免疫学性能验证

1、免疫检验的质量控制及性能验证免疫检验的质量控制及性能验证李小花李小花2015.08.122015.08.12质量控制质量控制报告单申请报告单申请样本采集样本采集/接收接收样本检测样本检测检测结果的获得检测结果的获得结果分析及报告发放结果分析及报告发放影响检验结果的要素影响检验结果的要素温湿度控制温湿度控制培训、比对培训、比对设备操作、校准设备操作、校准性能验证性能验证SOP文件文件室内质控程序室内质控程序u应参考试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证应参考试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证u至少应包括：检出限、符合率至少应包括：检出限、符合率u定量方法应验证精密度定量方法应验证精密度试

2、剂性能验证试剂性能验证重点v EP5A2v EP15A2v EP6Av EP17Av EP12v Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI) 涉及免疫评价方法涉及免疫评价方法医学实验室精密度和准确度的确认医学实验室精密度和准确度的确认定量测定方法精密度方法定量测定方法精密度方法定量测定方法线性的评价定量测定方法线性的评价检出限与定量限的评价检出限与定量限的评价定性检测评价定性检测评价临床实验室标准化协会EP17Av 空白限、检测低限、定量限的验证空白限、检测低限、定量限的验证v Limit of blank(LOB) 空白限空白限v L

3、imit of detection(LOD) 检出限检出限v Limit of quantitation(LOQ)定量限定量限v LOB LODLOQv 是一定概率下是一定概率下()测量空白时可能得到的最高检测结果，测量空白时可能得到的最高检测结果，低浓度低浓度LOD的样本在一定概率下的样本在一定概率下()能得到的最低测量结能得到的最低测量结果。果。v 误判概率误判概率、：声称在给定物质中存在某成分的误判概：声称在给定物质中存在某成分的误判概率为率为时（时（类错误，假阳性），声称不存在该成分的误类错误，假阳性），声称不存在该成分的误判概率为判概率为（类错误，假阴性）。类错误，假阴性）。 、默认

4、值为默认值为0.05。空白限（空白限（LOB）= 假阳性可能= 假阴性可能相对频率0LoBLoBLoDLoDLoQLoQ总误差总误差报告不能检出能检出能检出可检测 LoB LoB LoD LoD LoQ LoQ空白限（空白限（LOB）检出限检出限(LOD)是检测方法可检测出的最低被测物浓是检测方法可检测出的最低被测物浓度，也称为检测低限或最小检出浓度。度，也称为检测低限或最小检出浓度。定量限定量限(LOQ)是指在精密度和正确度可接受的情况下检测系统是指在精密度和正确度可接受的情况下检测系统能够得到可靠结果的被测物最低浓度，分析物在能够得到可靠结果的被测物最低浓度，分析物在这个浓度下被可靠检出。

5、这个浓度下被可靠检出。v 测定空白样本测定空白样本20次次v 测定结果与试剂厂家给定的测定结果与试剂厂家给定的LOB比较，不超过比较，不超过3个结果大个结果大于于LOB验证通过。验证通过。验证空白限（验证空白限（LOB）v 验证验证LODv 选择被测量的低浓度（选择被测量的低浓度（LOB-4LOB）样本，获取至少）样本，获取至少20次测量结果（多个样本，多天完成）。次测量结果（多个样本，多天完成）。v 计算大于计算大于LOB的测定结果所占比例是否符合（的测定结果所占比例是否符合（=0.05）要求。要求。v 符合要求，验证通过；符合要求，验证通过；v 不符合，联系厂家。不符合，联系厂家。检测低限

6、（检测低限（LOD）定量检出限（定量检出限（LOQ）v 选择浓度选择浓度LOD的样本，测定的样本，测定25次（多样本，多天，重复次（多样本，多天，重复完成），每个样本测定结果与参考值的偏差和完成），每个样本测定结果与参考值的偏差和TEa（实验（实验室总误差）相比较。室总误差）相比较。v 计算小于计算小于TEa所占比例是否符合（所占比例是否符合（=0.05）的要求。）的要求。v 符合要求，验证通过；符合要求，验证通过；v 不符合，联系厂家。不符合，联系厂家。Lower bound of observed proportion（%）208530874088508860887089808990901

7、0090150912009225092300924009350093100094符合（符合（=0.05）的要求）的要求定性检出限（定性检出限（LOQ）v 系列浓度样本制备（有证，康彻斯坦标准品稀释）系列浓度样本制备（有证，康彻斯坦标准品稀释）v 标准曲线的制作标准曲线的制作v 临界值附近浓度样本制备临界值附近浓度样本制备v 样本的检测：对临界值附近浓度样本进行连续样本的检测：对临界值附近浓度样本进行连续20次测定次测定v 当实验结果阳性率当实验结果阳性率95%的最低浓度确认为检出限，表明的最低浓度确认为检出限，表明被测物在该浓度及以上样本，实验方法将给出稳定的结果。被测物在该浓度及以上样本，实

8、验方法将给出稳定的结果。v 定性精密度（只报告阴性、阳性、无反应性）定性精密度（只报告阴性、阳性、无反应性）v 不宜用阴性或强阳性标本衡量定性试验的重复性不宜用阴性或强阳性标本衡量定性试验的重复性v 选择分析物浓度应接近医学决定水平（临界值）选择分析物浓度应接近医学决定水平（临界值）v 评价指标：临界值验证评价指标：临界值验证v 以以COI(cut-off)或以或以s/co值报告结果的精密度评价。值报告结果的精密度评价。定性定性-重复性（精密度）重复性（精密度）-EP12Av 临界值：作为判断特定疾病、状态或被测量存在或不存在临界值：作为判断特定疾病、状态或被测量存在或不存在的界限的量值。也就

