固剂：琼脂琼脂该培养基的选择作用主要是通过该培养基的选择作用主要是通过尿素尿素来实现的。来实现的。原因：原因：在这个培养基中，尿素是唯一的氮源，在这个培养基中，尿素是唯一的氮源，只有能够利用尿素的细菌才能在这种培养基只有能够利用尿素的细菌才能在这种培养基上正常生活上正常生活。4（二）、统计菌落数目：（二）、统计菌落数目：常用常用稀释涂布平板法稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。来统计样品中活菌的数目。原理：原理：当样品的稀释度足够时，培养基表面生长的当样品的稀释度足够时，培养基表面生长的一个菌落来

4、源于样品稀释液中的一个活菌一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。注：注： （1）为保证结果准确，一般选择菌落数在）为保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数。的平板进行计数。 (2)为增强实验准确性，一定要涂布至少为增强实验准确性，一定要涂布至少3个平板，个平板，作为作为重复组重复组。（4）显微镜直接计数法显微镜直接计数法（镜检计数）也是测定微（镜检计数）也是测定微生物数量的常用方法，另外也可采用生物数量的常用方法，另外也可采用滤膜法滤膜法5(三三)设置对照设置对照1、目的：、目的：排除试验组中非测试因素对实验排除试验组中非测试因素对实验的结果的影响，提高实验结果的可信度。的结

5、果的影响，提高实验结果的可信度。注：对照实验的分类；注：对照实验的分类； 空白对照空白对照：不给对照组任何处理因素：不给对照组任何处理因素 条件对照条件对照：给对照组部分对照因素，：给对照组部分对照因素，但不是所要研究的处理因素。但不是所要研究的处理因素。 自身对照自身对照：对照和实验都在同一研究：对照和实验都在同一研究对象上进行。对象上进行。 相互对照相互对照：不单设对照组，而是几个：不单设对照组，而是几个试验组相互对照。试验组相互对照。6分析：分析：P23A同学出现不同试验结果的原因：同学出现不同试验结果的原因：土样不同土样不同；培养基被污染或操培养基被污染或操作有误作有误 对照组设置：对

6、照组设置： 方案一方案一：其他同学取与：其他同学取与A同学相同的图样同学相同的图样进行培养，若结果与进行培养，若结果与A相同，则说明相同，则说明A无无误误;反之，则有误。反之，则有误。 方案二方案二：将：将A同学配置的培养基在不加同学配置的培养基在不加土样情况下进行培养，作为空白对照，土样情况下进行培养，作为空白对照，以证明以证明A的培养基是否受到污染的培养基是否受到污染.7三、实验设计：三、实验设计： （一）、土壤取样（一）、土壤取样：注：注：有机物含量高，土质肥，一般其中微生物含量有机物含量高，土质肥，一般其中微生物含量高。高。 土壤中微生物大约土壤中微生物大约70-90是细菌，而细菌适是

7、细菌，而细菌适宜在酸碱度接近宜在酸碱度接近中性中性的潮湿土壤中生活，因此，在距的潮湿土壤中生活，因此，在距地表地表3-8cm的土壤层分布较多。的土壤层分布较多。 取土样用的小铁铲及装土样的信封要事先灭菌。取土样用的小铁铲及装土样的信封要事先灭菌。（二）样品稀释：（二）样品稀释：注：分离不同的微生物要采用不同的注：分离不同的微生物要采用不同的稀释度稀释度。 原因：原因：土壤中各类微生物的数量是不同的，采用不土壤中各类微生物的数量是不同的，采用不同的稀释度以保证获得菌落数在同的稀释度以保证获得菌落数在30-300之间适于计数之间适于计数的平板的平板8（三）涂布平板（四）微生物的培养与观察 注： 细菌一般在30-37OC的温度下培养1-2天，放线菌一般在25-28OC温度下培养5-7天，而霉菌一般在25-28OC温度下培养3-4天。每隔24小时统计一次数目，