药物分析安登魁主编中国药科大学

1、会计学1药物分析安登魁主编中国药科大学药物分析安登魁主编中国药科大学 绪 论一、分析的性质和任务 药物分析是我国药学专业规定设置的一门主要专业课程，是整个药学科学领域中一个重要的组成部分。 它主要运用化学、物理化学或生物化学的方法和技术研究化学结构已经明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究中药制剂和生化药物及其制剂有代表性的质量控制方法。药物分析任务是静态的常规检验运用现代分析的方法和技术，深入到工艺流程、反应历程、生物体内代谢过程和综合评价的动态分析监控中。二、国家药品标准 药典是国家监督管理药品质量法定技术标准。 中华人民共和国药典为我国药典的全称,简称中国药典，其后以括号

2、注明是哪一年版，如最新版药典可以表示为中国药典（2000年版）；如用英文表示，则Chinese Pharmaco-poeia（缩写Ch.P ）。 建国以来，我国已经出版了七版药典（1953、1963、1977、1985、1990、1995和2000年版）。 使用药典需要注意的问题： 1）、立法作用。 2）、与化学试剂的标准不能混淆使用。 3）、符合药典质量标准的药品是合格品而不是优质品。因为:药典是药物的最低标准而不是最高标准。 4）、新版药典生效之日起、旧版药典即自动失去其法律意义 。 主要国外药典 美国药典（The United States Pharmacopoeia ，缩写为USP）2

3、000年为24版。 美国国家处方集（The National Formulary，缩写为NF)2000年为19版。 英国药典（British Pharmacopoeia ，缩写为BP），目前版本为2000年版，本书以BP（2000）表示。 日本药局方，目前为第十三版改正版，本书缩写为JP（13）。 欧洲药典（European Pharmacopoeia，缩写为Ph. Eup），目前为第三版，分为三卷：第一卷（1979）为一般分析方法；第二卷（1981）和第三卷（1998）均为质量标准规格。 国 际 药 典 ( T h e I n t e r n a t i o n a l Pharmacopo

4、eia，缩写为Ph.Int） 三、药品质量管理规范 药品非临床研究质量管理规定（Good Laboratory Practice ，GLP ） 药品生产质量管理规范（Good Manufacture Practice，GMP ）药品经营质量管理规范（Good Supply Practice ，GSP ） 药品临床试验管理规范（Good Clinical Practice ，GCP ） GLP 、GMP 、GSP、 GCP 四个科学管理规范的执行，加强了药品的全面质量控制，有利于加速我国医药产业的发展，提高了药业的国际竞争力。分析质量管理（Analytical Quality Control，A

5、QC）。 四、药物分析课程的学习要求 学生通过药物分析第五版教材的学习，应努力掌握以下六个方面的基本内容： 1、药典的基本组成与正确使用： 2、药物的鉴别、检查和含量测定的基本规律与基本方法； 3、从药物的结构分析出发，运用化学的、物理化学的以及其他必要的技术与方法进行质量分析的基本方法与原理； 4、化学药物制剂分析的特点与基本方法。生化药物和中药制剂质量分析的一般规律与主要的方法； 5、药品质量标准制订的基本原则、内容与方法 ； 6、药品质量控制中的现代化分析方法与技术。 在药物分析的整个学习过程中，要求学生学会自学，善于独立思考，既重视药品质量分析的基础理论知识的学习，也重视基本实验技能的

6、严谨训练，同时加强创新能力的基本素质培养。因此学生不仅应研究探讨药物的化学结构、理化特征、存在状况与分析方法选择之间的关系，还应重视不同分析样本选取最佳分析方法的能力培养，最终要求学生在我国药物研究从仿制为主到创制为主的历史性转变中，能够具备为提高药品质量所需的独立分析问题和解决问题的能力。 五、药物分析的主要参考书目简介（一）、书籍 1、 药物分析（第一版）、（第二版）、（第三 版）、 （第四版）人民卫生出版社 、 济南出版社 2、体内药物分析 3、生物药制分析 4、医院药制分析 5、中药制剂分析 6、药典注释 7、中成药分析（二）、期刊药学学报、中国药学杂志、药物分析杂志、中国中药杂志、中

7、草药、中成药、中药 材、中国现代应用药学杂志、中国医院药学杂志、中国实验方剂学杂志等等。 第一章 药 典 概 况 一、中国药典的内容与进展 中国药典是国家监督管理药品质量的法定技术标准。中国药典的内容分为凡例、正文、附录和索引四部 。（一）凡 例 “凡例”是解释和使用中国药典正确进行质量检定的基本原则，并把与正文品种、附录及质量检定有关的共性问题加以规定，避免在全书中重复说明。 1、名称与编排 2、检验方法和限度 3、标准品、对照品 系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质。 4、精确度 “精密称定”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一； “称定”系指称取重量应准确至所取重量的百分之一； “精

8、密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密要求； “量取”系指用量筒或按照量取体积的有效数位选用量具。 取用量为“约”若干时，系指取用量不得超过规定量的10%。 （二） 正 文 （1）品名（包括中文名，汉语拼音名与英文名）； （2）有机药物的结构式； （3）分子式与分子量； （4）来源或有机药物的化学名称； （5）含量或效价规定； （6）处方； （7）制法； （8）形状； （9）鉴别； （10）检查； （11）含量或效价测定； （12）类别； （13）规格； （14）贮藏； （15）制剂等 。NHNHOOOCH3举例：苯 巴 比 妥 Benbabtiuo Phenobar

