酵母菌的形态观察大小测定和直接计数PPT学习教案

1、会计学1酵母菌的形态观察大小测定和直接计数酵母菌的形态观察大小测定和直接计数第1页/共26页第2页/共26页第3页/共26页第4页/共26页第5页/共26页v1、基本原理、基本原理v 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定需借助测微尺-目镜测微尺和镜台测微尺。第6页/共26页第7页/共26页第8页/共26页第9页/共26页v 由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对

2、长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，计算出细胞的实际大小。v 球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范 围来表示。第10页/共26页v（1）装目镜测微尺）装目镜测微尺(换目镜换目镜)v把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。v（2）校正目镜测微尺：）校正目镜测微尺：v1）放镜台测微尺：将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。第11页/共26页v2）校正：先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测

3、微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。v用同样的方法换成高倍镜进行校正，测出在高倍镜下，两重合线之间两尺所占的格数。第12页/共26页v3）计算：目镜测微尺每格长度（um）=两重合线间镜台测微尺格数x10 / 两重合线间目镜测微尺格数v（3）菌体大小测定：）菌体大小测定：目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上酵母菌染色制片。先在低倍镜下找到标本，换高倍镜测定酵母菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜测微尺和移动载玻片，测出酵母菌的直径或宽和长所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘以目镜测微尺（在高倍镜下）每格所代表的长度，即为该菌的实

4、际大小。v（4）测定完毕：）测定完毕：取出目镜测微尺后，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦试干净，放回盒内保存。第13页/共26页v1、基本原理、基本原理v显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。第14页/共26页v用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。v该计数板是一块特制的载玻片，其上有四条槽构成三个平台

5、；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。第15页/共26页v计数室规格：计数室规格：v 25（中格）16（小格）v 16（中格） 25 （小格）v每种规格计数室中的小方格都是400个。v计数室大小：计数室大小：v 每一个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。第16页/共26页第17页/共26页16X25第18页/共26页v（1） 菌悬液制备v以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。v（2）镜检计数室v在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污

6、物，则需清洗，吹干后才能进行计数。v（3） 加样品v将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将要摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。v取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡产生。第19页/共26页v（4）显微镜计数）显微镜计数v加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。v调节显微镜光线的强弱适当，否则视调节显微镜光线的强弱适当，否则视野中不易看清楚计数室方格线，或只野中不易看清楚计数室方格

7、线，或只见竖线或只见横线。见竖线或只见横线。第20页/共26页由此处注入第21页/共26页每一中方格的周围皆有三条边线，计算单每一中方格的周围皆有三条边线，计算单一中方格的细胞数时，位于边线上的细胞一中方格的细胞数时，位于边线上的细胞计算方式为：以第二条边线计算方式为：以第二条边线( (简称中线简称中线) )为为界，接触到左侧中线与上端中线的细胞要界，接触到左侧中线与上端中线的细胞要算，接触到右侧与下端中线的细胞则不列算，接触到右侧与下端中线的细胞则不列入计算。如上图，若每一个圆圈皆代表活入计算。如上图，若每一个圆圈皆代表活细胞，空心的要算，而实心的不算。细胞，空心的要算，而实心的不算。 第22页/共26页v菌液浓度要适当，一般样品稀释度要求每小格约有510个菌体为宜。每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的一个中格）中的菌体进行计数。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。第23页/共26页v（5）