发光分析1和2

1、郭良洽郭良洽食品安全分析与检测技术教育部重点实验室食品安全分析与检测技术教育部重点实验室( (福州大学福州大学) )福州大学硕士研究生课程发光分析发光分析教学参考书：教学参考书：n荧光分析法（第二版或第三版）；陈国珍主编；科学出版社；1990n化学发光与生物发光理论与应用；陈国南，张帆著；福建科学技术出版社；1997n化学发光基础理论与应用；林金明编著；化学工业出版社；2004nElectrogenerated Chemiluminescence；Allen J Bard；Marcel Dekker，Inc；2004nACS(/)，Elsevier(http

2、:/ 引言引言Luminescence is the emission of light by a substance. It occurs when an electron returns to the electronic ground state from an excited state and loses its excess energy as a photon. 1cm excitation mode luminescence type thermally activated ion recombination thermoluminescence high energy par

3、ticles or radiation radioluminescence friction triboluminescence sound waves sonoluminescence absorption of radiation (UV/VIS) photoluminescence chemical reaction chemiluminescence, bioluminescenceinjection of charge electroluminescence 2.2.发光类型发光类型Thermoluminescence热致发光热致发光nThermoluminescence is a

4、form of luminescence when absorbed light is re-emitted on heating.nSome mineral substances such as fluorite store energy when exposed to ultraviolet or other ionising radiation. This energy is released in the form of light when the mineral is heated; the phenomenon is distinct from that of black bod

5、y radiation.Radioluminescence放射发光放射发光n是指因受高能粒子或辐照的激发而发光的现象。一些老式的钟表晚上可以发光可见表针，就是在其表面涂了一层放射发光的材料。radioluminescence：Luminescence arising from excitation by high-energy particles or radiationTriboluminescence摩擦发光摩擦发光triboluminescence：Luminescence resulting from the rubbing together of the surface of cer

6、tain solids. It can be produced, for example, when solids are crushed. Sonoluminescence声致发光sonoluminescence：the weak emission of light flashes by bubbles in a liquid excited by sound (a pressure wave). Sonoluminescence arises from cavitation, i.e. the formation, growth and collapse of microbubbles,

7、which produces excited state species.nFigure 1. Possible luminescent fates for an atom or molecule after electronic excitation.emission of lightIncandescencephosphorescencebioluminescencechemiluminescenceluminescencefluorescenceimmediately?YesYesYesYesYesNoNoNoNoNoTriboluminescencewith heating?from

8、mechanical forces?inanimate?with excitation by light?n本课程主要涉及:nPhotoluminescence（Fluorescence & Phosphorescence）n光致发光（荧光和磷光）nChemiluminescence & Biochemiluminescencen化学发光和生物发光nElectrogenerated chemiluminescence (electroluminescence)n电致化学发光第二章第二章 荧光荧光n2.1 荧光发展历程Each electron has unique set of

9、 quantum numbers (Pauli Exclusion Principle)nn principal (1s, 3p. ) 主量子数nl angular momentum (l=0=s, l=1=p. ) 角量子数nm magnetic 磁量子数ns spin 自旋量子数2.2.1 Electronic States电子运动状态电子运动状态n2.2 荧光产生原理nAny two electrons in same orbital (n, l, m) must have different spinsns = + or - nS = si （对于多个电子，总自旋量子数是价电子自旋量子

10、数的矢量和）谱线多重性谱线多重性M M：总角量子数：总角量子数L L与总自旋量子数与总自旋量子数S S之间的电磁相互作之间的电磁相互作用产生光谱多重线用产生光谱多重线M: 2S+1 (either 1, 2, 3. ) 式中式中S S为电子的总自旋量子数，为电子的总自旋量子数，M M则表示分子中电子的则表示分子中电子的总自旋角动量在总自旋角动量在Z Z轴方向的可能值。轴方向的可能值。M=1为为单重态单重态或单线态；或单线态； M=3为为三重态三重态或三线态。或三线态。单线态与三线态12 MgMg的基态与第一激发态的基态与第一激发态基态基态1st激发态激发态3s3p12-1212-121221S