9、bital 【形状】【鉴别】 【检查】 酸度 ;乙醇溶液的澄清度中性或碱性物质 ; 干燥失重 ; 炽灼残渣 .【含量测定】【类别】【贮藏】【制剂】（三）附录 1、附录组成 2、附录内容举例（四）索引 （五）2000年版中国药典进展 1、药典凡例和正文部分的增修订 2、药典附录的增修订 3、配套丛书 二、主要国外药典简介（一）美国药典 1、凡例 （General Notices and Requirements） 2、正文 USP（24）-NF（19）收载药物品种为世界第一位达到3777个。 3、附录 USP（24）附录中一般检查和检定共分为6类。 （二）英国药典 1、凡例 2、正文 3、附录（

10、三）日本药局方 JP（14）分为两部。 第一部包括凡例、制剂总则、一般试验法和各医药品。 第二部包括通则、生药总则、制剂总则、一般试验法和各医药品，还有原子量表、附录和索引。三、药品检验工作的机构和基本程序 药品检验工作的基本程序一般为: 取样分析鉴别、检查、含量测定记录、写 出检验报告。 1、取样的基本原则均匀、合理；有代表性，科学性， 真实性。 2、分析的顺序不能颠倒。 3、记录必须真实、简明、完整、具体。 4、报告应符合有关规定。 第二章 药物的鉴别试验一、概述 药物的鉴别试验（identification test）是根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物化学方法来判断

11、药物的真伪。二、鉴别实验的项目（一） 性状 药物的性状（description ）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。 1、 外观 2、 溶解度 3、物理常数 物理常数是鉴定药品质量的重要指标。其测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。 （二） 一般鉴别试验 一般鉴别试验（general identification test）是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。对无机药物是根据其组成的阴离子和阳离子的特殊

12、反应；对有机药物则大都采用典型的官能团反应。 1、有机氟化物 2、有机酸盐 3、芳香第一胺类 4、托烷生物碱类 5、无机金属盐 6、无机酸根 （三）专属鉴别试验 药物的专属鉴别试验（specific identification test ）是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。 三、鉴别方法 （一）化学鉴别方法 1、呈色反应鉴别法 2、沉淀生成反应鉴别法 3、荧光反应鉴别法 4、气体生成反应鉴别法 5、测定生成物的熔点（二） 光谱鉴别法 1、紫外光谱鉴别法 2、红外光谱鉴别法 红外光谱法是一种专属

13、性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用于组分单一、结构明确的原料药、特别适用于用其他方法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类药品。 （三）色谱鉴别法 1、薄层色谱鉴别法 瑞士CAMAG SCANNER 3 薄层扫描仪岛津CS-9000双波长薄层扫描仪2、高效液相色谱鉴别法 气相色谱鉴别法 3、纸色谱鉴别法（四）生物学法（五）药物鉴别方法新动向 1、仪器方法用于药物的鉴别数量大大增加，尤其是红外光谱法和高效液相色谱法。 2、制剂广泛采用IR法鉴别。 3、鉴别条目简练，选择专属的方法进行鉴别，平均每个品种收载2条左右。 四、 鉴别试验条件 鉴别试验的目的是判

14、断药物的真伪。 （一）溶液的浓度 （二）溶液的温度 （三） 溶液的酸碱度 （四）试验的时间 （五）干扰成分的存在 五、鉴别试验的灵敏度（一）反应灵敏度和空白试验 在一定的条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量，即最低检出量（minimum detectable quantity ）（又称检出限量）和最低检出浓度（minimum detectable concentration ）（又称界限浓度）来表示。 所谓空白试验，就是在供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其他试剂均同

15、样加入而进行的试验。（二）提高反应灵敏度的方法 1、加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集 2、改进观测方法 附一、折光率测定法 定义： 利用测定物质的折光率来进行定性定量的分析方法，叫折光法。 折光率是用折光计来测定的，常用阿贝折光计测定。（一）折光的一般原理： 光线自一种透明介质进入另一个透明介质的时候，由于两种介质密度不同，光进行的速度发生变化，所以，光线就发生如图折射：i光疏物质（）光密物质（）界面法线入射线折射线i i为入射角为入射角 为折射角为折射角v1为为在在（ ）中中的传播速度的传播速度V V2 2为在（为在（ ）中的传播速度中的传播速度折光的一般原理n=_=_SinSin v1v

16、2i i= =90900 0 c c法线入射线折射线临界角阿贝折射仪的原理阿贝折射仪的原理n=_= _1Sin c cSin900Sin c（三）、折光计（三）、折光计1、其准确度可达、其准确度可达0. 00020. 00022、测定折光率的范围在、测定折光率的范围在 1. 30001.70003、测定用的折光计需能读数至、测定用的折光计需能读数至0 .0001 。（四）、折光法在药物分析中的应用（四）、折光法在药物分析中的应用1、鉴别与纯度检查鉴别与纯度检查2、定量定量1）、）、标准曲线法标准曲线法2 ）、）、折光率测定法折光率测定法C =（n - n。）。）/ FC 药物溶液的浓渡（药物溶

