分析与检测实验教程

1、食品分析与检测实验教程宜宾学院 2012-2013 学年度 下 期11级5.6班生物工程专业项目序号实验项目名称计划学时实验教学执行单位执行实验室开课时间1发酵原料中粗蛋白质的测定（微量凯氏定氮法）4实验教学中心食品实验室第六周2粮食中粗淀粉的测定（酸水解法）4实验教学中心天然产物实验室第七周3酱油中氨态氮的测定（电位甲醛滴定法）4实验教学中心天然产物实验室第八周4紫外可见分光光度计的使用（双波长法）4实验教学中心原子分光光度仪实验室第九周5原子分光光度仪的使用4实验教学中心红外光谱仪实验室第十周6红外光谱仪的使用4实验教学中心气相色谱仪实验室第十一周7高效液相色谱仪的使用4实验教学中心气相色

2、谱仪实验室第十二周8气相色谱仪的使用4实验教学中心气质联用仪实验室第十三周9气质联用仪的使用4实验教学中心高效液相色谱仪实验室第十四周分组：全班48人，两大组，每大组24人，每大组6小组，每小组4人实验一 发酵原料中粗蛋白质的测定（微量凯氏定氮法）食品中蛋白质的测定GB5009.5-2010一、实验目的1、 掌握微量凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理。2、 熟练掌握微量凯氏定氮法测定蛋白质含量的操作技术。二、实验原理凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时，则可用此法测定样品中蛋白质的含量。 当含氮有机样品与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进

3、一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。CH2NHRCOOH  + 3H2SO4 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH32NH3 +H2SO4（NH4）2SO4消化完成后，在凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，（NH4）2SO4 + 2NaOH Na2SO4 +2H2O +2NH3借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，2NH3

4、+4H3BO3 （NH4）2B4O7 +5H2O然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。（NH4）2B4O7 +2HCl +5H2O 2NH4Cl +4H3BO3多少植物原料中蛋白质的含氮量约为16%，即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质，用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。三、仪器与试剂1、仪器共用：电子天平（感应量1 mg）1台，称量纸若干、蒸馏水每组：250 mL定氮瓶1个、100 mL 容量瓶2个、小漏斗1个、石棉网1个、电炉1个、铁架台2套、胶头滴管2支、10 mL移液管1支、微量酸式滴定

5、管1支、20 mL移液管1支、玻璃珠数粒、定氮蒸馏装置1套、100 mL烧杯1个、100 mL三角瓶2个、2 mL移液管2支2、试剂（1）硫酸铜（CuSO4·5H2O）、硫酸钾（K2SO4）、硫酸（H2SO4 密度为1.84g/L）、硼酸（H3BO3）、甲基红指示剂（C15H15N3O2）、溴甲酚绿指示剂（C21H14Br4O5S）、氢氧化钠（NaOH）、95%乙醇（C2H5OH）、蒸馏水。（2）硼酸溶液（20 g/L）：称取20 g 硼酸，加水溶解后并稀释至1 000 mL。（3）氢氧化钠溶液（400 g/L）：称取40 g 氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100 mL。（4）盐

6、酸标准滴定溶液（0.0500 mol/L）。（5）甲基红乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g 甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。（6）溴甲酚绿乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g 溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。（7）混合指示液：1 份甲基红乙醇溶液与5 份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。（8）酿酒原料：干燥、粉碎、过筛（6080目）四、实验步骤1、试样处理：称取充分混匀的固体试样2.000 g（约相当于3040 g氮），移入干燥的250 mL定氮瓶中，加入0.2 g 无水硫酸铜、6 g 硫酸钾及20 mL 浓硫酸，轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45

7、°角斜支于石棉网上，用电炉小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色并澄清透明后，再继续加热0.5 h。取下放冷，小心加入20 mL 水。放冷后，移入100 mL 容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。（已制备）2、装置的清洗：按下图1装好定氮蒸馏装置，向水蒸气发生器内装水至2/3 处，加入数粒玻璃珠，加1g/L甲基红乙醇溶液23滴及2 mL浓硫酸，以保持水呈酸性，打开螺旋夹7及漏斗4下的夹子，加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾，使水蒸汽通入装置的各个部分，以达到清洗的目的。在冷凝管