11、JnL+2S+1=12S+1=12S+1=3内量子数内量子数J有有2S+1个取值个取值(L+S),(L+S-1),(|L-S|)L=l 0 (用用S表示表示) 1(用用P表示表示) 1J=LS 0 1 2, 1, 0 103S113 P313 P303 P323 P光光 谱谱 项项 21SJnL+单重态单重态(singlet state) 如果分子中一对电子为自旋反平行，则如果分子中一对电子为自旋反平行，则S=0，M=1，这这种态被称为单重态或单线态，用种态被称为单重态或单线态，用S表示。表示。 大多数化合物分子处于基态时大多数化合物分子处于基态时电子自旋总是成对的，所以是单线态，电子自旋总是

12、成对的，所以是单线态，用用S S0 0表示。表示。 在吸收光子后，被激发到空轨道在吸收光子后，被激发到空轨道上的电子，如果仍保持自旋反平行状上的电子，如果仍保持自旋反平行状态，则重度未变，按其能量高低可相态，则重度未变，按其能量高低可相应表示为应表示为S S1 1态态S S2 2态态。三重态三重态(triplet state) 当处于当处于S S0 0态的一对电子吸收光子受激后，产生了在两个态的一对电子吸收光子受激后，产生了在两个轨道中自旋方向平行的电子，这时轨道中自旋方向平行的电子，这时S=S=1 1，M M=3=3，这种状态称为这种状态称为三重态或三线态三重态或三线态。 因为在磁场中，电子

13、因为在磁场中，电子的总自旋角动量在磁场方向的总自旋角动量在磁场方向可以有三个不同值的分量，可以有三个不同值的分量，是三度简并的状态，用是三度简并的状态，用T T表表示。按能量高低可表示为示。按能量高低可表示为T T1 1, ,T T2 2激发态。激发态。Multiplicities:S0 - common, diamagnetic (not affected by B fields)D0 - unpaired electron, many radicals, two equal energy statesT1 - rare, paramagnetic (affected by B fields

14、) (T0 - doesnt exist, not ground state)Energy(S1)Energy(T1) (difference is energy required to flip electron spin)单重态与三重态的能级比较单重态与三重态的能级比较 在三重态中，处于不同轨道的两个电子自旋平行，两个电子在三重态中，处于不同轨道的两个电子自旋平行，两个电子轨道在空间的交盖较少，电子的平均间距变长，因而相互排斥轨道在空间的交盖较少，电子的平均间距变长，因而相互排斥的作用减低，所以的作用减低，所以T T态的能量总是态的能量总是低于低于相同激发态的相同激发态的S S态能量。态能

15、量。T3T2T1S3S2S1S0S0激发到激发到S S1 1和和T T1 1态的概率态的概率 电子由电子由S S0 0态激发到态激发到S S1 1态或态或T T1 1态的概率是很不相同的。态的概率是很不相同的。 从光谱带的强弱看，从从光谱带的强弱看，从S0态激发到态激发到S1态是自旋允许的，态是自旋允许的，因而谱带很宽；而从因而谱带很宽；而从S0态激发态激发到到T1态是自旋禁阻的，一般很态是自旋禁阻的，一般很难发生，它的概率是难发生，它的概率是10-5数量级。数量级。 但对于顺磁物质，激发到但对于顺磁物质，激发到T T1 1态的概率将明显增加。态的概率将明显增加。 分子吸收光子后各种光物理过程

16、可用分子吸收光子后各种光物理过程可用Jablonski雅布伦斯基雅布伦斯基图表示。当分子得到能量后，可能激发图表示。当分子得到能量后，可能激发到各种到各种S和和T态，到态，到S态的电子多于到态的电子多于到T态的电子。态的电子。2.2.2分子的活化与去活化去活化过程去活化过程注意点注意点 (1)(1)气相分子中易观察到以发射光子方式失去振动能气相分子中易观察到以发射光子方式失去振动能(2)(2)实现内部转换实现内部转换 a.Sa.S1 1，S S2 2 电子能级差小电子能级差小 、易实现。、易实现。 b.Sb.S1 1，S S2 2 振动能级的位能面有交叉振动能级的位能面有交叉(3)(3)体系间

17、跨越的必要条件体系间跨越的必要条件 a. Sa. S1 1、T T1 1位能面在某处有容易达到的能量相交位能面在某处有容易达到的能量相交 b. b. 微观磁场的微观磁场的微扰微扰存在存在 带电粒子的极性分子或可极化分子易产生磁效应带电粒子的极性分子或可极化分子易产生磁效应或离子外层电子云疏松或离子外层电子云疏松 顺磁性分子顺磁性分子 O O22外层外层3 3d d5 5五个电子不成对五个电子不成对 (4)(4)外部转换使发光熄灭现象外部转换使发光熄灭现象 T T1 1 S S0 0 比比 S S1 1 S S0 0 可能性更大可能性更大 (5)(5)去活化众多过程中，以速度最快、激发寿命最短的

