实验八化学因素对微生物的影响ppt课件

1、实验八实验八 化学因素对微生物化学因素对微生物的影响的影响一、目的要求一、目的要求o 1 1了解常用化学药品对微生物的作用。了解常用化学药品对微生物的作用。o 2 2学习测定石炭酸系数的方法。学习测定石炭酸系数的方法。二、基本原理二、基本原理 o 重金属离子可与菌体蛋白质结合使之变性或重金属离子可与菌体蛋白质结合使之变性或与某些蛋白的巯基结合而使酶失活，重金属与某些蛋白的巯基结合而使酶失活，重金属盐则是蛋白质沉淀剂，或与代谢产物发生螯盐则是蛋白质沉淀剂，或与代谢产物发生螯合作用而使其变为无效化合物；合作用而使其变为无效化合物；o 有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可以破有机溶剂可使蛋白质及核酸变

2、性，也可以破坏细胞膜透性使内含物外溢；坏细胞膜透性使内含物外溢；o 碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化剂也有杀菌作用；剂也有杀菌作用； 为了比较各种化学消毒剂的杀菌能力，常以石炭为了比较各种化学消毒剂的杀菌能力，常以石炭酸为标准，即将某一消毒剂作不同稀释后，在酸为标准，即将某一消毒剂作不同稀释后，在一定条件下，一定时间内致死全部供试微生物一定条件下，一定时间内致死全部供试微生物的最高稀释浓度，与达到同样效果的石炭酸的的最高稀释浓度，与达到同样效果的石炭酸的最高稀释度的比值，称为

3、这种消毒剂对该种微最高稀释度的比值，称为这种消毒剂对该种微生物的石炭酸系数酚系数）。石炭酸系数越生物的石炭酸系数酚系数）。石炭酸系数越大，说明该消毒剂杀菌能力越强。大，说明该消毒剂杀菌能力越强。三、器材三、器材o 1 1、菌种：大肠杆菌、菌种：大肠杆菌, ,金黄色葡萄球菌；金黄色葡萄球菌；o 2 2、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基, ,牛肉膏牛肉膏蛋白胨液体培养基蛋白胨液体培养基. .o 3 3、溶液或试剂：、溶液或试剂：2.5%2.5%碘酒、碘酒、0.1%0.1%升汞、升汞、5%5%石炭石炭酸、酸、75%75%乙醇乙醇,100%,100%乙醇乙醇,1%,1%来

4、苏尔来苏尔,0.25%,0.25%新洁尔新洁尔灭灭,0.005%,0.005%龙胆紫，龙胆紫，0.05%0.05%龙胆紫，无菌水生理龙胆紫，无菌水生理盐水。盐水。o 4 4、仪器或其他用具：无菌培养皿，无菌滤纸片、仪器或其他用具：无菌培养皿，无菌滤纸片、试管、吸管、三角涂棒、涂布器、镊子、移液试管、吸管、三角涂棒、涂布器、镊子、移液枪等。枪等。四、操作步骤四、操作步骤o 1 1滤纸片法测定化学消毒剂的杀菌作用滤纸片法测定化学消毒剂的杀菌作用 o (1) (1)将已灭菌并冷却至将已灭菌并冷却至5050左右的牛肉左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌平皿中，膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌平皿中，水平放置

5、待凝固。水平放置待凝固。o (2) (2)用无菌吸管吸取用无菌吸管吸取0.2ml0.2ml培养培养1818小时小时的金黄色葡萄球菌菌液加入到上述平板的金黄色葡萄球菌菌液加入到上述平板中，用无菌三角涂棒涂布均匀。中，用无菌三角涂棒涂布均匀。o (3) (3)将已涂布好的平板底皿划分成将已涂布好的平板底皿划分成4 46 6等份，每一等份内标明一种消毒剂的名等份，每一等份内标明一种消毒剂的名称。称。o (4)(4)用无菌镊子将已灭菌的小圆形滤纸片用无菌镊子将已灭菌的小圆形滤纸片D5mmD5mm分别浸入装有各种消毒溶液的试管中浸湿。注分别浸入装有各种消毒溶液的试管中浸湿。注意取出滤纸片时保证过滤纸片所

6、含消毒剂溶液意取出滤纸片时保证过滤纸片所含消毒剂溶液量基本一致，并在试管内壁沥去多余药液。无量基本一致，并在试管内壁沥去多余药液。无菌操作将滤纸片贴在平板相应区域，平板中间菌操作将滤纸片贴在平板相应区域，平板中间贴上浸有无菌生理盐水的滤纸片作为对照。贴上浸有无菌生理盐水的滤纸片作为对照。o (5)(5)将上述贴好滤纸片的含菌平皿，倒置于将上述贴好滤纸片的含菌平皿，倒置于3737温室中培养温室中培养2424小时后，取出测定抑菌圈大小，小时后，取出测定抑菌圈大小，并说明其杀菌强弱。并说明其杀菌强弱。 o 2 2石炭酸系数的测定石炭酸系数的测定o （1 1将将5 5（1 1：2020的石炭酸液按表的

7、石炭酸液按表-1 1配成不同浓度，每管配成不同浓度，每管5ml5ml。o （2 2将待测药物来苏尔先配成将待测药物来苏尔先配成1 1：2020的原液，再按表的原液，再按表-2-2配成不同浓度，每管配成不同浓度，每管 5ml5ml。o （3 3取肉膏蛋白胨液体培养基取肉膏蛋白胨液体培养基3030管，管，1 11515管标明管标明石炭酸的石炭酸的5 5种浓度，每种浓度种浓度，每种浓度3 3管，每管，每3 3管分管分5 5、1010、1515分钟处理，分钟处理，16163030管标明来苏尔的管标明来苏尔的5 5种浓度，种浓度，同样每种浓度同样每种浓度3 3管，每管，每3 3管分管分5 5、1010、

8、1515分钟处理。分钟处理。（4 4在上述不同浓度的石炭酸和来苏尔溶液中，各在上述不同浓度的石炭酸和来苏尔溶液中，各接入接入0 05ml5ml大肠杆菌液，摇匀。注意每管自接种大肠杆菌液，摇匀。注意每管自接种时起在时起在5 5、1010、1515分钟，用同一接种环从各管内分钟，用同一接种环从各管内取一环接入上述已标记的液体培养基试管中。取一环接入上述已标记的液体培养基试管中。（5 5置置3737温室中培养温室中培养 48 48小时，观察并记小时，观察并记录生长情况。生长者溶液混浊，以录生长情况。生长者溶液混浊，以“+”“+”表示；不生长者溶液澄清，以表示；不生长者溶液澄清，以“-”“-”表示。表示。（6 6计算系数值计算系数值 找出在找出在5 5分钟生长，而在分钟生长，而在1010分钟和分钟和1515分钟均不生长的石炭酸及来分钟均不生长的石炭酸及来苏尔的最大稀释度，计算二者的比值。苏尔的最大稀释度，计算二者的比值。例如石炭酸在例如石炭酸在1010分钟内杀死大肠杆菌的分钟内杀死大肠杆菌的最大稀释度是最大稀释度是1 1：7070，来苏尔是，来苏尔是1 1：250250，则来苏尔的石炭酸系数为则来苏尔的石炭酸系数为250/70=3250/70=36 6。五、实验报告五、实验报告o 1 1、结果、结果o （1 1各种各种化学药品对化学药品对金黄色葡萄金黄色葡萄球菌的致死球菌的致死能力能