9、是指试验结果处于（阴性、阳性）分的界限的量值。也就是指试验结果处于（阴性、阳性）分界点时的样品中分析物的浓度。界点时的样品中分析物的浓度。v 对纯粹的定性检测来说，临界值就是（唯一）医学决定水对纯粹的定性检测来说，临界值就是（唯一）医学决定水平。平。临界值临界值(cut-off value)v 临界点临界点:对阳性样本进行系列稀释，然后对系列稀释样本对阳性样本进行系列稀释，然后对系列稀释样本进行重复检测（进行重复检测（20-40次），能获得次），能获得50%阳性和阳性和50%阴性阴性结果的浓度。结果的浓度。v 20次（次（+20%与与-20%浓度各浓度各10次），次），30%-70%v 40次

10、（次（+20%与与-20%浓度各浓度各20次）次）, 35%-65%临界点临界点v 接近临界值浓度的分析物（临界值接近临界值浓度的分析物（临界值+20%与与-20%）v 对接近临界值浓度分析物的重复性检测（各对接近临界值浓度分析物的重复性检测（各20次）次）10天天（每日测定（每日测定2次）或次）或20天（每日单次测定）天（每日单次测定）v 阴性、阳性质控监测数据是否有效（阴性、阳性质控监测数据是否有效（10天，失效天，失效1次；次；20天失控天失控2次），失控后该该批数据舍弃，在当日或其次），失控后该该批数据舍弃，在当日或其他补充新一批检测。他补充新一批检测。v 计算阴阳性率计算阴阳性率v

11、数据分析（数据分析（C50或临界值或临界值95%区间是否正确）区间是否正确）定性定性-重复性（精密度）重复性（精密度）-EP12Av乙肝表面抗原C50验证举例举例稀释样稀释样本号本号40次检测结果次检测结果可信区间可信区间C50阳性%阴性%11332.5%2767.5%35-65%不正确21537.5%2562.5%正确v 临界值临界值+20%与临界值与临界值-20%浓度分别进行浓度分别进行20次检测。次检测。v +20%浓度的样本产生的阳性率浓度的样本产生的阳性率95%v -20%浓度的样本产生的阴性率浓度的样本产生的阴性率95%。v 意味着与临界值相差意味着与临界值相差20%以上的样本就可

12、预期用这种方法以上的样本就可预期用这种方法得到一致的结果。得到一致的结果。临界值的临界值的95%区间验证区间验证v 定性：以临床诊断、金标准方法比较、血清盘检测或参加定性：以临床诊断、金标准方法比较、血清盘检测或参加卫计委能力验证的来评价。卫计委能力验证的来评价。v 评价指标：符合率评价指标：符合率v 定性：符合率定性：符合率80%正确度正确度v 线性范围：指覆盖检测系统最终分析为可接受的线性关系线性范围：指覆盖检测系统最终分析为可接受的线性关系的浓度范围。的浓度范围。v 分析测量范围（分析测量范围（AMR）:样本没有经过任何预处理（浓缩样本没有经过任何预处理（浓缩和稀释），检测方法能够直接测

13、定出待测物的可靠浓度范和稀释），检测方法能够直接测定出待测物的可靠浓度范围，也就是系统最终的输出值与被测物的实际活性或浓度围，也就是系统最终的输出值与被测物的实际活性或浓度呈线性比例的范围。呈线性比例的范围。v AMR也就是线性范围。也就是线性范围。线性范围评价线性范围评价难点难点v 证实分析测量范围有效时：需证实分析测量范围有效时：需5-7个样品，每个样品重复个样品，每个样品重复测定测定2次。次。v 验证声明范围或改良方法：需验证声明范围或改良方法：需7-9个样品，每个样品重复个样品，每个样品重复测定测定2-3次。次。v 样品：可比预期的分析测量范围宽样品：可比预期的分析测量范围宽20-30

14、%，以期检测到，以期检测到“拐点拐点”。线性范围评价线性范围评价v 可用计算浓度或标定浓度作为可用计算浓度或标定浓度作为X值，仪器测量结果或仪器值，仪器测量结果或仪器输出值（均值）作为输出值（均值）作为Y值。值。v 也可用相对浓度作为也可用相对浓度作为X值，如果浓度间为等间隔，可用样值，如果浓度间为等间隔，可用样品编号（如品编号（如1、2、3、4、5等）代表等）代表X值。值。v 如所制备的样品系列非等间隔，其浓度间的关系应明确，如所制备的样品系列非等间隔，其浓度间的关系应明确，在测定时可以这些间隔间的相对比值做为在测定时可以这些间隔间的相对比值做为X值，此时的样值，此时的样品编号可以不为整数。品编号可以不为整数。曲线制作曲线制作v 将每个浓度将每个浓度4次按从小到大排列（次按从小到大排列（Yi-1到到Yi-4）v 计算极差计算极差D=Yi-1-Yi-4v 计算计算D1=（Yi-1-Yi-2）/Dv 计算计算D4=(Yi-3-Yi-4) /Dv D1或或D4如果大于如果大于0.765（0.05）或）或0.889（0.01）则该点）则该点为离群点