17、液的浓渡（g/ml，%）;n 一定温度下（通常为一定温度下（通常为20）测得的折光率）测得的折光率;n。为同温度下水的折光率为同温度下水的折光率;（20时时 n。= 1.3330 ）F 为折光率因素为折光率因素-药物溶液的浓度每增减药物溶液的浓度每增减1 %时，时， 其折光率的增减数。其折光率的增减数。0n1n2n3n4n5nxc1c2c3c4c5cx折光率测定法：标准曲线法标准曲线法例例1：KCl溶液，在于溶液，在于20 时测得其折光率为时测得其折光率为1.3564 ，溶剂（水）在，溶剂（水）在20 的折光率为的折光率为1.3330。已知。已知KCl的折光率因素（的折光率因素（F）为为0.0

18、0117 求求KCl溶液的浓度。溶液的浓度。解：解：1.3564 - 1.3330C = =20 （g /ml ，% ）0.00117答：答：KCL溶液的浓度为溶液的浓度为20% 。增高增高6 时折光率减少了：时折光率减少了：0.0001 6 = 0.0006故故20 时折光率为时折光率为1.3460 + 0.0006 =1.34661.3466 1.3330C = _= 10.38= 10.380.00131答: KI溶液的浓度为10.38% 自然光自然光自然光自然光偏振光片偏振光片偏振光片偏振光片偏振光偏振光偏振光偏振光供试品管供试品管供试品管供试品管偏振面转偏振面转偏振面转偏振面转或称尼

19、科或称尼科或称尼科或称尼科（含旋光性物质的溶液（含旋光性物质的溶液（含旋光性物质的溶液（含旋光性物质的溶液 ） 过了一定过了一定过了一定过了一定尔棱镜尔棱镜尔棱镜尔棱镜的角度的角度的角度的角度旋光法的一般原理旋光法的一般原理（二）、（二）、影响旋光度因素影响旋光度因素1 、温度、温度 t3 、溶剂、溶剂4 、 浓度浓度5 、液层厚度、液层厚度（三）、（三）、旋光法在药物分析中应用旋光法在药物分析中应用1 、定性与杂质检查、定性与杂质检查2 、溶液的含量测定、溶液的含量测定1）标准曲线法）标准曲线法2）比旋光度法）比旋光度法2 、波长、波长 4 4 5 5 x x 3 3 2 2 1 10 0C

20、 C1 1 c c2 2 c c3 3 c c4 4c cx xc c5 5 c c 旋光法的定量方法-标准曲线法第三章 药物的杂质检查 药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。 第一节 概 述 一、药物的纯度要求 药物的纯度即纯净程度，是反映药品质量的一项重要指标。 对药物质量的评价 ： 三效：高效、长效、速效; 三小：毒性、用量、副作用小。药物的纯度 通常可以从 （）药物的结构，（）外观性状， （）理化常数，（）杂质检查，（）含量测定等方面作为一个有联系的整体来表明和评定药物的纯度。所以在药物的质量标准中就规定药物的纯度要求。 二、杂质的来

21、源和种类 （一）杂质的来源 1、生产过程中引入的杂质：来源 于制备 原料、溶剂 、试剂、中间产品、副产品、器械等等。 2、贮存过程中引入的杂质：来源于外界条件 包装、运输、保管不妥（受光线、温度、空气、微生物的影响等等）。 （二） 杂质的种类 药物中的杂质来源可分为一般杂质和特殊杂质。 一般杂质是指在自然界分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。 特殊杂质是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。容许量。三、杂质的限量的检查 （一）、没有必要把药物中的杂质完全除去从杂质的来源考虑，完全除去药物中的杂质，即不可能也没有必要。 （二

22、）、药物中杂质允许最大限度的原则： 在不影响药物的疗效和不发生毒性的前提下，允许药物中存在有一定量的杂质。这一允许量被称为杂质的限量。 杂质限量 指药物中所含杂质的最大容许量。 药物中杂质的检查多数采用限量检查（limit test ），该检查不要求测定杂质的含量，而只检查其是否超过限量。 由于以上的原因， 因此，药物的杂质 检查又称纯度检查，限度（限量）检查。 A、取一定量供试品 结果 （产生色或浑浊） B、取一定量与 被检杂质相同 同上处理 的纯物质或其他对照品标准液 结果 （色或浑浊 ） 药物的限量检查的方法：比色法或比浊法当 A B 时：本项不合格。当 A B 时： 本项合格。当 A

23、= B 时： 重做。依法处理 然后比较A和B： 杂质的限量 通常用百分之几 (%) 或百万分之几 ( 10-6 ) 来表示。 1 g = 10-6g = 10-3mg杂质限量的计算： 杂质限量（L）= 100% 杂质限量= 100% L = 100%杂质的最大允许量供试品量标准溶液的体积（V） 标准溶液的浓度（C） 供试品的量（S）C V S 应用示例一 对乙酰氨基酚中氯化物检查 取对乙酰氨基酚2.0g ，加水100ml时，加热溶解后冷却，滤过，取滤液25ml ，依法检查氯化物（中国药典，附录VIIIA），所发生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml 相当于10g的cl-）制成的对照液比较