8、下端放置一个三角瓶接收冷凝水，然后关紧螺旋夹7及漏斗4下的夹子，继续用蒸汽洗涤5 min。 冲洗完毕，夹紧蒸汽发生器与收集器之间的连接橡胶管3，反应室5中的废液由于减压而倒吸进入反应室外层6，打开反应室外层6下端的螺旋夹排除废液。如此清洗23次。图1 定氮蒸馏装置1电炉；2水蒸气发生器（2 L 烧瓶）；3螺旋夹；4小玻杯及棒状玻塞；5反应室；6反应室外层；7橡皮管及螺旋夹；8冷凝管；9蒸馏液接收瓶。3、装置清洗程度的检查：向接收瓶内加入20.0 mL 20 g/L硼酸溶液及1 滴2 滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下0.5cm处，蒸馏l2 min，观察接收瓶内的溶液是否变色。如不变色，表

9、示蒸馏装置内部已洗干净。移去三角瓶，再蒸馏12 min，用蒸馏水冲洗冷凝管下口，关闭电炉，仪器即可供测定样品使用。 4、样品蒸馏：向接收瓶内加入20.0 mL 20 g/L硼酸溶液及1 滴2 滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下。注意在加样前务必打开反应室外层活塞7，以免三角瓶内液体倒吸。准确吸取2.0 mL（V3）试样处理液由小玻杯4注入反应室5，以约10 mL蒸馏水水洗涤小玻杯并使之流入反应室内。然后，将10.0 mL 400 g/L氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加约5 mL蒸馏水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹7，开始蒸馏。蒸馏10 min （接收

10、瓶液体由酒红色变成绿色），然后移动蒸馏液接收瓶，使液面离开冷凝管下端约1 cm，再蒸馏1 min。然后用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。5、滴定：选用微量酸式滴定管，以0.0500 mol/L盐酸标准滴定溶液滴定，直至接收瓶混合液体由绿色变为酒红色为滴定终点，记录消耗盐酸的体积（V1）。同时作试剂空白，记录其消耗盐酸的体积（V2）。五、结果计算试样中蛋白质的含量按如下公式计算：式中X试样中蛋白质的含量，g/100g；V1试液消耗盐酸标准滴定液的体积，mL；V2试剂空白消耗盐酸标准滴定液的体积，mL；V3吸取消化液的体积，mL；C盐酸标准滴定溶液浓度，mol/L；0.01401.

11、0 mL盐酸c(HCl)=1.000 mol/L标准滴定溶液相当的氮的质量，g；m试样的质量，g；F氮换算为蛋白质的系数。一般谷物为6.25；纯乳或；大米5.95；大麦、小米、燕麦、裸麦5.83；面粉5.70；玉米、高粱6.24；花生5.46。六、结果与要求1、计算蛋白质含量，并作适当分析。2、蛋白质含量1 g/100 g时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量1 g/100g时，结果保留两位有效数字。六、注意事项1在蒸馏过程中，切勿关闭电炉，否则会引起硼酸液的倒吸。2环境中氨气的含量要低。3定氮仪各连接处绝对不能漏气。4所用橡皮塞、管用前均需处理。其方法是：浸在10氢氧化钠溶液中煮沸约 10 m

12、in，再经水洗和水煮10 min，最后冲洗数次。七、思考题1、本实验操作过程应注意哪些问题2、试述常量、半微量、微量凯氏定氮法的仪器装置的区别。实验二 粮食中粗淀粉的测定（酸水解法）食品中淀粉的测定GB/T5009.9-2008一、实验目的1、掌握酸水解法测定粗淀粉含量的原理。2、熟练掌握费林试剂法测定还原糖含量的操作技术。二、实验原理试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用酸水解成具有还原性的单糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉。三、仪器与试剂1、仪器水浴锅、回流装置、250 mL锥形瓶等2、试剂（1）氢氧化钠（NaOH）、乙酸铅PbC4H6O2）、硫酸钠（Na2SO4）（2）甲基红指示剂（

13、2 g/L）：称取甲基红0.20 g，用少量乙醇溶解后，定容至100 mL；（3）氢氧化钠溶液（400 g/L）：称取40 g氢氧化钠加水溶解后，放冷，稀释至100 mL；（4）乙酸铅溶液（200 g/L）：称取20 g乙酸铅，加水溶解，稀释至100 mL；（5）硫酸钠溶液（100 g/L）：称取10 g硫酸钠，加水溶解，稀释至100 mL；（6）盐酸溶液（1：1，v/v）：量取50 mL浓盐酸，加50 mL水混合（7）精密pH试纸：6.87.2四、实验步骤1、试样处理：将试样（大米）磨碎过40目筛，称取2.000 g大米粉置于250 mL锥形瓶中，加入30 mL盐酸溶液（1：1，v/v），轻