18、途径占优势，去活化众多过程中，以速度最快、激发寿命最短的途径占优势，相互竞争。相互竞争。 传递途径传递途径辐射跃迁荧光延迟荧光磷光内转移外转移系间跨越振动弛预无辐射跃迁分子的活化与去活化Ground StateElectronsS1 excited stateS2 excited stateAbsorbance energyFluorescencenanosecondsAbsorptionfemtosecondsNonradiative dissipationBlue ExcitationInternal Conversionn（1）振动弛豫(Vibration relaxation，简写为V

19、R）：当分子吸收光辐射后可能从基态的最低振动能级(v=0)跃迁到激发单重态Sn的较高振动能级上。然后，在液相或压力足够高的气相中，分子间的碰撞几率很大，分子可能将过剩的振动能量传递给周围环境，自身从激发态的高振动能级跃迁至能级的最低振动能级上。n（2）内部转移(Internal conversion，简写为IC)：当高电子能级中的低振动能级与低电子能级中的高振动能级发生重叠时，常发生电子从高电子能级以无辐射跃迁形式转移至低电子能级。如图中，S2和T2中的低振动能级与S1和T1中的高振动能级重叠，电子可的通过振动能级的重叠从S2跃迁至S1，或从T2跃迁至T1。分子吸收辐射能后不管激发到哪一个激发

20、单重态，都能通过振动弛豫及内部转移而跃迁到最低(第一)激发单重态的最低振动能级。n（3）荧光发射(Fluorescence emission,FE)：处于激发单重态的电子经振动弛豫及内部转移后到达第一激发单重态(S1)的最低振动能级(v=0)后，以辐射的形式跃迁回基态(S0)的各振动能级。经过振动弛豫和内部转移的能量损失，荧光发射的能量比分子吸收的能量要小，荧光发射的波长比分子吸收的波长要长。第一发单重态最低振动能级的平均寿命得为109104S，因此荧光寿命也在这一数量级。n（4）系间跨跃(Intersysitem Crossing, ISC)：不同多重态之间的无辐射跃迁过程，它涉及到受激发电

21、子自旋状态的改变。图中S1的最低振动能级与T1的较高振动能级重叠，就有可能通过自旋一轨道偶合等作用实现这一跃迁。系间跨跃的速度很小，经历的时间较长。n（5）磷光发射(Phosphorescence emission,PE)：激发态的电子经系间跨跃后到达激发三重态，经过迅速完成的振动弛豫而跃迁至第一激发三重态的最低振动能级，然后以辐射形式跃迁回基态的各振动能级。磷光波长比荧光波长要长。T1还可能通过热激发而重新跃回S1即T1S1，然后再由S1经辐射跃迁回S0，发出荧光，这种荧光称为延迟荧光。n（6）外部转移(External convertion,EC)：激发态分子与溶剂分子溶质分子相互碰撞，并

22、发生能量转移的过程。外部转移能使荧光或磷光的强度减弱甚至消失，这种现象称为猝灭或熄灭。 .3. . 荧光类型荧光类型 从寿命从寿命 瞬时荧光瞬时荧光 1010-8-8s s 内发射内发射 分析中有意义分析中有意义! S S1 1S S0 0+ + h S S1 1+ +S S0 0 ( (S S1 1 S S0 0) ) 22S S0 0+ + h 受激准分子（受激准分子（excimer） 迟滞荧光迟滞荧光 波长同瞬时荧光，寿命与磷光相似刚性、粘稠介质中波长同瞬时荧光，寿命与磷光相似刚性、粘稠介质中 E型型 T T1+ 活化能活化能 S S1 1S S0 0+ + h P 型型

23、 T T1 + T T1 S S1 1 + + S S0 0 三重态三重态三重态粒子湮没三重态粒子湮没 S S0 0+ + h 寿命为相随磷光寿命的寿命为相随磷光寿命的 1/2 复合复合(重组）重组）A()+ h 1 A A( () ) + h 2 A A. .+ +( ( ) +) +e e 重组重组+e A()+ h 3 A A( ( ) )Three types of delayed fluorescence are known:(i)E-type delayed fluorescence: The first excited singlet state becomes populate