24、，不得更浓。问氯化物的限量是多少？L =CVS 100% = 0.01 52 103 25100100% = 0.01%第二节 一般杂质的检查方法 一、 氯化物的检查法 1、原理：中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定标准氯化钠溶液在相同的条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。 C l- A g C l （ 微 量 时 浑 浊 ） 稀 HNO3AgNO3 2、方法：比浊法 A、取一定量供试品 产生AgCl (浑浊） B、取一定量标准NaCI 液 同上 （标准 NaCI 浓度C= 0.01 mg CI - /ml ） （如 A 浊度

25、比B小则本项合格）。3、注意点：（1）加HNO 3 目的； A、AgCI 不溶于HNO 3 可在HNO 3 中 产生最好 的乳化浑浊； B、加速 AgCI 的 产生； C、防止产生Ag2 0 ，Ag3PO4 , Ag2CO3 因为 这些溶于HNO 3 这样就可以防止CO 32 -， OH - ，PO43 - 干扰。（2）加HNO 3 的 量要合适 （3）CI - 浓度（4）温度（6）有干扰物必须消除。 A、如：（有色） 取两分等量供试品： a、 一份做供试液（A管） 依法检查 b、另一份 AgCI 滤液（B 管加入 规定量的标准NaCI溶液作为对照管）。 加稀 HNO 3过滤B、用滤纸过滤时，

26、滤纸中如含有氯化物，可预先用含 有硝酸的水溶液洗净后使用。 C、Br - 、I - 与AgNO3 作用均能生成Ag（卤化银）； 硫氰酸盐能与AgNO 3 作用生成硫氰酸银 ， 以上均有干扰。因此，必须排除。（5）严格按照操作顺序进行AgNO3（7）、溶于水的有机药物（如有机酸碱金属盐）按药典附录方法直接检查氯化物。不溶于水的有机药物，多数加水振摇，使所含氯化物溶解，滤过，取滤液依法检查（也有用丙酮溶解后检查的）。2、方法：比浊法 依法处理A、供试品一定量 产生BaSO4 的浑浊 HCl，25% BaCI 2 同上B、取一定量K 2 SO 4 标准液 同上HCl25% BaCI 2三、铁盐检查法

27、：Fe3+ + 6 SCN-、方法：比色法 （）供试品 水mI加水稀释或约35mI后 Fe（SCN）6液（30 100）3 mI，再加水适量稀释成 50mI，摇均如显色与标准溶液比较。（2）标准铁溶液处理显色（一）硫氰酸盐法加硫氰酸铵溶（二） 巯基醋酸法 （“巯”音“球”） BP采用巯氰醋酸（mercaptoacetic acid）法检查药物中铁盐。 原理 硫氰醋酸还原Fe 3为Fe 2 ，在氨碱性溶液中进一步与Fe2作用生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法处理后产生的颜色进行比较，以限制铁的量。3）注意点： 1）加HCI防止铁盐水解生成2Fe3 2HSCH2COOH 2Fe2SCH2C

28、OOH 2H SCH2COOH2Fe3 2HSCH2COOH Fe（SCH2COOH）2 H Fe（SCH2COOH）2 Fe（SCH2COO）22 2H20 2OH- 红色 OH- Pb2+ PbS Na2S（3）含芳环或杂环的有机药物，先进行结构破坏，使共价的铅变为游离的铅，再采取上述的（1）或者（2）法检查。 .方法 第一法 硫代乙酰胺法 原理 硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈现颜色比较，颜色不得更深。 CH3CSNH2 H20 CH3CONH2H2S H2S Pb2

29、 PbS 2H pH3.5操作方法（比色法）： 依法处理 A、一定量供试品 PbS HAC、H2S 注意点： pH：pH3.5 在此条件下沉淀完全 ；不溶于HAC的检品在OH- 中进行。 同上 B、取一定标准铅液 PbSPb(NO3)2 第二法 适用于在水、乙醇中难溶，或能与金属离子形成配位化合物的有机药物。 原理 将供试品炽灼破坏后 ，加硝酸加热处理，使有机物分解，破坏完全后，再按第一法进行检查。 第三法 适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等。 原理 在碱性介质中，以硫化钠为显色剂，使Pb2 生 成PbS 微粒的混悬液，与一定标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较

30、不得更深。 第四法 微孔滤膜法。 适用于重金属限量低的药物。（含25g重金属）的检查。 。 原理 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液同法处理后产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量 。 试验装置图见下页 五、 砷盐检查法 （一）古蔡（Gutzeit）氏法 原理 金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。砷斑： As3 3Zn 3H 3Zn2 AsH3AsO3 - 3Zn9H 3Zn2+ 3H2O AsH3AsH3 3HgBr2 3HBr As（

31、HgBr）3 （黄色） 2As（HgBr）3 AsH3 3 AsH（HgBr）2 （棕色） As（HgBr）3 AsH3 3HBr As2 Hg3 （棕黑色）装置: 方法 注意事项 供试品处理 含锑药物，如葡萄糖酸锑钠，用古蔡氏法检查时， 锑盐也可被还原为锑化氢，与溴化汞试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检出： SbH3 HgBr2 SbH2（HgBr）HBr 可改用白道田夫（Betterdorff）法检查砷盐。方法原理是氯化亚锡在盐酸中将砷盐还原成棕褐色的胶态砷，与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较，可控制 供试品中的砷量： 2As3 3SnCl2 6HCl 2As 3 SnCl4 6H