14、轻振摇使试样充分润湿，接好冷凝管，置沸水浴中回流1 h，立即取出冷却。加入2滴甲基红指示液，以400 g/L氢氧化钠调至黄色，再以盐酸溶液（1：1，v/v）校正至水解液刚变红色。若水解液颜色较深，可用精密试纸测试调至pH7。然后加20 mL200 g/L乙酸铅溶液，摇匀，放置10 min。再加20 mL100 g/L硫酸钠除去过多的铅。摇匀后滤纸过滤，滤液转入500 mL容量瓶，用水洗涤残渣和锥形瓶，洗液合并于容量瓶中，加水稀释至刻度。摇匀即得水解糖液。2、碱性酒石酸铜溶液的标定：吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液及5.0 mL碱性酒石酸铜乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃

15、珠两粒，从滴定管滴加约9 mL1 g/L葡萄糖标准溶液，控制在2 min内加热至沸，微沸下以每秒一滴的速度继续滴加1 g/L葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，后滴定操作需在1 min内完成，消耗糖液在1 mL内。记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，计算每10 mL（甲液、乙液各5 mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。m10 mL碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg；葡萄糖标准溶液的浓度，g/L;V标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL。3、试样溶液预测：吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液及5.0 mL碱性酒石酸铜乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠两

16、粒，控制在2 min内加热至沸，微沸下以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，待溶液颜色变浅时，以每两秒一滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录试样溶液消耗体积。当样液中还原糖浓度过高时，应适当稀释后再测定，使每次滴定消耗样液体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时所消耗的葡萄糖标准溶液的体积相近，约10 mL。4、试样溶液测定：吸取5.0 mL碱性酒石酸铜甲液及5.0 mL碱性酒石酸铜乙液，置于150 mL锥形瓶中，加水10 mL，加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加比预测体积少1 mL的试样溶液至锥形瓶中，控制在2 min内加热至沸，微沸下以每两秒一滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记

17、录试样溶液消耗体积。同时量取50 mL水及与试样处理时相同量的盐酸溶液，按同一方法做试剂空白试验。五、结果计算试样中淀粉的含量按以下公式计算：X试样中淀粉含量，g/100 g;A1测定用试样中水解液还原糖质量，mg；A2试剂空白中还原糖的质量，mg；0.9还原糖（以葡萄糖计）折算成淀粉的换算系数；m试样质量，g；V测定用试样水解液体积，mL；500试样液总体积，mL。六、结果与要求1、计算样品中淀粉的含量，并适当分析试验结果。2、计算结果保留到小数点后一位。六、注意事项1、斐林试剂甲、乙液分别贮存，用时混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会发生分解；2、样品中含糖量高时需适当加大样品溶

18、液的稀释；3、滴定终点判断时，需用白色做背景，便于观察溶液从蓝色转变为无色，且必须在沸腾时观察，否则易氧化成蓝色不易判别终点；4、样品中含较多可溶性糖时，可先用乙醇溶解除去可溶性糖再测定淀粉含量。七、思考题1、实验三 酱油中氨态氮的测定（甲醛值电位滴定法）酱油卫生标准的分析方法GB/T 5009.39-2003一、实验目的1、掌握甲醛值电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮含量的原理。2、熟练掌握甲醛值电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮含量的操作技术。二、实验原理利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，以酸度计测定终点，适用于深色样品溶液的测定。三、

19、仪器与试剂1、仪器（1）酸度计，附磁力搅拌器和搅拌子（2）10 mL碱式滴定管，5 mL、10 mL移液管，100 mL容量瓶，250 mL、100 mL烧杯，洗瓶，100 mL量筒，胶头滴管2、试剂甲醛溶液：36%，应不含聚合物氢氧化钠标准滴定溶液c（NaOH）=0.050 mol/L：pH6.86标准磷酸缓冲溶液、pH9.18标准磷酸缓冲溶液酱油：滤纸条 四、实验步骤1、pH计开机前准备与预热取下复合电极套，用蒸馏水清洗电极，用滤纸条吸干。打开电源开关预热30 min。2、 pH计的标定（2点标定）（1）在测量电极插座处插入复合电极，将选择开关旋钮调到pH档（2）调节温度补偿旋钮白线对准溶

20、液温度值；（1）拔下电路插头，在测量电极插座处插入复合电极；（2）把选择开关旋钮调到pH档；（3）测量试液温度，调节温度补偿旋钮白线对准溶液温度值；（4）斜率调节旋钮顺时针旋到底；（5）把清洗过的电极插入pH=6.86的标准缓冲液中；（6）调节定位调节旋钮，使仪器读数与该缓冲溶液当时温度下的pH值相一致；（7）用蒸馏水清洗电极，用滤纸条吸干，再插入pH=9.18的标准缓冲液中；（8）调节斜率调节旋钮，使仪器读数与该缓冲溶液当时温度下的pH值相一致。（9）用蒸馏水清洗电极，用滤纸吸干。3、样品测定吸取5.0 mL酱油，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0 mL，置于200 m