24、d by a thermally activated radiationless transition from the first excited triplet state. Since in this case the population of the singlet and triplet states are in thermal equilibrium, the lifetimes of delayed fluorescence and the concomitant phosphorescence are equal. T1 S1 S0 h(ii) P-type delayed

25、 fluorescence: The first excited singlet state is populated by interaction of two molecules in the triplet state (triplet-triplet annihilation) thus producing one molecule in the excited singlet state. In this biphotonic process the lifetime of delayed fluorescence is half the value of the concommit

26、ant phosphorescence. T1 T1 S1 S0 S1 S0 h(iii) Recombination fluorescence: The first excited singlet state becomes populated by recombination of radical ions with electrons or by recombination of radical ions of opposite charge.2.3 荧光的激发光谱和发射光谱*MXMX+ + = =n1iihv = =+ +n1jjhvMXMX*Excitation and emissi

27、on spectraExcitation and emission spectra 1 2 3 4Excitation spectrumEmission spectraF F em200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 90004008001200160020002400280032003600400044004800 IF 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 90004008001200160020002400280032003600400044

28、004800 IF s0s1ExcitationFluorescenceT1kiscPhosphorescence 溶液荧光光谱的特征（1 1）斯托克斯位移）斯托克斯位移( (Stokes shift)n在溶液荧光光谱中，观察到的荧光发射波长总是大于激发波长，这种波长位移现象称为斯托克斯位移。Emission is at longer wavelength (lower energy) than excitation due to energy losses.em ex = Stokes shift495 nm520 nmStokes Shift is 25 nmFluoresceinmole

29、culeFluorescnece IntensityWavelength 产生Stokes位移的主要原因：首先，由于振动弛豫及内都转移的无辐射跃迁激发态分子而迅速衰变到S1电子态的最低振动能级；其次，不同振动能级也发生振动弛豫至最低振动能级，也造成能量的损失；第三，溶剂效应和激发态分子可能发生了某些反应，也会加大斯托克斯位移。n（2 2）荧光发射光谱的形状与激发波长无关）荧光发射光谱的形状与激发波长无关n 荧光发射的产生原理，所以不管激发光的能量多大，能把电子激发到何种激发态，都将经过迅速的振动弛豫及内部转移跃迁至第一激发单重态的最低能级，然后发射荧光。荧光光谱只有一个发射光谱的形状与激发波长

30、无关的发射带。（3 3）吸收光谱与荧光激发发光谱的形状相近似，）吸收光谱与荧光激发发光谱的形状相近似， 吸收光谱与荧吸收光谱与荧光激发发光谱成镜像关系光激发发光谱成镜像关系 基态上的各振动能级分基态上的各振动能级分布与第一激发态上的各振动布与第一激发态上的各振动能级分布类能级分布类似；基态上的零似；基态上的零振动能级与第一激发态的二振动能级与第一激发态的二振动能级之间的跃迁几率最振动能级之间的跃迁几率最大，相反跃迁也然。大，相反跃迁也然。nOften, but not always presentnThought to be due to the fact that if 0n vibrati

31、on transition most likely on absorption, then the same most likely on emission.吸收光谱与发射光谱中0-0振动带具有相同的能量，但两者的峰波长并不重合，发射的0-0带略向长波方向移动。这是由于激发态的电子分布不同于基态，偶极矩和极化率也有所不同。室温下，溶液中的溶剂分子在吸光过程中来不及重新定向，分子在激发后的瞬间仍处于一种比平衡条件下具有稍高能量的溶剂化状态。在荧光发射之前，分子将有时间松弛到能量较低的平衡构型。荧光发射后的瞬间，返回基态的分子的溶剂化状态还是处于处于能量稍高的非平衡态，最后又松弛到基态的平衡构型。

32、吸光能量略高于光发射过程所释放的能量。两者的能量差在松弛过程中以热的形式传递给溶剂。吸收 h 荧光 h0-0 0-0激发和发射后溶剂化的变化0 02020404060608080100100120120-5-55 515152525353545455555t/nst/nsN N/0)()(tetNtN-=lDefinitionLifetime for Single molecule: the time the molecule spends in the excited state prior to return to the ground state. Average lifetime: t

33、he average time the molecule spends in the excited state prior to return to the ground state. Average fluorescence lifetime etNNt1)()(,0=2.4 2.4 荧光寿命和量子产率荧光寿命和量子产率荧光的衰变通常是属于单指数衰变过荧光的衰变通常是属于单指数衰变过程，在程，在t= t= 之前有之前有6363的激发分子已的激发分子已经衰变了，经衰变了，3737的激发分子则在的激发分子则在 t t 的时刻衰变的。的时刻衰变的。lExpressionExpression nr