32、 此法的反应灵敏度以As2O3 计20g。少量二氯化汞的加入，能提高反应灵敏度达20g/10ml。（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（silve diethyldithiocarbamate）简称Ag （DDC）法 本法为中国药典和USP（24）收载的方法。不仅可用于砷盐的限量检查，也可用作微量砷盐的含量测定。原理 金属锌与酸作用，产生新生态的氢，与微量砷盐反应，生成具有挥发性的砷化氢； 砷化氢遇二乙基二硫代氨基甲酸银，NAsH3 6Ag（DDC）3NAs（DDC）3 6Ag 3HDDC使其还原产生红色的胶态银，用目视比色法或在510nm 波长处测定吸收度，再以一定量标准砷溶液用同法处理后得到的有

33、色溶液进行比较。六、 溶液颜色检查法 有色杂质可能在药物的生产过程中引入，也可能由贮藏过程产生。对溶液颜色进行检查，可控制药物中有色杂质的含量。中国药典采用的检查方法有三种。 （一）目视比色法 （二）分光光度法 （三）色差法 原理 方法七、 易炭化物检查法 易炭化物检查法是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，用硫酸呈色的方法可以简便地控制他们的总量。方法注意事项八、 溶液澄清度检查法 澄清度可反应药物溶液中的微量不溶性杂质的存在情况，在一定的程度上可反映药品的质量和生产的工艺水平，对于供制备注射液用原料药物的纯度检查尤为重要。 原理 乌洛托品在偏酸性条件下

34、水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成不溶于水的甲醛白色浑浊。（CH2）6N4 6H2O 6HCHO4NHSHCHOH2N NH2 H2C = N NH2 H2O 方法 注意事项九、 炽灼残渣检查法 中国药典和美国药典对炽灼残渣（residue on ignition ）的定义：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。英国药典称去其为硫酸灰分（sulphated ash）。炽灼残渣检查用于控制有机药物和挥发性无机药物中存在的非挥发性无机杂质。方法注意事项十、 干燥失重测定法 干燥失重系指药品在规定的条件下，经干燥后所减少的量，以百分率表示。干燥失重的量应恒

35、重。由干燥至恒重的第二次及各次称重均应在规定的条件下继续干燥1h后进行。 （一）常压恒温干燥法 本法适用于受热较稳定的药物。 方法 注意事项 （二） 干燥剂干燥法 本法适用于受热分解、或易于挥发的供试品。干燥剂：（1）硅胶 ( 吸水力大于硫酸, 使 用方便, 价廉, 变色, 可以反复使用） （2）硫酸（吸水次之，较便宜） （3）五氧化二磷（吸水力强，但价高）（三） 减压干燥法 本法适用于熔点低、受热不稳定或难驱除水分的药物。原理方法注意事项（四）热分析法 在程序控制温度的情况下，测定物质的物理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法称为热分析法。该方法具有样品用量少，灵敏、快速等优点，在药物分析

36、中广泛用于物质的熔点、多晶型、纯度、溶剂化物、水分及热解产物的测定。根据测定物理量的不同，热分析法又有不同的名称。药物分析中常用的热分析方法是：热重分析法、差示热分析法、差示扫描量热法。 1热重分析法（thermogravimetric analysis，TGA） 2差示热分析法（differential thermal analysis ） 3差示扫描量热法（differential scanning calorimetry，DSC ）十一、 有机溶剂残留量测定 中国药典附录收载的残留溶剂测定法有溶液直接进样法和顶空进样法两种。第一法 溶液直接进样法 方法 注意事项 第二法 顶空进样法方法注

37、意事项应用示例一 壬苯醇醚中二氧六环检查应用示例 二 秋水仙碱中氯仿和醋酸乙酯的检查 第三节 特殊杂质检查方法 一、利用药物和杂质在物理性质上的差异 （一）臭味及挥发性的差异 （二） 颜色的差异 （三）溶解行为的差异 （四）旋光性质的差异 （五） 对光吸收性质的差异 1紫外分光光度法 2原子吸收分光光度法 3红外分光光度法 4荧光分析法（六） 吸附或分配性质的差异 1薄层色谱法 2 纸色谱法 3高效液相色谱法 4气相色谱法二、利用药物和杂质在化学性质上的差异 （一）酸碱性的差异 1 规定消耗滴定液的体积 2 PH值法 3指试剂法（二） 氧化还原性的差异（三） 杂质与一定试剂反应产生沉淀（四）

38、杂质与一定试剂反应产生颜色（五） 杂质与一定试剂反应产生气体（六） 药物经有机破坏后检查杂质 1硒检查法 2氟检查法第四章药物定量分析与分析方法验证第一节 定量分析样品的前处理方法一、概述 含金属或卤素的药物，如葡萄糖酸锑钠，硬脂酸镁、碘苯酯、磺溴酞钠等，在分析前需要经过不同方法处理之后，方可进行测定。处理方法因金属或卤素在分子中结合的牢固程度而异，如：有机卤素药物，所含卤素原子均直接与碳原子相连，但不同药物中卤素所处的位置不同，则与碳原子结合的牢固程度就有差异。如果卤素和芳环相连接，则结合牢固，与脂肪链的碳原子相连接，则结合不牢固；而含金属的有机药物，有两种情况：一是金属原子不直接与碳原子相