21、L烧杯中，加60 mL水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液c(N aOH)= 0.05 mol/L滴定至酸度计指示pH=8.2 （记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数，可计算总酸含量。加入10.0 mL甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液（0.05 mol/L）继续滴定至pH=9.2，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液(0.05 mol/L）的毫升数。同时取 80 mL蒸馏水，先用氢氧化钠溶液（0.05 mol/L)调节pH为8.2，再加入10.0 mL甲醛溶液，用氢氧化钠标准滴定溶液（0.05 mol/L）滴定至pH=9.2，同时做试剂空白试验。4、测量结束关机用蒸馏水清洗电极，用滤纸吸干；

22、套上复合电极套，套内应放少量3 mol/L氯化钾溶液补充液；拔下复合电极，接上短接线，以防止灰尘进入，影响测量准确性；关机。五、结果计算样品中氨基酸态氮的含量按下式计算：式中：X 试样中氨基酸态氮的含量（以氮计）,g/100 mL;V1 测试用试样稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定液的体积，mL;V2 试剂空白试验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定液的体积，mL;V3 试样稀释液取用量，mL;c 氢氧化钠标准滴定溶液浓度，mol/L ;0.014 与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液c(NaOH)=1.000 mol/L相当的氮的质量，g。六、结果与要求1、计算样品中氨基酸态氮的含量，并适当分析

23、试验结果。2、计算结果保留两位有效数字。六、注意事项1、观察敏感膜玻璃是否有刻痕和裂缝；参比溶液是否浑浊或发霉(有絮状物)；参比电极的液接界部位是否堵塞；电极的引出线及插头是否完好，要保持电极插头的清洁；2、玻璃球泡易破损，使用时要小心,切忌与硬物相接触；3、电极不得测试非水溶液，如油脂、有机溶剂、牛奶及胶体等等，若不得以测试必须马上清洗，用稀NaHCO3溶液浸泡清洗，时间不得太长，然后用蒸馏水漂洗干净；4、电极正常测试水温为060，超过60极易损坏电极；5、电极不得测试含F-高的水样； 6、每次测试结束，电极都须用蒸馏水冲洗干净，特别是测量过酸过碱溶液；7、电极保护套内的KCl溶液（3 mo

24、l·L-1）要及时补充不能干涸。8、以滤纸或面纸吸干沾湿, 不要用纸巾擦拭球泡，可使用被测溶液冲洗电极；9、待测溶液的最低液位应该高于甘汞电极处10、缓冲溶液用于校正后就应该倒掉，千万不能把使用过的缓冲液倒回溶液瓶里。 11、如遇到下列情况之一，pH检测仪器则需要重新标定： 溶液温度与定标温度有较大的差异时； 电极在空气中暴露过久，如半小时以上时； 定位或斜率调节器被误动； 测量过酸（pH2）或过碱（pH12）的溶液后； 换过电极后； 当所测溶液的pH值不在两点定标时所选溶液的中间，且距pH 7又较远时。七、思考题1、样品中如含有铵盐，是否会影响氨基酸态氮的测定，其结果偏高还是偏低？

25、2、甲醛的用量越多，酱油中氨态氮含量的测定结果会有什么变化，为什么？附表：温度（） PH7 PH4 PH9.2106.92 4.00 9.33156.90 4.00 9.28206.88 4.00 9.23256.86 4.00 9.18306.85 4.01 9.14406.84 4.03 9.01506.83 4.06 9.02506.83 4.06 9.02实验四 紫外可见分光光度计的使用（双波长法）一、实验目的1、掌握紫外可见分光光度计的使用方法。2、了解紫外可见分光光度计的结构原理。3熟悉双波长法测定稻米直链淀粉和直链淀粉的含量测定方法。二、实验原理根据朗伯比尔定律，用紫外-可见分光

26、光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对应的方法来进行定量测定。有如下三种情况（a、b为两组分简称）：两组分光谱不重叠，a，b不互相干扰，分别选择各自适当波长1、2按测定单一组分的方法测定两组分光谱部分重叠，a的测定不；受干扰，而b的测定受到干扰，a按单一组分测定方法在1测定，b在2处测定，减去a的含量；两组分吸收峰大部分重叠时，a、b互相干扰，可采用双波长法联立方程组进行测定。根据双波长比色原理，如果溶液中某溶质在两个波长下 均有吸收，则两个波长的吸收差值与溶质浓度成正比。直链淀粉与

