实验四体外受精新PPT学习教案

1、会计学1实验四体外受精新实验四体外受精新体外受精技术不仅是探明受精机制的重要实验手体外受精技术不仅是探明受精机制的重要实验手段，而且也是为其它实验提供所需胚胎的重要技术段，而且也是为其它实验提供所需胚胎的重要技术.通过本实验的学习，通过本实验的学习，掌握体外受精原理和基本操掌握体外受精原理和基本操作程序，并且能观察到作程序，并且能观察到哺乳动物哺乳动物早期胚胎的发育情早期胚胎的发育情况。况。一、目的与意义一、目的与意义第1页/共27页哺乳动物体内成熟或经过体外成熟的卵子，与获哺乳动物体内成熟或经过体外成熟的卵子，与获能的射出精子（家畜）或附睾尾精子在适宜的培能的射出精子（家畜）或附睾尾精子在适

2、宜的培养液中能够受精，并具有发育形成新的个体的能养液中能够受精，并具有发育形成新的个体的能力；力；本实验，采用常规的小鼠体外受精方法，即利用本实验，采用常规的小鼠体外受精方法，即利用小鼠附睾尾精子和通过超排处理获得的卵子，利小鼠附睾尾精子和通过超排处理获得的卵子，利用改良的用改良的M16M16溶液，观察其体外受精过程。溶液，观察其体外受精过程。 二、实二、实 验验 原原 理理第2页/共27页受精过程：受精过程：精子穿越放射冠，与精子穿越放射冠，与卵子发生特异性结合卵子发生特异性结合精子穿越透明带和卵黄膜，精子穿越透明带和卵黄膜，进入卵细胞内进入卵细胞内发生透明带反应和发生透明带反应和卵膜阻断，

3、防止多精受精卵膜阻断，防止多精受精原核形成，次级卵母细胞发生第二次成熟分裂原核形成，次级卵母细胞发生第二次成熟分裂，排出第二极体，排出第二极体第3页/共27页第4页/共27页第5页/共27页第6页/共27页 最早尝试体外受精的是德国科最早尝试体外受精的是德国科学家学家SchenkSchenk 1951 1951年年ChangChang（美籍华人）和（美籍华人）和Austin Austin 发现了精子的获能现象使体发现了精子的获能现象使体外受精成为可能外受精成为可能 目前，在许多动物（人、家畜目前，在许多动物（人、家畜、实验动物）通过体外受精均获得、实验动物）通过体外受精均获得了后代。了后代。

4、19781978年年7 7月月2525日，日，英国医英国医学家罗伯特学家罗伯特爱德华和派屈克爱德华和派屈克斯斯蒂普托，用人卵母细胞体外受精和蒂普托，用人卵母细胞体外受精和胚胎移植技术，制造了世界上胚胎移植技术，制造了世界上第一第一例试管婴儿例试管婴儿。这名试管婴儿叫。这名试管婴儿叫路易路易斯斯布朗布朗。 体外受精的发展体外受精的发展第7页/共27页试管婴儿试管婴儿 第8页/共27页第9页/共27页器械与仪器：器械与仪器：二氧化碳培养箱、实体显微镜、加温板二氧化碳培养箱、实体显微镜、加温板、血球计数板、滤纸、移卵管、微量移液器、血球计数板、滤纸、移卵管、微量移液器、35mm35mm培培养皿、实验

5、动物手术器械等。养皿、实验动物手术器械等。药品与培养液：药品与培养液：PMSGPMSG、hCGhCG、PB1PB1、 M16M16液液、 液体石蜡液体石蜡实验动物：实验动物：性成熟雄性和雌性小鼠性成熟雄性和雌性小鼠三、实验仪器与试剂药品三、实验仪器与试剂药品第10页/共27页四、实验步骤四、实验步骤超数排卵：超数排卵：选择性成熟的雌性小鼠，间隔选择性成熟的雌性小鼠，间隔48h48h依次依次腹腔内注射各腹腔内注射各1010单位单位PMSGPMSG和和hCGhCG； 1.1.实验动物的准备实验动物的准备第11页/共27页. . 精子悬浮液的制备精子悬浮液的制备 采用颈椎脱臼法处死雄性小鼠，采集附睾

6、尾；采用颈椎脱臼法处死雄性小鼠，采集附睾尾；将附睾尾导入在培养皿内用培养液（将附睾尾导入在培养皿内用培养液（M16M16）制成的培养滴中）制成的培养滴中，并用眼科剪横断附睾尾；，并用眼科剪横断附睾尾；当精子充分游出后，将附睾尾组织从操作液取出。将含有精当精子充分游出后，将附睾尾组织从操作液取出。将含有精子的培养滴作为精子悬浮液用于调制受精用精子液。子的培养滴作为精子悬浮液用于调制受精用精子液。第12页/共27页取精子悬浮液取精子悬浮液10l10l并稀释并稀释1010倍，采用红细胞计数法计测精倍，采用红细胞计数法计测精子悬浮液中的精子密度；子悬浮液中的精子密度；计算加入培养液中精子悬浮液的量，调

7、整培养液中的精子密计算加入培养液中精子悬浮液的量，调整培养液中的精子密度为度为5 510105 5个个/ml/ml；将含有调整好的精子液置于二氧化碳培养箱中预培养将含有调整好的精子液置于二氧化碳培养箱中预培养1 12h2h使精子获能。使精子获能。. .精子液的调制及预培养精子液的调制及预培养第13页/共27页4.4.卵丘卵子复合体的采集卵丘卵子复合体的采集雌性小鼠经超排处理，在注射雌性小鼠经超排处理，在注射hCGhCG后第后第141416h16h，采集输卵管并置于，采集输卵管并置于滤纸上；滤纸上；将输卵管导入用液体石将输卵管导入用液体石蜡封盖的受精用蜡封盖的受精用M16M16液培液培养滴旁的液

8、体石蜡内。养滴旁的液体石蜡内。第14页/共27页4. 4. 媒精媒精在实体显微镜下，用金属针或注射针撕破置于在实体显微镜下，用金属针或注射针撕破置于M16M16液培液培养滴旁液体石蜡内的输卵管膨大部，牵引其内的卵丘卵子养滴旁液体石蜡内的输卵管膨大部，牵引其内的卵丘卵子复合体并导入含有预培养的精子液滴中进行媒精。然后置复合体并导入含有预培养的精子液滴中进行媒精。然后置于二氧化碳培养箱中进行体外受精。于二氧化碳培养箱中进行体外受精。第15页/共27页5.5.结果观察结果观察根据需要，对获得根据需要，对获得的的2-2-细胞期进行体细胞期进行体外培养，观察发育外培养，观察发育至囊胚的能力。至囊胚的能力

9、。媒精后，经媒精后，经30min30min、和依次观察颗粒细胞和依次观察颗粒细胞脱落状态；脱落状态；根据需要，对获得根据需要，对获得的的2-2-细胞期进行体细胞期进行体外培养，观察发育外培养，观察发育至囊胚的能力。至囊胚的能力。第16页/共27页有分裂沟无分裂沟第17页/共27页2.2.二细胞蛙胚二细胞蛙胚第18页/共27页第19页/共27页囊胚早期囊胚早期囊胚晚期囊胚晚期第20页/共27页原肠早期原肠早期-明显背唇，腹唇初现明显背唇，腹唇初现原肠晚期原肠晚期-背腹唇和内卷明显背腹唇和内卷明显第21页/共27页神经板脊索第22页/共27页第23页/共27页第24页/共27页第25页/共27页五、要求五、要求1.1.掌握小鼠体外受精的基本步骤掌握小鼠体外受精的基本步