39、连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，称为含金属的有机化合物，其分子结构中的金属原子结合不够牢固，在水溶液中既可离解出金属离子，如有机结构部分不干扰分析时，可在溶液中直接进行其金属的鉴别或含量定；二是金属原子直接与碳原子以共价键相连接，结合状态比较牢，称为有机金属药物，在溶液中其金属一般不能解离成离子状态，应该根据共价键的牢固程度，经适当处理，将其金属转变为适于分析的状态，应该根据共价键的牢固程度，经适当处理，将其金属转变为适于分析的状态（多转变为无机的金属盐或离子），方可进行其金属的鉴别或含量测定。二、不经有机破坏的分析方法（一） 直接测定法 凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某

40、些C-M（金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中可以电离，因而不需有机破坏，可直接选用适当的方法进行测定 。（二）经水解后测定法 1直接回流后测定法 2用硫酸水解后测定法（三）经氧化还原后测定法 1 碱性还原后测定 2 酸性还原后测定 3 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量三、 经有机破坏的分析方法（一） 湿法破坏 1 硝酸-高氯酸法 2 硝酸-硫酸法 3 硫酸-硫酸盐法 4 其它湿法（二） 干法破坏 （三） 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method）系将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲

41、测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素的有机药物。 本法是快速分解有机物的简单方法，它不需要复杂设备，就能使有机化合物中的待测元素定量分解成离子型。该方法被各国药典所收载。 1 仪器装置 燃烧瓶为500ml、1000ml、或2000ml磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞应严密、空心、底部熔封铂丝一根（直径为1mm），铂丝下端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的23 ，如图 2 称样3 燃烧分解操作法4 吸收液的选择 第二节 定量分析方法特点 一、 容量分析法（一） 容量分析法的特点（二） 容量分析法的计算问题 1

42、 滴定度 2 滴定度（T）的计算 3 百分含量计算 （1） 直接滴定法含量%=VT W100%=VTFW100% （2）回滴定法（剩余滴定法 ） 二、 光谱分析法（一）紫外-可见分光光度法 1特点 紫外-可见分光光度法是根据物质分子对波长为200nm760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的光谱分析方法。主要特点如下：（1）灵敏度高，可达10-4g/ml10-7g/ml 。（2）准确度高，相对误差为2% 5%。（3）仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。 含量%=（VAFAVBFB）T W100% 2郎伯-比耳定律 3仪器校正和检定 4对溶剂的要求 5测定法（二） 荧光分析法 1特点 2

43、荧光分析仪 3含量测定 三、 色谱分析法 色谱分析法（又称层析法）根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等。又可根据分离方法分为：纸色谱、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。（一） 高效液相色谱法 1对仪器的一般要求系统适用性实验 （1）色谱柱的理论塔板数（n） （2）分离度 . 测定法 （1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量：AS/CS AR/CR Ax校正因子（f）=含量（C）=fAS/CS （2）外标法测定供试品中主成分含量： 外标法可分为标准曲线法和外标一点法。 1）标准曲线法： 2）外标一点法： (二) 气相色谱法 1. 对仪器的一般要

44、求 2. 系统适应性实验 3. 测定法 第三节 药品质量标准分析方法验证 验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。 一、 准确度 （一）含量测定的准确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内建立。回收率的计算可按下式： 回收率%=测定平均值-空白值 加入量 100%(二) 数据要求二 、 精密度 精密度系指在规定的测定条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得的结果之间的接近程度。(一) 精密度表示方法 1. 偏差(deviation，d ) .标准偏差(sta

45、ndard deviation ，SD )S=（XiX）2n13. 相对标准偏差(relative standard deviation,RSD ),也称变异系数(coefficient of varation,CV )RSD=标准偏差 平均值100% =S X 100%(二) 重复性、中间精密度及重现性 1. 重复性 在相同的条件下，由一个分析人员测定所得结果的 精密度称为重复性。2中间精密度 同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度，称为中间精密度。3重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。 (三) 数据要求三、专属性 专属性系指在其他成分（

46、如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方能准确测定出被测物的特性。(一) 鉴别反应(二) 含量测定和杂质测定四、 检测限 检测限（limit of detection，LOD）是试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。LOD是一种限度检验效能指标，即反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白（本底）值的高低。它无需定量测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。根据所采用的方法来确定检测限。(一) 常用的方法1. 非仪器分析目视法2. 仪器分析时的测定法（二）数据要求五、定量限 定量限（limit of quantitation ，LOQ）是指样品中被测物能被定量测定的最

47、低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。 六、线性 线性 系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 七、范围 范围是指能到达一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限浓度或量的区间。八、耐用性 耐用性 系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。 1用于鉴别试验 2用于原料药中杂质测定或制剂中的降解产物测定的方法 3用于原料药中主成分或制剂中有效组分含量测定及溶出度测定 第四节 生物样品分析方法的基本要求一、常用样品的种类、采集和储贮藏 生物样品包括各种体液和组织，但实际上最常用的