27、碘作用产生纯蓝色，支链淀粉与碘作用生成紫红色。如果用两种淀粉的标准溶液分别与碘反应，然后在同一个坐标系里进行扫描（ 400 - 1000 nm) 或做吸收曲线，可以得到如图所示结果。 三、仪器与试剂1、仪器电子分析天平，T6新世纪紫外-可见分光光度计，pH计，1 mL、5 mL移液管，滴管，50 mL容量瓶9个，500 mL烧杯、洗耳球、电炉2、试剂碘试剂：称取碘化钾 2.0 g, 溶于少量蒸馏水，再加碘 0.2 g, 待溶解后用蒸馏水稀释定容至 l00 mL。1 mol/LKOH：0.1 mol/L盐酸：无水乙醇：蒸馏水：稻米：直链淀粉储备溶液：称取0.1000 g 直链淀粉纯品，放在100

28、 mL 容量瓶中，加少量无水乙醇湿润，加入1 mol/L KOH 10 mL，在75热水浴中溶解后，取出加蒸馏水定容至100 mL，混匀，即为1 mg/mL直链淀粉储备溶液。支链淀粉储备溶液：按上述方法制备1 mg/mL支链淀粉储备溶液。四、实验步骤1、测定波长与参比波长的选择选择26 mg/L 的直链淀粉和100 mg/L的支链淀粉标准溶液分别在紫外-可见光分光光度计上进行4001000 nm 波段光谱扫描，得光谱图（见图1），用作图法得直链淀粉测定波长为1(633 nm)，参比波长为2(493 nm)，支链淀粉测定波长为3(557 nm)，参比波长为4(744 nm)。2、 标准曲线的绘制

29、（1）双波长直链淀粉标准曲线绘制分别取直链淀粉储备溶液0、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3 mL放入50 mL容量瓶中，加入30 mL蒸馏水，以0.1 mol/L盐酸调至溶液pH 3.5，加0.5 mL碘试剂，并用蒸馏水定容至刻度，混匀，得浓度为0、6、10、14、18、22、26 mg/L的标准溶液系列，静置15 min, 以蒸馏水为空白，将所配制的直链淀粉标准溶液系列在1 和2 两波长下分别测定吸光度A1、A2，即得：A 值=A1-A2。以A 值为横坐标，直链淀粉浓度为纵坐标，得双波长直链淀粉标准曲线。（2）双波长支链淀粉标准曲线绘制 分别取支链淀粉储备溶液0、2.5、3.0、3.5

30、、4.0、4.5、5.0 mL，放入50 mL容量瓶中，加入30 mL蒸馏水，以0.1 mol/L盐酸调至溶液pH 3.5，加0.5 mL碘试剂，并用蒸馏水定容至刻度，混匀，得浓度为0、40、60、70、80、90、100 mg/L的支链淀粉标准溶液系列，静置15 min, 以蒸馏水为空白，将所配制的支链淀粉标准溶液系列在3 和4 两波长下分别测定其嘛吸光度A3、A4，即得：A 值=A3-A4。以A值为横坐标，支链淀粉浓度为纵坐标，绘制双波长支链淀粉标准曲线。3、样品测定将稻米粉碎过 60 目筛，称取样品粉末0.100 g左右，置于50 mL容量瓶，加少量无水乙醇湿润，加1 mol/LKOH

31、10 mL，在沸水浴中振荡10 min 取出，然后以蒸馏水定容至50 mL后，静置10 min。吸取样品液2.5 mL 2 份（即样品测定液和样品空白液），均加入30 mL蒸馏水，以0.1 mol/LHCl 调pH 至3.5 左右，在样品测定液中加碘试剂0.5 mL，空白液不加碘试剂，然后均定容至 50 mL，静置15 min，以样品空白液为对照，用分光光度计测定样品溶液在1、2、3、4 四个波长条件下的吸光度，根据直、支链淀粉的双波长标准曲线算出样品的直、支链淀粉含量，二者之和等于总淀粉含量。五、结果计算； ； X1 试样中直链淀粉的含量，mg/g；X2 试样中支链淀粉的含量，mg/g；X3

32、 试样中总淀粉的含量，mg/g；C1 测试用试样溶液中直链淀粉浓度，mg/L；C2 测试用试样溶液中支链淀粉浓度，mg/L；m样品质量，g。六、结果与要求1、计算样品中直链淀粉、直链淀粉和总淀粉的含量，并适当分析试验结果。2、计算结果保留到小数点后两位六、注意事项1、比色皿内溶液以皿高的2/34/5为宜，不可过满以防液体溢出腐蚀仪器。测定时应保持比色皿清洁，池壁上液滴应用擦镜纸擦干，切勿用手捏透光面。2、一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.20.8之间的误差较小3、吸收池应选择配对，否则要引入测定误差。在规定波长下两个吸收池的透光率相差小于0.5的吸收池作配对，在必要的情况时，须在最终测量扣除

