5.3血红蛋白的提取和分离(人教版精品)ppt课件

1、12血血一、基础知识一、基础知识 凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）1 1、凝胶：、凝胶：一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）2 2、概念：、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法3 3、原理：、原理：3;.45用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质A A路程较长，移动速度较慢路程较长，移动速度较慢 B B路程较长，移动速度较快路程较长，移动速度较快C C路程较短，移动速度较慢路程

2、较短，移动速度较慢 D D路程较短，移动速度较快路程较短，移动速度较快D6相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个B7缓冲溶液：缓冲溶液：能够抵制（能够抵制（ ） 对溶液的（对溶液的（ ）的影响，维持）的影响，维持PH PH 基本基本不变。不变。外界的酸或碱外界的酸或碱PHPH值值89使用使用SDS-SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A A 电荷的多少电荷的多少 B B 分子的大小分子的大小C C 肽链的多少肽链的多少 D D 分子形

3、状的差异分子形状的差异10分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液有机溶剂有机溶剂 （无色透明的甲苯层）（无色透明的甲苯层）脂类物质脂类物质 （白色白色脂溶性物质沉淀层）脂溶性物质沉淀层）血红蛋白溶液血红蛋白溶液 （红色透明液体）（红色透明液体）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）1112下列操作正确的是（下列操作正确的是（ ）A. A. 分离红细胞时采用低速长时间离心分离红细胞时采用低速长时间离心 B. B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C. C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心分离血红蛋白溶液是低速短时间离心 D. D.

4、 透析时要用透析时要用20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液，透析的磷酸缓冲液，透析12h12hD D13在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是A A洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐B B洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果C C洗涤过程选用洗涤过程选用0.1%0.1%的生理盐水的生理盐水D D透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质透析的目的是去除样品中相对分子质

5、量较小的杂质D14注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。1516173 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱加样前加样前 打开下端出口，使柱内凝胶面上的（打开下端出口，使柱内凝胶面上的（ ）缓慢下降到与（缓慢下降到与（ ）平齐，关闭出口）平齐，关闭出口缓冲液缓冲液凝胶面凝胶面18加透析样品加透析样品1920调整缓冲液面：与凝胶面平齐调整缓冲液面：与凝胶面平齐滴加透析样品：用（滴加透析样品：用（ ）将）将1

6、ml（ ）的样品加到色谱柱的（）的样品加到色谱柱的（ ）样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：（ ）洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱收集：待（收集：待（ ）接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每）接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每（ ）收集一试管连续收集）收集一试管连续收集注意正确的加样操作：注意正确的加样操作： 不要触及破坏凝胶面不要触及破坏凝胶面 贴壁加样贴壁加样 使吸管管口沿管壁环绕移动使吸管管口沿管壁环绕移动吸管吸管透析液透析液顶端顶端样品完全进凝胶层样品完全进凝胶层5ml红色的蛋白质红色的蛋白质21二、实验操作二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：

7、蛋白质的提取和分离一般分为四步：（1 1）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心等操作收集到的血红蛋白）样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白释放；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。溶液。（2 2）粗分离：透析除去分子较小的杂质。）粗分离：透析除去分子较小的杂质。（3 3）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。）纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。（4 4）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。）纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。22233.3.下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ ）A A可采集猪血作为实验材料