34、k +=1relaxation (10-12 s)S0S1S1hvAhvF knrSimplified Jablonski diagram : Emission rate Knr: nonradiative decay rateLifetimeIntrinsic or natural lifetime(本征寿命本征寿命)10=The lifetime of the fluorophore in the absence of nonradiative processes is called the intrinsic lifetime.n荧光分子的平均寿命与跃迁的许可性两者之间的关系大致表荧光分

35、子的平均寿命与跃迁的许可性两者之间的关系大致表示如下：示如下：n 10-5/ max nS0 S1， 值约值约103 m2 mol-1，荧光寿命大致为荧光寿命大致为10-8snS0 T1， 值约值约10-3 m2 mol-1 ，磷光寿命大致为磷光寿命大致为10-2sn荧光强度的衰变，通常将遵从如下速率方程式：荧光强度的衰变，通常将遵从如下速率方程式：nlnI0-lnIt = -t/ n式中式中I0和和It分别表示分别表示t0和和tt时刻的荧光强度。通过实验测量不同时刻时刻的荧光强度。通过实验测量不同时刻t t所相应的所相应的I It t值，并作出值，并作出lnItt的关系曲线，其结果将得到一条

36、直线，由的关系曲线，其结果将得到一条直线，由该直线的斜率便可求得荧光寿命的数值。该直线的斜率便可求得荧光寿命的数值。n荧光寿命测定的现代方法荧光寿命测定的现代方法: :n时间相关单光子记数法时间相关单光子记数法（Time-Correlated Single-Photon counting,TCSPC）; ;n相调制法相调制法（Phase modulation methods）; ;n频闪技术频闪技术（Strobe Techniques）。 nTCSPCTCSPC是目前主要应用的荧光寿命测定技术。是目前主要应用的荧光寿命测定技术。nRefRef：房喻，王辉；荧光寿命测定的现代方法与应用；荧光寿命

37、测定的现代方法与应用；化学通报；2001，10，631-6362.5 fluorescence quantum yieldnrk+=lDefinition The fluorescence quantum yield is the ratio of the number of photons emitted to the number absorbed lExpression lRelationship with lifetimenrk +=110=0=lDeterminationComparison with a standard1. Chose a Standard with a quan

38、tum yield s2. At I determine the absorption (As) of the standard3. At ex = I excited the standard, and integrate the emission spectrum of standard, get F4. Repeat 3th step with the blank solvent. Minus the emission from blank, get FsF 5. Repeat 2-4th steps with the sample, and get Ax and FxsxxSsxFFA

39、A=Quantum Yield Standards Estimate quantum yield of fluorophore comparison of fluorophore with known quantum yield Q = QR (I/IR) (ODR/OD)(n2/n2R) Refractive index intensity observed from a point source is modified by (n/n0)2lChoose StandardsEnough absorbance both standard and sample at chosen excite

40、d wavelength.Moderate quantum yield.1. 0.05 mol / L sulfate of quinine, = 0.55 Examples 2. RuPy3Cl2, deoxygenated solution, 20 C, = 0.042NNNNNNRu2+2Cl-2.6 Fluorescence Anisotropyand Fluorescence Polarization光是一种电磁波，具有相位相同的两个互相垂直的振动矢量，光是一种电磁波，具有相位相同的两个互相垂直的振动矢量，电矢量和磁矢量电矢量和磁矢量l光的性质光的性质EHl偏振光偏振光l非偏振光非偏

41、振光Principle of photoselective excitation Information about the size and shape of proteins or rigidity of various molecular environments.Fluorophores preferentially absorb photons whose electric vectors are aligned parallel with transition moment of the fluorophore. In an isotropic solution, fluoroph

42、ores are oriented randomly. Upon excitation with polarized light, one selectively excites those fluorophore molecules whose absorption transition dipole is parallel to the electric vector of the excitation. This selective excitation results in partially oriented population of fluorophores and in par

43、tially polarized fluorescence emission. z激发偏振器激发偏振器发射偏振器发射偏振器xy检测器检测器IIlDefinition 0 . 1, 0=PrI0,11=PrII+-=IIIIPIIII+-=IIIIr2IIIIpolarization荧光偏振荧光偏振anisotropy各项异性各项异性5 . 0, 4 . 0PrFor fluorophore完全偏振光，散射光才能达到完全偏振光，散射光才能达到自然光或非偏振光Where I| and I are the fluorescence intensities of the vertically (|)