33、吸收池间的误差修正值。4、不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光洁度受损影响正常使用。5、因蜡质和非蜡质支链淀粉碘复合物颜色差异较大，在制备双波长支链淀粉曲线时，应根据测定的谷物类型选择不同支链淀粉纯品（蜡质或非蜡质型）。 七、思考题1、双波长法测定谷物中直链、支链淀粉的原理是什么？ 2、除了双波长法外，比色法和安培滴定法也能分别测定直链和支链淀粉。了解其原理，比较不同方法的优缺点。3、应用双波长分光光度法应如何选择测定波长和参比波长?实验五 原子吸收分光光度仪的使用火焰原子吸收分光光度法测定样品中铜的含量（标准曲线法）一、实验目的1.了解火焰原子吸收光谱分析的原理及特点； 2.熟悉火焰原子吸

34、收光谱仪的基本结构及操作方法；3.掌握标准曲线法测定铜元素的定量分析技术。二、实验原理由光源（待测元素空心阴极灯）发射出待测元素的特征电磁辐射，当它通过含待测元素基态原子蒸气的火焰时（将样品或消解处理好的试样直接吸入空气-乙炔火焰，在火焰中形成原子蒸气），其中部分特征谱线的光被吸收，而未被吸收的光经单色器，照射到光电检测器上被检测，根据该特征谱线光强被吸收的程度与标准溶液的吸光度进行比较，即可测得试样中待测元素的含量。锐线光源在低浓度的条件下，待测元素的基态原子对光源特征辐射谱线的吸收符合朗伯比尔定律，即：A=lg(I0/I)=KLN0 （1）式中，A为吸光度，I0为入射光强度，I为经原子蒸气

35、吸收后的透射光强度，K为吸光系数，L为辐射光穿过原子蒸气的光程长度，N0为基态原子密度。当试样原子化，火焰的绝对温度低于3000 K时，可以认为原子蒸气中基态原子的数目实际上接近原子总数。在固定的实验条件下，原子总数与试样浓度c的比例是恒定的，则等式（1）可记为：A=Kc (2)式(2)就是原子吸收分光光度法定量分析的基本关系式。三、仪器与试剂1.仪器 TAS-990原子吸收分光光度计（北京普析通用、原子吸收分光光度计） 铜元素空心阴极灯 容量瓶50mL 7个、100 mL 3个、1000mL1个；移液管1 mL、5 mL 、10mL各1支；烧杯 50 mL1个、100 mL2个；玻璃棒1支；

36、小漏斗1个。 电子天平（万分之一）2.试剂0.5%硝酸溶液：取7.5mL浓硝酸（6568%），缓慢加入盛有适量去离子水的50mL烧杯中混合，转入100mL容量瓶中定容，混匀即可。去离子水铜标准贮备液(0.1mg/mL)：称取0.1966g Cu2SO4.H2O于100mL烧杯中，加适量0.5%硝酸溶解，转入1000mL容量瓶，用0.5%硝酸定容至刻度。铜标准使用液(10µg/mL)：吸取10mL铜标准贮备液于100 mL容量瓶中，用0.5%硝酸定容至刻度。燃料：乙炔，纯度不低于于99.6%。氧化剂：空气，由气体空压机供给，经过必要的过滤和净化。 四、实验步骤1.测定条件检测波长324

37、.7nm，灯电流2mA、狭缝0.4mm、燃烧器高度6mm、燃烧器位置2.5mm、空气压力0.2MPa、乙炔压力0.07MPa、燃气流量1800mL.min-1。 2.标准曲线的绘制精密汲取铜标准使用液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00mL,分别置于7个50 mL容量瓶中，用0.5%硝酸溶液稀释至刻度，摇匀。溶液中铜的浓度分别为0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 µg/mL。将各浓度的标准使用溶液分别导入调至最佳条件火焰原子化器，以0号管调零，在324.7nm分别测定其吸光度值，以铜标准溶液浓度为自变量（X），吸光度值为因变量（Y）绘制标

