实验六++植物抗氧化酶活性的测定ppt课件

1、实验六实验六 植物抗氧化酶活性的测定植物抗氧化酶活性的测定背背 景景“控制与被控制实控制与被控制实际际POD、SOD、CAT （AOX） （PPO）抗氧化酶与植物抗逆性关系抗氧化酶与植物抗逆性关系Journal of Experimental Botany, 2021，602）：377390H2O2H2O2POD activity (mol.g-1 FW .min-1)024681012Soluble PODCWB-PODPOD activity of tobaccocallussuspension cells李忠光，2021.10POD一、实验原理一、实验原理 Peroxidase, POD

2、 （ROS,H2O2）PPOPolyphennol oxidase, PPO抗氧化酶动力学曲线抗氧化酶动力学曲线Wavelength400 420 440 460 480 500 520 540 560Absorbance00.00.10.20.30.40.50.60.7Reaction time (min)05101520253035Absorbance00.00.20.40.60.801.0525nm410nmAB植物抗氧化酶提取和测定参考文献二、实验方法二、实验方法1、提取：分别取、提取：分别取0.5 g实验材料实验材料加入少许石英砂和加入少许石英砂和3 ml提取液提取液50mmol/L

3、 PBS, pH5.8,内含内含0.mmol/ LEDTA, 1%PVP） 充分研磨充分研磨转入离心管中转入离心管中用用2 ml提取液提取液洗研钵洗研钵 5000 rpm离心离心10 min 上清液定容至上清液定容至5 ml 用用于测定于测定POD和和PPO酶活性或分装后转至酶活性或分装后转至-20或或-80保管。保管。 2、POD测定：取测定：取POD反应混合液反应混合液10mmol/L愈创木酚，愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用用PBS溶解溶解2.90 ml，25 水浴水浴5 min，加入酶液加入酶液100 ml空白调零用提取液取代），立即记时，空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀

4、，读出反应摇匀，读出反应30 s和和3 min时的时的A470。用。用计算计算POD活性。活性。3、PPO测定：取测定：取PPO反应混合液（反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，邻苯二酚，用用PBS溶解溶解2.8 ml， 25 水浴水浴5 min，加入酶液，加入酶液0.2 ml空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应空白调零用提取液取代），立即记时，摇匀，读出反应 30 s和和2 min时的时的A410。以每分钟。以每分钟A值变化值变化0.01所需要的酶所需要的酶液的量为一个活力单位液的量为一个活力单位U），那么：），那么：21470VVVtWAT POD activities = (mmol.g-1FWmin-1)2141001. 0VVtWA PPO activities = (U.g-1FW)4、计算、计算5、思考题、思考题5.