44、and horizontally( ) polarized emission, when the sample is excited with vertically polarized light. Polarization and anisotropyrrP+=23PPr-=32荧光偏振与荧光各向异性可通过以下公式相互转换：荧光偏振与荧光各向异性可通过以下公式相互转换：当体系中存在多种荧光体时，所测得的荧光各向异性是各当体系中存在多种荧光体时，所测得的荧光各向异性是各种荧光体荧光各向异性的平均值：种荧光体荧光各向异性的平均值： =iiirfr2.7 2.7 荧光强度与溶液浓度的关系荧光强度与

45、溶液浓度的关系shiftstokesPremex,Principle of quantitative and qualitative analysis by fluorometrylQualitative probing parameters: lQuantitative determination bcIF303.20=紫外-可见分光光度计测量池(吸收池)I0ItI0ItIF,pbC303. 20teT,bCIIlgTlgA - -= = =- -= =- -= =bC303.20te1T1II1- - -= =- -= =- -)e1(IIIbC303.20t0- - -= =- -)e1

46、(I)II(IbC303.20t0F- - -= =- -= = !nx!4x!3x!2x!1x1en432x+ + + + + + + += =)!4)bC30. 2(!3)bC30. 2(!2)bC30. 2(bC30. 2(II4320F + +- - - -+ +- - -= = CbIk30. 2I0FF = =CbIk30. 2I0PP = =CKIF= =KCIP= =一般当一般当b c 0.05 时时, F 与与c呈线性关系呈线性关系Fc*hvhvDDDD+ + +D)(DDD11*+ +2.7 2.7 荧光分析法的特点和应用荧光分析法的特点和应用灵敏度高灵敏度高：测定下限：测

47、定下限01 0.001 g/mL,g/mL, 比分光光度法高比分光光度法高2 24 4个数量级。个数量级。（在黑背景下检测；光源的强度大）（在黑背景下检测；光源的强度大）选择性高选择性高：适当选择激发光的波长和荧光测定的波长；应用适当选择激发光的波长和荧光测定的波长；应用荧光寿命的差别荧光寿命的差别时间分辨技术。时间分辨技术。 荧光测定的选择性荧光测定的选择性蒽的激发和发射光谱蒽的激发和发射光谱菲菲和和蒽蒽的荧光光谱的荧光光谱（激发波长（激发波长 265 nm) 蒽蒽菲菲 菲在菲在360 nm以上无吸收，用以上无吸收，用365 nm激发光时，菲无荧光，激发光时，菲无荧光，可以

48、在可以在400 nm测定蒽的荧光。测定蒽的荧光。 在在265 nm, 蒽和菲均有吸收，蒽和菲均有吸收，以此波长的光激发，在以此波长的光激发，在350 nm只有菲有荧光，故可测定菲。只有菲有荧光，故可测定菲。MFS与与UV/Vis 法比较：法比较： 原理原理UV/Vis 吸收吸收MFS 发射发射测定方法测定方法I0ItF灵敏度灵敏度, 选择性选择性10-510-6molL-110-710-9 molL-1I0F 荧光光度法的应用荧光光度法的应用生物化学分析，生理医学研究，临床检测生物化学分析，生理医学研究，临床检测. .n直接测定能产生荧光的物质直接测定能产生荧光的物质. .nIntrinsic

49、 fluorophores are those which occur naturally 带苯环的氨基酸：色氨酸带苯环的氨基酸：色氨酸( (Tryptophan) )、酪氨酸、酪氨酸( (Tyrosine) )、苯基丙氨酸、苯基丙氨酸( (Phenylalanine).).Protein fluorescenceProtein fluorescenceH2NCH CCH2OHOIndole group of tryptophan 色氨酸中的吲哚基团色氨酸中的吲哚基团H2NCH CCH2OHOHN ex = 280, em = 340, highly sensitive to solvent polarityH2NCH CCH2OHOOHtyrosinePhenylalanine TyrosinePhenylalanineTryptophanIntrinsic FluorescenceFluorescence spectra lie in the UV region The spectra for both Tyr and Trp are extremely sensitive to local environmentSolventAmino AcidPolypeptide Emission Quantum Emission Quantum Phen