38、准曲线，建立回归方程。3.样品溶液的制备（已制备）精密称取2.000g样品于100mL烧杯中，加入10mL硝酸和5mL高氯酸，加一小漏斗在电炉上消解，溶液若变棕黑色，再少量多次添加硝酸和高氯酸，直至固状物消失，呈无色或淡黄色液体，冷却后，加少量去离子水溶解，转移至100mL容量瓶中，去离子水定容，摇匀即可。4.样品溶液的测定按标准曲线绘制中的测定方法将样品溶液导入仪器，测定其吸光度值，根据吸光度依据标准曲线回归方程求得样品铜的含量，平行测定4次（每小组1次）。五、计算样品中铜含量（mg/kg）=（C液×V液）/m 式中， C液：根据标准曲线回归方程计算出的样品溶液中铜含量（g/mL）

39、； V液：样品溶液的体积（mL）。m：样品的质量（g）六、结果要求1、列表记录标准系列溶液与样品溶液的吸光度值；2、绘制铜元素的标准曲线；3、计算样品中铜的含量及相对标准平均偏差（RSD）。4、对实验结果进行适当分析讨论七、思考题1、是否在任意浓度下标准曲线都是直线？2、空心阴极灯灯电流是不是越大越好？为什么？实验六 红外光谱仪的使用红外光谱法定性测定苯甲酸结构一、实验目的：1.了解红外光谱法分析的原理及特点；2.熟悉傅立叶变换红外光谱仪的结构及操作方法；3.掌握标准图谱对照法测定苯甲酸结构的定性分析技术。二、实验原理红外吸收光谱法（Infrared Absorption Spectromet

40、ry, IR）是以一定波长的红外光照射物质时，若该红外光的频率，能满足物质分子中某些基团振动能级跃迁频率条件，则该分子就吸收这一波长红外光的辐射能量，引起偶极矩的变化，而由基态振动能级跃迁到较高能量的激发态振动能级。检测物质分子对不同波长红外光的吸收强度，就可以得到该物质的红外吸收光谱。各种化合物分子结构不同，分子振动能级吸收的频率不同，其红外吸收光谱也不同，利用这一特性，可进行有机化合物的结构剖析、定性鉴定和定量分析。在化合物分子中，具有相同化学键的原子基团，其基本振动频率吸收峰（简称基频峰）基本上出现在同一频率区域内，但由于同一类型原子基团在不同化合物分子中所处的化学环境有所不同，使基频峰

41、频率发生一定移动。因此，掌握各种原子基团基频峰的频率及其位移规律，就可应用红外吸收光谱来确定有机化合物分子中存在的原子基团及其在分子结构中的相对位置。由苯甲酸分子结构可知，分子中各原子基团的基频峰的频率在4000650 cm-1范围内有：原子基团的基本振动形式基频峰的频率/cm-1v=C-H (Ar上)3077, 3012vC=C (Ar上)1600, 1582, 1495, 1450=C-H (Ar上邻接五氢)715, 690vO-H (形成氢键二聚体)30002500 (多重峰)O-H935vc=o1400C-O-H (面内弯曲振动)1250本实验用溴化钾晶体稀释试样，测绘出红外光谱图后，

42、与标准苯甲酸红外光谱图对照上述的原子基团基频峰的频率及其吸收强度，若两张图谱一致，则可认为该试样是苯甲酸。三、仪器与试剂1.仪器：红外光谱仪、手压式压片机、模具、玛瑙研钵、不锈钢药匙、不锈钢镊子、擦镜纸2.试剂：KBr粉末、苯甲酸、无水乙醇四、实验步骤1.测定条件压片压力：1.2×105 kPa (约120 kg·cm-2)；测定波长范围：2.515 m（波数4000650 cm-1）；参比物：空气；扫描速度：3档（全程4 min）；室内温度：1820；室内相对湿度：<65%2. 试样溴化钾晶片的制作（1）KBr的干燥：110下烘干48 h以上，并保存在干燥器内（2）

43、研磨：干燥样品12 mg与200 mg 干燥的KBr置玛瑙研磨中，研磨成均匀、细小的颗粒（约2m左右）（3）压片：将研磨细的样品粉末转移到压片模具上，手压式压片机用力压片，压至12 mm厚，即得透明薄晶片。（4）装片：将压好的晶片用镊子小心从压模中取出，放入样品夹中。3.样品测试（1）打开仪器电源总开关，预热30min，开启电脑，打开仪器操作平台，（2）先扫采集光路背景信号（即大气谱图），再将被测样品放在样品加上，放入样品室内，采集样品文件信号，经傅立叶变换得到样品红外光谱图。（3）调整谱图吸收峰显示情况，复制并保存谱图。五、注意事项1、制得的晶片必须无裂痕，局部无发白现象，透明，否则需重压。