48、是比较容易得到的血液（血浆、血清、全血）尿液、唾液。(一) 血样 血浆（plasma）和血清（serum）是最常用的生物样品。(二) 唾液(三) 尿液二、生物样品分析前处理技术(一) 去除蛋白质1加入与水相混溶的有机溶剂2加入中性盐3加入强酸4加入含锌盐及铜盐的沉淀剂5酶解法（二）缀合物的水解（三）分离、纯化与浓集1液-液提取法(liquid-liquid extraction ,LLE)2液-固提取法(liquid solid extraction,LSE)3被测组分的浓集(四) 化学衍生化1GC中化学衍生化法2HPLC中化学衍生化法三、 定量分析方法验证(一) 特异性 必须证明所测定的物质

49、是原形药物或特定的活性代谢物，内原性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰样品的测定。对于色谱法至少要提供空白样品色谱图、空白生物样品加标准物质色谱图及用药后的样品色谱图。(二) 标准曲线与线性范围 所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法所得的回归方程来评价。一般控制相关系数r0.9900。标准曲线高低浓度范围为线性范围，在线性范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度。(三) 精密度与准确度 要求选择三个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察，低浓度选择在最低定量限（LOQ）附近，高浓度在标准曲线的上限附近，中间选一个浓度，每一个浓测定五个样品。 精密度用质控样

50、品的日内和日间相对标准偏差（RSD）表示，一般RSD 应小于15%，在LOQ附近RSD应小于20%。 准确度是指用特定方法测得的生物样品浓度与真实浓度的接近程度，可用相对回收率表示，即采用“回收率”或“加样回收率”得到的药物自样品中回收率。其值一般应在85%115%范围内，在LOQ附近应在80%120%范围内。 (四) 最底定量限 最低定量限指标准曲线的最低浓度点，也称灵敏度，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度，要求LOQ至少能满足测定35个半衰期时样品中的药物浓度或Cmax的1/101/20时的药物浓度。(五) 样品稳定性(六) 提取回收率(七) 质控样品(八) 质量控制第五

51、章 巴比妥类药物的分析 一、巴比妥类药物的结构剖析 巴比妥类药物为环状酰脲类镇静催眠药，是巴比妥酸的衍生物，其基本结构通式为：由于5位取代基R1和R2不同，形成不同的巴比妥类药物。NHNHOOOR1 R2 213456 二、巴比妥类药物的理化性质（一）弱酸性：巴比妥类药物的母核环状结构中含有1，3-二酰亚胺基团，能使其分子发生酮式-稀醇式互变异构，在水溶液中发生二级电离。NHCOCOCNHCOR1R2NHCOCNCOR1R2OH +H+H+ pK1=8NHCOCNCOR1R2O-H+H+ pK2=12NCCNCOR1R2O-O-（二） 水解反应 1巴比妥类药物的水解 本类药物的分子结构中含酰亚

52、胺基团，与碱溶液共沸即水解释放氨气，可使红色石蕊试纸变蓝。 2巴比妥类药物钠盐的水解 本类药物的钠盐，在吸湿的情况下也能水解。(三) 与重金属离子的反应 1与银盐的反应 巴比妥类药物分子结构中含有酰亚胺基团，在碳酸钠溶液中， 生成钠盐而溶解，再与硝酸银反应，首先生成可溶性的一银盐，加入过量的硝酸银溶液，则生成难溶性的二银盐白色沉淀。此反应可用于本类药物的鉴别和含量测定。NHCOCNCOR1R2ONa+AgNO3Na2CO3+NCOCNCOR1R2ONaAg+NaHCO3 NaNO3 +NCOCNCOR1R2ONaAg+AgNO3NCOCOCNCOR1R2AgAgNaNO3+ 2与铜盐的反应 3

53、与钴盐的反应 4与汞盐的反应（四）与香草醛(Vanillin)的反应 巴比妥类药物分子结构中丙二酰脲基团中氢比较活泼，可与香草醛在浓硫酸存在下发生缩合反应，生成棕红色产物。（五）紫外吸收光谱特征（六）薄层色谱行为特征 1薄层色谱法 2高效液相色谱法 （七）显微结晶1药物本身的晶形2反应产物的晶形三、鉴别试验 巴比妥类药物的结构特征和具有的理化特性，如分子结构中含有的酰亚胺基，硫元素与不同取代基等均可用于本类药物的鉴别试验。常用的鉴别试验方法有丙二酰脲类鉴别试验，制备衍生物测定熔点，芳环反应，不饱和键反应，硫和钠元素等。另外，巴比妥类药物光谱和色谱行为特征也可用于本类药物的鉴别。（一）丙二酰脲类

54、鉴别反应1银盐反应的方法2铜盐反应的方法（二）测定熔点1司可巴比妥钠的鉴别2苯巴比妥钠的鉴别3巴比妥的鉴别（三）利用特殊取代基或元素的鉴别试验1利用不饱和取代基的鉴别试验（1）与碘试液的反应：（2）与高锰酸钾的反应2利用芳环取代基的鉴别试验（1）硝化反应（2）与硫酸-亚硝酸钠的反应（3）与甲醛-硫酸的反应3硫元素的鉴别试验四、特殊杂质检查(一) 苯巴比妥的特殊杂质检查 1酸度 2溶液的澄清度 3中性或碱性物质(二) 司可巴比妥钠的特殊杂质检查 1溶液的澄清度 2中性或碱性物质五、 含量测定(一) 银量法 基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，可与银离子定量成盐。 其测定反应见本章理化特征项下。因