44、晶片局部发白表示厚薄不均，晶片模糊表示晶体吸潮，水在3450cm-1、1640cm-1有吸收峰。2、待测样品及盐片均需充分干燥处理，为了防潮，宜在红外干燥灯下操作。3、测试完毕，应及时用无水乙醇擦洗模具，干燥后置入干燥器中备用。4、湿度60%，温度18255、注意水分和二氧化碳的影响六、结果要求1、在试样红外光谱图上，标出各特征吸收峰的波数，并确定其归属，作简单的结构解析。2、将试样光谱图与苯甲酸标样光谱图进行对比，如果两张图谱上的各特征吸收峰强度一致，则可认为该试样是苯甲酸。七、思考题1、为什么红外分光光度法要采取特殊的制样方法?2、红外光谱实验室为什么对温度和相对湿度要维持一定的指标？实验

45、七 高效液相色谱仪的使用高效液相色谱法测定混合物中甲苯的含量（内标法）一、实验目的1、了解高效液相色谱法的基本原理；2、熟悉高效液相色谱仪的基本结构及操作方法；3掌握内标法测定甲苯的定量分析技术二、实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速分离分析技术。具有分离效能高，检出限低，操作自动化和应用范围广的特点。 其基本原理是利用欲分配的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即由不同的分配系数），当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分

46、的分配系数只有微小差异，随着液体流动相却可以有明显的差异，最后使这些组分都得到分离，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。液相色谱仪工作原理图三、仪器与试剂1. 仪器：LC-10AVP高效液相色谱仪（日本岛津公司）色谱柱：Kromasil C18，(10m, 4.6×250mm)（天津特纳科学仪器有限公司）电子分析天平（万分之一）100mL容量瓶7个，100mL圆底烧瓶1个、0.22m微孔滤膜、微孔滤头2.试剂苯、甲苯、甲醇四、实验步骤1.测定条件色谱柱：Kromasil C18，(10 m，4.6 mm×250 mm)（天津特纳科学仪器有限公司）；流动相为80

47、%甲醇；流速1.0 mL/min；检测波长254nm；柱温20；进样量20 L（固定）2.相对校正因子的测定分别精密量取6 mL苯（约5 g，内标物）、6 mL甲苯（约5g），用甲醇定容至100 mL，即得浓度为50 mg/mL的混标溶液，用前过0.22 µm滤膜和脱气，在上述色谱条件下进样，分别记录苯（AS1）、甲苯（Ai1）的保留时间和峰面积，按下列公式计算甲苯的相对校正因子：3.样品溶液的测定分别精密量取6 mL苯（约5 g，内标物）和5 mL样品溶液（Vi），用甲醇定容至100 mL，即得含50 mg/mL内标物苯（ms2）的待测溶液。用前过0.22 µm滤膜和脱气

48、，在上述色谱条件下进样，分别记录苯（AS2）、甲苯（Ai2）的保留时间和峰面积，按下列公式计算待测溶液中甲苯的含量（g/mL）： Ci = mi / Vi 五、结果要求1.列表记录混标溶液与待测溶液的保留时间和峰面积；2.计算待测溶液中甲苯的质量体积浓度（mg/mL）。3.对结果进行适当分析讨论。六、思考题1、高效液相色谱仪的组成与工作主要流程？2、用作高效液相色谱流动相的溶剂使用前为什么要脱气?3、试分析苯的保留时间为什么比甲苯的短？实验八 气相色谱仪的使用气相色谱法测定酒精中乙醇的含量（叠加对比法）一、实验目的1、了解气相色谱仪的基本原理；2、熟悉气相色谱仪的基本结构及操作方法；3掌握叠加

49、对比法测定酒精中乙醇含量的定量分析技术。二、实验原理气相色谱法是一种既能进行分离又能进行测定的分析方法。其原理是被分析样品组分（气体样品或液体气化后的蒸气）在流速保持一定的载气（流动相）的带动下，进入填充有固定相的色谱柱，利用被测物质（组分）在流动（载气）和固定相之间分配系数的差异，样品在色谱柱中被分离成一个个的单一组分，并以先后次序从色谱柱中流出，进入检测器，转变成电信号，经放大后，由记录仪记录下来，在记录纸或电脑屏幕上得到一组色谱峰。然后根据样品组分的保留时间可以进行定性鉴定；根据色谱峰高或峰面积就可以定量测定样品中各组分的含量。气相色谱的定量分析方法有归一化法、外标法、内标法、内标对比法、叠加法和叠加对比法等分析方法。在色谱图中选择一个与待测组分峰面积、保留时间相近的稳定色谱峰作为参比峰（相当于内标峰），用待测组分峰面积与参比峰之比代替峰面积的绝对值的定量分析方法，称为叠加对比法。叠加对比一点法的计算公式如下：mi=mi×(Ai/Ar)/(