55、此，可采用银量法测定本类药物及其制剂的含量。如苯比妥及其钠盐异戊巴比妥及其钠盐以及他们的制剂，中国药典均采用银量法测定其含量。 在滴定过程中，巴比妥类药物首先形成可溶性的一银盐，当被测定的巴比妥类药物完全形成一银盐后，稍过量的银离子就与巴比妥类药物形成难溶性的二银盐沉淀使溶液变浑浊，以此指示滴定终点。(二) 溴量法 凡在5位取代基含有不饱和键的巴比妥类药物，其不饱和键能与溴定量地发生加成反应，故可采用溴量法测定其含量。（三）酸碱滴定法 巴比妥类药物呈弱酸性，可作为一元酸以标准碱液直接滴定，或在非水溶液中用强碱溶液直接滴定。此法虽然未被中国药典收载，但也可用于本类药物的含量测定，常用的方法如下：

56、 1在水-乙醇混合溶剂中的滴定 基于本类药物在水中的溶解度较小，滴定时多在醇溶液或含水的醇溶液中进行，这样可避免反应中产生的弱酸盐易水解而影响滴定终点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。 2胶束水溶液中的测定方法 本法是在有机表面活性剂的胶束水溶液中进行进行滴定，用指示剂或电位法指示终点。因表面活性剂能改变巴比妥类药物的离解平衡，使药物的Ka 增大，即使巴比妥类药物酸性增强，因此使滴定终点的变化明显。 3非水溶液滴定法 巴比妥类药物在非水溶液中的酸性增强，用碱性的标准溶液滴定时，终点较为明显，可获得比较满意的结果。（四）紫外分光光度法 巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明显的紫外

57、吸收。但在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构， 因而可采用紫外分光光度法测定其含量。 1直接测定的紫外分光光度法 2提取分离后的紫外分光光度法 3差示紫外分光光度法（五）高效液相色谱法 1色谱条件 2样品预处理 3线性范围和最底检测限第六章 芳酸及其酯类药物的分析第一节 典型药物分类与理化性质一、水杨酸类 (一) 典型药物 (二) 主要理化性质二、 苯甲酸类 (一) 典型药物 (二) 主要理化性质三、 其他芳酸类（一）典型药物（二）主要理化性质第二节 鉴别试验一、与铁盐的反应 1水杨酸及其盐在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液反应，生成紫堇色配位化合物。 2苯甲酸的碱性水溶液或苯甲酸的中性

58、溶液，与三氯化铁试液生成碱式苯甲酸铁的赭色沉淀。 3丙磺舒加少量氢氧化钠试液使生成钠盐后，在PH约5.06.0水溶液中与三氯化铁试液反应，既生成米黄色沉淀。 4布落芬的无水乙醇溶液，加入高氯酸羟胺-无水乙 醇试液及N, N-双环已基羧二亚胺(DCC)-无水乙醇试液，混合后，在温水中加热20min。冷却后，加高氯酸铁-无水乙醇液，即呈紫色JP(14)的方法。二、重氮化-偶合反应 1贝诺酯具潜在的芳伯氨基，加酸水解后产生芳伯氨基结构，在酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应， 生成的重氮盐与碱性-萘酚偶合生成橙红色沉淀. 2甲芬那酸的甲醇溶液，与对-硝基苯重氮盐试液在氢氧化钠碱性条件下偶合产生橙

59、红色JP (13)的方法。三、 氧化反应四、水解反应 1阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并发生醋酸的臭气。沉淀物于1000C1050C干燥后，熔点为1560C1610C。 2双水杨酸酯与氢氧化钠试液煮沸后，加稀盐酸，既生成白色水杨酸沉淀；分离后，沉淀用水洗涤，并于1000C1050C干燥其熔点约为158 0C，该沉淀在醋酸铵试液中又可溶解。 3氯贝丁酯分子中具有酯结构，碱水解后与盐酸羟胺生成异羟酸盐，在弱酸性条件下加三氯化铁即呈紫色异羟酸铁。 4羟苯乙酯的乙醇溶液，煮沸后，加硝酸汞试液，放置后逐渐生成沉淀，上清夜呈红色。五、分解产物的

60、反应 1苯甲酸盐可分解成苯甲酸升华物，分解产物可用于鉴别。 2含硫的药物，可分解后鉴别。 3丙磺舒高温加热时，能产生二氧化硫气体，具SO2臭味。六、 紫外吸收光谱法(一) 利用紫外特征吸收法 1贝若酯 2氯贝丁酯 3羟苯乙酯 4丙磺舒 5布洛芬 6甲芬那酸(二) 利用双波长吸收度比法 1对氨基水杨酸钠 2甲芬那酸七、红外吸收光谱法 第三节 特殊杂质检查 一、阿司匹林中特殊杂质的检查 (一) 合成工艺 (二) 检查 1溶液的澄清度 2水杨酸 3易炭化物 二、 对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 (一) 合成工艺与间氨基酚杂质的产生 (二) 双相滴定法与原理 (三) 高效液相色谱法三、羟苯乙酯中有关物